Молекулы нуклеиновой кислоты sec23, которые придают устойчивость к вредителям из отряда жесткокрылых и полужесткокрылых - заявка 2016144140 на патент на изобретение в РФ

1. Выделенный полинуклеотид, включающий по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность(и), выбранную из группы, состоящей из:
SEQ ID NO:1, комплемента SEQ ID NO:1, фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов SEQ ID NO:1, комплемента фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов SEQ ID NO:1, нативной кодирующей последовательности организма Diabrotica, включающей SEQ ID NO:1, комплемента нативной кодирующей последовательности организма Diabrotica, включающей SEQ ID NO:1, нативной некодирующей последовательности организма Diabrotica, которая транскрибируется в нативную молекулу РНК, включающую SEQ ID NO:1, комплемента нативной некодирующей последовательности организма Diabrotica, которая транскрибируется в нативную молекулу РНК, включающую SEQ ID NO:1, фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов нативной кодирующей последовательности организма Diabrotica, включающей SEQ ID NO:1, комплемента фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов нативной кодирующей последовательности организма Diabrotica, включающей SEQ ID NO:1, фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов нативной некодирующей последовательности организма Diabrotica, которая транскрибируется в нативную молекулу РНК, включающую SEQ ID NO:1, и комплемента фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов нативной некодирующей последовательности организма Diabrotica, которая транскрибируется в нативную молекулу РНК, включающую SEQ ID NO:1; и
SEQ ID NO:81, комплемента SEQ ID NO:81, фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов SEQ ID NO:81, комплемента фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов SEQ ID NO:81, нативной кодирующей последовательности организма Euschistus heros, включающей SEQ ID NO:81, комплемента нативной кодирующей последовательности организма E. heros, включающей SEQ ID NO:81, нативной некодирующей последовательности организма E. heros, которая транскрибируется в нативную молекулу РНК, включающую SEQ ID NO:81, комплемента нативной некодирующей последовательности организма E. heros, которая транскрибируется в нативную молекулу РНК, включающую SEQ ID NO:81, фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов нативной кодирующей последовательности организма E. heros, включающей SEQ ID NO:81, комплемента фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов нативной кодирующей последовательности организма E. heros, включающей SEQ ID NO:81, фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов нативной некодирующей последовательности организма E. heros, которая транскрибируется в нативную молекулу РНК, включающую SEQ ID NO:81, и комплемента фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов нативной некодирующей последовательности организма E. heros, которая транскрибируется в нативную молекулу РНК, включающую SEQ ID NO:81.
2. Полинуклеотид по п.1, где полинуклеотид включает больше одной нуклеотидной последовательности, выбранной из группы.
3. Полинуклеотид по п.1, где полинуклеотид дополнительно включает нуклеотидную последовательность, которая транскрибируется в клетке-хозяине с получением молекулы РНК.
4. Полинуклеотид по п.3, где дополнительная нуклеотидная последовательность транскрибируется с получением молекулы иРНК.
5. Полинуклеотид по п.1, где нуклеотидная последовательность имеет длину по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, приблизительно 15-30, по меньшей мере 26, по меньшей мере 27, по меньшей мере 28, по меньшей мере 29, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 110, по меньшей мере 120, по меньшей мере 130, по меньшей мере 140, по меньшей мере 150, по меньшей мере 160, по меньшей мере 170, по меньшей мере 180, по меньшей мере 190, по меньшей мере 200 или более смежных нуклеотидов.
6. Полинуклеотид по п.1, где по меньшей мере одна нуклеотидная последовательность(и) функционально связана с гетерологичным промотором.
7. Вектор для трансформации растения, включающий полинуклеотид по п.1.
8. Полинуклеотид по п.1, где организм Diabrotica выбран из группы, состоящей из D. v. virgifera LeConte; D. barberi Smith and Lawrence; D. u. howardi; D. v. zeae; D. balteata LeConte; D. u. tenella; и D. u. undecimpunctata Mannerheim.
9. Полинуклеотид по п.1, где полинуклеотид является молекулой рибонуклеиновой кислоты (РНК).
10. Полинуклеотид по п.1, где полинуклеотид является молекулой дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК).
11. Полинуклеотид по п.1, дополнительно включающий по меньшей мере один ген, представляющий интерес.
12. Полинуклеотид по п.11, где представляющий интерес ген кодирует полипептид из Bacillus thuringiensis, выбранный из группы, состоящей из Cry3, Cry34, и Cry35.
13. Двухцепочечная молекула рибонуклеиновой кислоты, полученная при экспрессии полинуклеотида по п.10.
14. Двухцепочечная молекула рибонуклеиновой кислоты по п.13, где контакт молекулы с вредителем из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых ингибирует экспрессию эндогенной нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотидную последовательность, специфично комплементарную нуклеотидной последовательности по п.1.
15. Двухцепочечная молекула рибонуклеиновой кислоты по п.13, где контакт молекулы с вредителем из отряда жесткокрылых вызывает гибель или ингибирует рост, репродукцию и/или питание вредителя из отряда жесткокрылых и полужесткокрылых.
16. Двухцепочечная молекула рибонуклеиновой кислоты по п.13, включающая первую, вторую и третью нуклеотидную последовательность,
где первая нуклеотидная последовательность включает полинуклеотид по п.1,
где третья нуклеотидная последовательность связана с первой нуклеотидной последовательностью второй нуклеотидной последовательностью, и
где третья нуклеотидная последовательность по существу обратно комплементарна первой нуклеотидной последовательности, причем части молекулы рибонуклеиновой кислоты, включающей каждую из первой и третьей нуклеотидных последовательностей, гибридизуются друг с другом с образованием двухцепочечной рибонуклеотидной молекулы.
17. Полинуклеотид по п.9, где полинуклеотид выбран из группы, состоящей из двухцепочечной молекулы рибонуклеиновой кислоты и одноцепочечной молекулы рибонуклеиновой кислоты длиной от приблизительно 15 и до приблизительно 30 нуклеотидов.
18. Молекула рибонуклеиновой кислоты, полученная при экспрессии полинуклеотида по п.10, где молекула рибонуклеиновой кислоты выбрана из группы, состоящей из двухцепочечной молекулы рибонуклеиновой кислоты и одноцепочечной молекулы рибонуклеиновой кислоты длиной от приблизительно 15 и до приблизительно 30 нуклеотидов.
19. Вектор для трансформации растений, включающий полинуклеотид по п.1, где по меньшей мере одна нуклеотидная последовательность(и) функционально связана с гетерологичным промотором, функциональным в растительной клетке.
20. Клетка, трансформированная полинуклеотидом по п.1.
21. Клетка по п.20, где клетка является прокариотической клеткой.
22. Клетка по п.20, где клетка является эукариотической клеткой.
23. Клетка по п.20, где клетка является растительной клеткой.
24. Растение, трансформированное полинуклеотидом по п.1.
25. Семя растения по п.24, где семя включает полинуклеотид.
26. Растение по п.24, где по меньшей мере одна нуклеотидная последовательность(и) экспрессируется в растении в виде двухцепочечной молекулы рибонуклеиновой кислоты.
27. Клетка по п.23, где клетка является клеткой Zea mays.
28. Растение по п.24, где растением является Zea mays.
29. Клетка по п.23, где клетка является клеткой Glycine max.
30. Растение по п.24, где растением является Glycine max.
31. Клетка по п.23, где клетка является клеткой Arabidopsis thaliana.
32. Растение по п.24, где растением является Arabidopsis thaliana.
33. Растение по п.24, где по меньшей мере одна нуклеотидная последовательность(и) экспрессируется в растении в виде молекулы рибонуклеиновой кислоты, при этом молекула рибонуклеиновой кислоты ингибирует экспрессию эндогенной нуклеотидной последовательности у вредителя из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых, специфично комплементарной по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности(ям) при поглощении вредителем части растения.
34. Композиция, включающая молекулу рибонуклеиновой кислоты по п.18 и приманку, которая стимулирует питание у вредителя из отряда жесткокрылых и полужесткокрылых.
35. Композиция по п.34, где приманка является приманкой, содержащей кукурбитацин.
36. Композиция по п.34, где молекула рибонуклеиновой кислоты является двухцепочечной молекулой рибонуклеиновой кислоты.
37. Полинуклеотид по п.1, дополнительно включающий более чем одну нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO:1; комплемента SEQ ID NO:1; SEQ ID NO:3; комплемента SEQ ID NO:3; SEQ ID NO:4; комплемента SEQ ID NO:4; SEQ ID NO:5; комплемента SEQ ID NO:5; SEQ ID NO:81; комплемента SEQ ID NO:81; SEQ ID NO:82; комплемента SEQ ID NO:82; SEQ ID NO:83; комплемента SEQ ID NO:83; фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов любой из SEQ ID NO:1, 3-5 и 81-83; комплемента фрагмента длиной по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов любой из SEQ ID NO:1, 3-5 и 81-83; нативной кодирующей последовательности организма Diabrotica или организма Euschistus heros, включающей любой из SEQ ID NO:1, 3-5 и 81-83; комплемента нативной кодирующей последовательности организма Diabrotica или организма E. heros, включающей любой из SEQ ID NO:1, 3-5 и 81-83; нативной некодирующей последовательности организма Diabrotica или организма E. heros, которая транскрибируется в нативную молекулу РНК, включающую любой из SEQ ID NO:1, 3-5 и 81-83; и комплемента нативной некодирующей последовательности организма Diabrotica или организма E. heros, которая транскрибируется в нативную молекулу РНК, включающую любой из SEQ ID NO:1, 3-5 и 81-83.
38. Коммерческий продукт, полученный из растения по п.24, где коммерческий продукт включает обнаружимое количество полинуклеотида по п.1.
39. Способ контроля популяции вредителя из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых, включающий получение средства, включающего двухцепочечную молекулу рибонуклеиновой кислоты, которая функционирует при контакте с вредителем из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых, вызывая ингибирование биологической функции у вредителя из отряда жесткокрылых и полужесткокрылых, где средство включает полинуклеотид по п.1.
40. Способ контроля популяции вредителя из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых, включающий:
получение средства, включающего первую и вторую полинуклеотидную последовательность, которая функционирует при контакте с вредителем из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых, вызывая ингибирование биологической функции у вредителя из отряда жесткокрылых, где первая полинуклеотидная последовательность включает область, которая демонстрирует от приблизительно 90% до приблизительно 100% идентичности последовательности с приблизительно от 15 до приблизительно 30 смежных нуклеотидов из SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:81, и где первая полинуклеотидная последовательность специфично гибридизуется со второй полинуклеотидной последовательностью.
41. Способ по п.40, где первая и вторая полинуклеотидные последовательности отделены в средстве линкерной последовательностью, в одной молекуле нуклеиновой кислоты.
42. Способ контроля популяции вредителя из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых, включающий:
предоставление в растении-хозяине вредителя из отряда жесткокрылых и полужесткокрылых трансформированной растительной клетки, включающей полинуклеотид по п.1, где полинуклеотид экспрессируется с получением молекулы рибонуклеиновой кислоты, которая функционирует при контакте с вредителем из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых, принадлежащим к популяции, вызывая ингибирование экспрессии последовательности-мишени у вредителя из отряда жесткокрылых и полужесткокрылых, и приводит к уменьшению роста вредителя или популяции вредителя из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых по сравнению с ростом на растении-хозяине таких же видов, не содержащим трансформированной растительной клетки.
43. Способ по п.42, где молекула рибонуклеиновой кислоты является двухцепочечной молекулой рибонуклеиновой кислоты.
44. Способ по п.42, где популяция вредителя из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых уменьшена по сравнению с популяцией вредителя из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых, поражающей растение-хозяин таких же видов, не содержащих трансформированную растительную клетку.
45. Способ контроля поражения растения вредителем из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых в растении, включающий предоставление в питании вредителю из отряда жесткокрылых и полужесткокрылых полинуклеотида по п.1.
46. Способ по п.45, где питание включает растительную клетку, трансформированную для экспрессии полинуклеотида по п.1.
47. Способ контроля поражения растения вредителем из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых в растении, включающий предоставление в или вокруг среды обитания вредителя из отряда жесткокрылых и полужесткокрылых композиции по п.34.
48. Способ по п.47, где композиция включает двухцепочечную молекулу рибонуклеиновой кислоты.
49. Способ повышения урожая культуры, включающий:
введение полинуклеотида по п.1 в растение с получением трансгенного растения; и
культивирование трансгенного растения для обеспечения экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты, включающей по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность(и); где экспрессия молекулы нуклеиновой кислоты ингибирует поражение или рост вредителя из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых и потерю урожая в результате поражения вредителем из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых.
50. Способ по п.49, где культурой является Zea mays, Glycine max или Arabidopsis.
51. Способ по п.49, где молекула нуклеиновой кислоты является молекулой РНК, которая подавляет по меньшей мере первый ген-мишень в организме вредителя из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых, который контактировал с частью трансгенного растения.
52. Способ получения трансгенной растительной клетки, включающий:
трансформацию растительной клетки вектором, включающим полинуклеотид по п.1, функционально связанный с промотором и последовательностью терминации транскрипции;
культивирование трансформированной растительной клетки при условиях, достаточных для обеспечения развития культуры растительной клетки, включающей множество трансформированных растительных клеток;
отбор трансформированных растительных клеток, которые содержат по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность(и), интегрированную в их геном;
скрининг трансформированных растительных клеток для экспрессии молекулы рибонуклеиновой кислоты, кодируемой по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью(ями); и
отбор растительной клетки, которая экспрессирует молекулу рибонуклеиновой кислоты.
53. Способ получения устойчивого к вредителю трансгенного растения, включающий:
предоставление трансгенной растительной клетки, полученной способом по п.52; и регенерацию трансгенного растения из трансгенной растительной клетки, где экспрессия молекулы рибонуклеиновой кислоты, кодируемой по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью(ями), является достаточной для модуляции экспрессии гена-мишени у вредителя из отряда жесткокрылых или полужесткокрылых, который контактирует с трансгенным растением.
Наверх