Рекомбинантные вакцинные штаммы listeria и способы их получения - заявка 2016145464 на патент на изобретение в РФ

1. Рекомбинантный штамм Listeria, при этом указанный рекомбинантный штамм Listeria содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту, указанная нуклеиновая кислота содержит первую открытую рамку считывания, кодирующую рекомбинантный полипептид, содержащий N-терминальный фрагмент белка LLO, слитый с гетерологичным антигеном или его фрагментом, и где указанная рекомбинантная нуклеиновая кислота дополнительно содержит вторую открытую рамку считывания, кодирующую мутантный белок PrfA.
2. Рекомбинантный штамм Listeria по п. 1, где указанная Listeria характеризуется делецией, инактивацией или мутацией в гене prfA.
3. Рекомбинантный штамм Listeria по любому из пп. 1 и 2, где указанный мутантный белок PrfA содержит мутацию D133V.
4. Рекомбинантный штамм Listeria по любому из пп. 2 и 3, где указанный мутантный белок PrfA, кодируемый указанной второй открытой рамкой считывания, комплементирует указанную геномную мутацию, делецию или инактивацию prfA в указанном штамме Listeria или частично восстанавливает функцию PrfA у указанного штамма Listeria.
5. Рекомбинантный штамм Listeria по любому из пп. 1-4, где указанный гетерологичный антиген представляет собой Е7 папилломавируса человека (HPV-E7) или HPV-E6.
6. Рекомбинантный штамм Listeria по любому из пп. 1-5, где указанный N-терминальный фрагмент белка LLO выбран из последовательности, содержащей SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 4.
7. Рекомбинантный штамм Listeria по любому из пп. 1-6, где указанный рекомбинантный штамм Listeria представляет собой рекомбинантный штамм Listeria monocytogenes.
8. Рекомбинантный штамм Listeria по любому из пп. 1-7, где указанный рекомбинантный штамм Listeria был подвергнут пассированию через животное-хозяина перед стадией введения.
9. Рекомбинантный штамм Listeria по любому из пп. 1-8, где указанный рекомбинантный полипептид экспрессируется указанным рекомбинантным штаммом Listeria.
10. Рекомбинантный штамм Listeria по любому из пп. 1-9, где указанный рекомбинантный штамм Listeria содержит плазмиду, которая содержит указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту.
11. Рекомбинантный штамм Listeria по любому из пп. 1-10, где указанная плазмида содержит ген, кодирующий метаболический фермент.
12. Фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантную Listeria по любому из пп. 1-11.
13. Способ индукции иммунного ответа против опухоли или рака у субъекта-человека, при этом способ включает стадию введения указанному субъекту рекомбинантного штамма Listeria, содержащего рекомбинантную нуклеиновую кислоту, при этом указанная нуклеиновая кислота содержит первую открытую рамку считывания, кодирующую рекомбинантный полипептид, содержащий N-терминальный фрагмент белка LLO, слитый с гетерологичным антигеном или его фрагментом, где указанная рекомбинантная нуклеиновая кислота дополнительно содержит вторую открытую рамку считывания, кодирующую мутантный белок PrfA, с индукцией тем самым иммунного ответа против опухоли или рака.
14. Способ по п. 13, где указанная Listeria характеризуется делецией, инактивацией или мутацией в гене prfA.
15. Способ по любому из пп. 13 и 14, где указанный мутантный белок PrfA содержит мутацию D133V.
16. Способ по любому из пп. 14 и 15, где указанный мутантный белок PrfA, кодируемый указанной второй открытой рамкой считывания, комплементирует геномную мутацию, делецию или инактивацию prfA в указанном штамме Listeria или частично восстанавливает функцию PrfA у указанного штамма Listeria.
17. Способ по любому из пп. 14-16, где указанное введение представляет собой внутривенное или пероральное введение.
18. Способ по любому из пп. 14-17, где указанный гетерологичный антиген представляет собой Е7 папилломавируса человека (HPV-E7) или HPV-E6.
19. Способ по любому из пп. 14-18, где указанный N-терминальный фрагмент белка LLO выбран из последовательности, содержащей SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 4.
20. Способ по любому из пп. 14-18, где указанный рекомбинантный штамм Listeria вводят указанному субъекту-человеку в дозе 1×109-3,31×1010 организмов.
21. Способ по п. 20, где указанный рекомбинантный штамм Listeria хранят в замороженном или лиофилизированном состоянии до введения.
22. Способ по любому из пп. 14-20, где указанный рекомбинантный штамм Listeria представляет собой рекомбинантный штамм Listeria monocytogenes.
23. Способ по любому из пп. 14-21, где указанный рекомбинантный штамм Listeria был подвергнут пассированию через животное-хозяина перед стадией введения.
24. Способ по любому из пп. 14-23, где указанный рекомбинантный полипептид экспрессируется указанным рекомбинантным штаммом Listeria.
25. Способ по любому из пп. 14-24, где указанный рекомбинантный штамм Listeria содержит плазмиду, которая кодирует указанный рекомбинантный полипептид.
26. Способ по любому из пп. 14-25, где указанная плазмида содержит ген, кодирующий метаболический фермент.
27. Способ по любому из пп. 14-26, дополнительно включающий стадию бустерного введения указанному субъекту-человеку указанного рекомбинантного штамма Listeria.
28. Способ по любому из пп. 14-27, дополнительно включающий стадию инокуляции указанному субъекту-человеку иммуногенной композиции, которая содержит антиген Е7 или управляет его экспрессией.
29. Способ по любому из пп. 14-28, где указанный иммунный ответ представляет собой противоопухолевый цитотоксический Т-клеточный иммунный ответ.
30. Способ по любому из пп. 14-29, где указанный способ обеспечивает возможность защиты субъекта от опухоли или рака.
31. Способ по любому из пп. 14-29, где указанный способ обеспечивает возможность лечения субъекта от опухоли или рака.
32. Способ по любому из пп. 30-31, где указанный рак представляет собой рак шейки матки, рак головы и шеи (HNC) или анальный рак.
Наверх