Способ снижения содержания днк в ферментационном бульоне - заявка 2016138692 на патент на изобретение в РФ

1. Способ удаления ДНК из ферментационного бульона, содержащего нужный белок и микроорганизм, продуцирующий нужный белок, причем указанный способ включает:
нагревание ферментационного бульона до температуры не ниже 70°C.
2. Способ по п. 1, дополнительно включающий стадии:
b) введения в ферментационный бульон полихлорида алюминия, и
c) отделения выпавших хлопьями микроорганизмов от ферментационного бульона.
3. Способ по п. 2, где нужный белок представляет собой пептид, такой как противомикробный пептид, липопептид или браззеин, или полипептид, такой как фермент.
4. Способ по п. 3, где нужный белок представляет собой фермент, выбранный из: гидролаз, лиаз, протеаз, амилаз, глюкоамилаз, пектиназ, пектатлиаз, целлюлаз, ксиланаз, арабиназ, арабинофуранозидаз, маннаназ, каррагинаназ, ксантаназ, эндоглюканаз, хитиназ, аспарагиназ, липаз, фосфолипаз, кутиназ, лизоцимов, фитаз, пероксидаз, лактаз, глюкозоизомераз, изомераз ксилозы, эстераз и фосфодиэстераз.
5. Способ по п. 4, где фермент представляет собой теплоустойчивый фермент.
6. Способ по п. 5, где теплоустойчивый фермент характеризуется теплоустойчивостью, измеренной как время полужизни при 70°C и pH 7,0, равное не менее чем 30 минут, предпочтительно - не менее чем 40 минут, предпочтительно - не менее чем 50 минут, предпочтительно - не менее чем 60 минут, предпочтительно - не менее чем 70 минут, предпочтительно - не менее чем 80 минут, предпочтительно - не менее чем 90 минут, предпочтительно - не менее чем 100 минут.
7. Способ по п. 5 или 6, где теплоустойчивый фермент представляет собой амилазу или аспарагиназу.
8. Способ по любому из предыдущих пунктов, где микроорганизм представляет собой бактерию или гриб.
9. Способ по п. 8, где микроорганизм представляет собой гриб, выбранный из группы, состоящей из клеток-хозяев Trichoderma и Aspergillus, предпочтительно из Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma reesei, Trichoderma viridel, Aspergillus awamori, Aspergillus fumigatus, Aspergillus foetidus, Aspergillus japonicus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger или Aspergillus oryzae.
10. Способ по п. 8, где микроорганизм представляет собой бактерию из группы, состоящей из грамположительных бактерий, таких как Bacillus, Clostridium, Enterococcus, Geobacillus, Lactobacillus, Lactococcus, Oceanobacillus, Staphylococcus, Streptococcus или Streptomyces, или грамотрицательных бактерий, таких как Campylobacter, Escherichia, Flavobacterium, Fusobacterium, Helicobacter, Ilyobacter, Neisseria, Pseudomonas, Salmonella, или Ureaplasma, таких как Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus circulans, Bacillus clausii, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacillus lautus, Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis или Bacillus thuringiensis.
11. Способ по любому из предыдущих пунктов, где температуру ферментационного бульона поднимают до не ниже чем 75°C, предпочтительно - не ниже чем 80°C.
12. Способ по любому из пп. 1-11, где температуру ферментационного бульона поднимают до температуры в интервале от 70°C до 110°C.
13. Способ по любому из пп. 1-12, где температуру поддерживают при температуре выше 70°C в течении периода времени не менее 10 мин, предпочтительно - не менее 20 мин, предпочтительно - не менее 30 мин, предпочтительно - не менее 40 мин, предпочтительно - не менее 50 мин, предпочтительно - не менее 60 мин, предпочтительно - не менее 70 мин, предпочтительно - не менее 80 мин.
14. Способ по любому из предыдущих пунктов, где полихлорид алюминия вводят в количестве 0,1-10% (вес/вес) в пересчете на кг ферментационного бульона.
15. Способ согласно любому из предыдущих пунктов, где в дополнение к полихлориду алюминия вводят один или несколько флокулянтов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из солей и полимеров.
16. Способ по п. 15, где полимер представляет собой анионный или катионный полимер.
17. Способ согласно любому из предыдущих пунктов, где стадию разделения с) выполняют, используя центрифугирование или фильтрацию.
18. Способ по п. 2, где рН доводят до рН со значением в интервале от рН 2 до рН 11 после введения полихлорида алюминия.
19. Способ по любому из предыдущих пунктов, где уровень содержания ДНК снижают до уровня содержания ниже 1мкг/мл, предпочтительно - ниже 500 нг/мл, предпочтительно - ниже 200 нг/мл, предпочтительно - ниже 100 нг/мл, предпочтительно - ниже 50 нг/мл, предпочтительно - ниже 20 нг/мл, предпочтительно - ниже 10 нг/мл, предпочтительно - ниже 5 нг/мл, предпочтительно - ниже 2 нг/мл, предпочтительно - ниже 1 нг/мл, предпочтительно - ниже 500 пг/мл.
20. Способ по п. 19, где уровень содержания ДНК снижают до уровня ниже предела обнаружения.
21. Способ по п. 20, где предел обнаружения определяют, используя ПЦР-амплификацию любого сегмента геномной ДНК, присутствующего в единственном числе в гаплоидном геноме, вслед за которой проводят гель-электрофорез и окрашивание бромистым этидием, при этом окрашивание не выявляет каких-либо видимых полос.
22. Способ по любому из предыдущих пунктов, где ферментационный бульон можно разбавлять водой вплоть до 2000% (вес/вес).
Наверх