Улучшенные способы производства средств адоптивной клеточной терапии - заявка 2016145968 на патент на изобретение в РФ

1. Способ производства терапевтического средства на основе Т-клеток, включающий:
a) получение популяции клеток, которая содержит Т-клетки и антиген-презентирующие клетки (APC);
b) культивирование популяции клеток в среде для культивирования клеток, содержащей i) один или более цитокинов, ii) антитело к CD3 или его CD3-связывающий фрагмент и iii) антитело к CD28 или его CD28-связывающий фрагмент, B7-1 или его CD28-связывающий фрагмент, или B7-2 или его CD28-связывающий фрагмент, при этом культивирование активирует и стимулирует Т-клетки;
c) трансдукцию популяции активированных клеток с помощью вирусного вектора и
d) культивирование популяции клеток в ростовой среде для клеток для размножения трансдуцированных Т-клеток;
с производством тем самым терапевтического средства на основе T-клеток.
2. Способ по п. 1, где:
(a) популяцию клеток получают из периферической крови, мононуклеарных клеток периферической крови, костного мозга, ткани лимфатического узла, пуповинной крови, ткани тимуса, ткани из очага инфекции, асцитов, плеврального выпота, ткани селезенки или опухолей;
(b) Т-клетки получают из периферической крови, мононуклеарных клеток периферической крови, костного мозга, ткани лимфатического узла, пуповинной крови, ткани тимуса, ткани из очага инфекции, асцитов, плеврального выпота, ткани селезенки, опухолей или линии T-клеток;
(с) APC получают из периферической крови, мононуклеарных клеток периферической крови, костного мозга, ткани лимфатического узла, пуповинной крови, ткани тимуса, ткани из очага инфекции, асцитов, плеврального выпота, ткани селезенки или опухолей; или
(d) популяция клеток содержит мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC).
3. Способ по любому из пп. 1-2, где:
(a) сбор или получение популяции клеток включает лейкаферез;
(b) выделение популяции клеток включает осаждение;
(c) выделение популяции клеток включает осаждение, которое включает градиент FICOLL™ или PERCOLL™;
(d) выделение популяции клеток включает осаждение, которое выполняют с помощью полуавтоматической проточной центрифуги; или
(e) выделение популяции клеток включает осаждение, которое выполняют с помощью Cobe 2991 Cell Processor, Cell Saver 5+ или полуавтоматической проточной центрифуги Elutra.
4. Способ по любому из пп. 1-2, где способ дополнительно включает:
(a) промывку популяции клеток в буфере или среде для культивирования клеток;
(b) промывку популяции клеток в ростовой среде для T-клеток (TCGM), содержащей один или более цитокинов;
(c) промывку популяции клеток в ростовой среде для T-клеток (TCGM), содержащей один или более цитокинов, выбранных из группы, включающей: IL-2, IL7, IL-15, IL-9 и IL-21;
(d) промывку популяции клеток в ростовой среде для T-клеток (TCGM), содержащей IL-2; или
(e) промывку популяции клеток в ростовой среде для T-клеток (TCGM), содержащей 250 МЕ/мл IL-2.
5. Способ по п. 1, где:
(a) популяцию клеток культивируют с растворимым антителом к CD3 и растворимым антителом к CD28;
(b) популяцию клеток культивируют с растворимым антителом к CD3 при концентрации приблизительно 50 нг/мл и растворимым антителом к CD28; или
(c) популяцию клеток культивируют с растворимым антителом к CD3 и растворимым антителом к CD28 при концентрации приблизительно 50 нг/мл.
6. Способ по п. 1, где:
(a) популяцию клеток на стадии b) культивируют в течение от приблизительно 12 часов до приблизительно 48 часов перед трансдукцией;
(b) популяцию клеток на стадии b) трансдуцируют во время активации;
(c) популяцию клеток на стадии b) культивируют в течение от приблизительно 1 часа до приблизительно 12 часов перед трансдукцией;
(d) популяцию клеток на стадии b) культивируют в течение от приблизительно 16 часов до приблизительно 32 часов перед трансдукцией;
(e) популяцию клеток на стадии b) культивируют в течение по меньшей мере 18 часов перед трансдукцией;
(f) популяцию клеток на стадии b) культивируют в течение по меньшей мере 24 часов перед трансдукцией;
(g) популяцию клеток на стадии d) трансдуцируют с помощью ретровирусного вектора; или
(h) популяцию клеток на стадии d) трансдуцируют с помощью лентивирусного вектора.
7. Способ по п. 5 или 6, где для трансдукции 1 x 108 высеянных клеток применяют от приблизительно 1 x 109 TU до приблизительно 2 x 109 TU вирусного вектора.
8. Способ по любому из пп. 1, 2, 5, 6, где:
(a) вирусный вектор разводят до 20% объем/объем от общего объема культуры;
(b) вирусный вектор разводят до приблизительно 40% - приблизительно 50% объем/объем от общего объема культуры;
(c) популяцию клеток подвергают трансдукции в течение от приблизительно 18 до приблизительно 48 часов;
(d) популяцию клеток подвергают трансдукции в течение от приблизительно 18 до приблизительно 36 часов;
(e) популяцию клеток подвергают трансдукции в течение приблизительно 24 часов;
(f) вирусный вектор содержит полинуклеотид, кодирующий химерный антигенный рецептор.
9. Способ по п. 8, где CAR содержит
a) внеклеточный домен, который связывает антиген, выбранный из группы, включающей фолатный рецептор альфа, 5T4, αvβ6-интегрин, BCMA, B7-H3, B7-H6, CAIX, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD70, CD79a, CD79b, CD123, CD138, CD171, CEA, CSPG4, EGFR, семейство EGFR, в том числе ErbB2 (HER2), EGFRvIII, EGP2, EGP40, EPCAM, EphA2, EpCAM, FAP, фетальный AchR, FRα, GD2, GD3, 'глипикан-3 (GPC3), HLA-A1+MAGE1, HLA-A2+MAGE1, HLA-A3+MAGE1, HLA-A1+NY-ESO-1, HLA-A2+NY-ESO-1, HLA-A3+NY-ESO-1, IL-11Rα, IL-13Rα2, лямбда-цепь, Lewis-Y, каппа-цепь, мезотелин, Muc1, Muc16, NCAM, лиганды NKG2D, NY-ESO-1, PRAME, PSCA, PSMA, ROR1, SSX, сурвивин, TAG72, TEM и VEGFR2;
b) трансмембранный домен, полученный из полипептида, выбранного из группы, включающей CD8α; CD4, CD28, CD45, PD1 и CD152;
c) один или более внутриклеточных доменов передачи костимулирующего сигнала, выбранных из группы, включающей CD28, CD54 (ICAM), CD134 (OX40), CD137 (41BB), CD152 (CTLA4), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1) и CD278 (ICOS); и
d) домен передачи сигнала CD3ζ.
10. Способ по п. 9, где:
(a) внеклеточный домен содержит антитело или антиген-связывающий фрагмент, которые связывают антиген;
(b) трансмембранный домен получен из CD8α или CD28;
(c) один или более доменов передачи костимулирующего сигнала выбраны из группы, включающей CD28, CD134 и CD137;
(d) CAR дополнительно содержит полипептид шарнирной области;
(e) CAR дополнительно содержит полипептид шарнирной области IgG1 или CD8α;
(f) CAR дополнительно содержит сигнальный пептид; или
(g) CAR дополнительно содержит сигнальный полипептид тяжелой цепи IgG1, сигнальный полипептид CD8α или сигнальный полипептид альфа-субъединицы рецептора GM-CSF человека.
11. Способ по п. 1, где:
(a) популяцию клеток на стадии d) культивируют для размножения в течение от приблизительно 5 до приблизительно 8 дней;
(b) популяцию клеток на стадии d) культивируют для размножения в течение от приблизительно 5 дней до приблизительно 8 дней в пакете для культивирования клеток;
(c) популяцию клеток на стадии d) культивируют для размножения в течение приблизительно 5 дней в пакете для культивирования клеток, а затем культивируют в течение приблизительно 3 дней в биореакторе; или
(d) популяцию клеток на стадии d) культивируют для размножения в течение от приблизительно 5 дней до приблизительно 8 дней в биореакторе.
12. Способ по п. 11, где биореактор представляет собой биореактор WAVE или биореактор GREX.
13. Способ по п. 1, где:
(a) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 50 раз в ходе культивирования на стадии d);
(b) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 100 раз в ходе культивирования на стадии d);
(c) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 300 раз в ходе культивирования на стадии d);
(d) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 400 раз в ходе культивирования на стадии d);
(e) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 500 раз в ходе культивирования на стадии d); или
(f) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 600 раз в ходе культивирования на стадии d).
14. Композиция, содержащая произведенные Т-клетки по любому из пп. 1-13 и физиологически приемлемый наполнитель.
15. Способ лечения новообразования у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту терапевтического средства на основе T-клеток по п. 14.
Наверх