Штамм escherichia coli bl21 de3 pcoldiii-1269a, способ получения белка crm197 и вакцинная композиция на его основе - заявка 2016147721 на патент на изобретение в РФ

1. Штамм Escherichia coli BL21 DE3 pColdIII-1269A - продуцент белка CRM197.
2. Способ получения белка CRM197, включающий в себя культивирование штамма-продуцента Escherichia coli, выделение телец включения обработкой клеток ультразвуком с последующим центрифугированием, очистку белка последовательно хроматографией и гель-фильтрацией на Superdex-200, отличающийся тем, что культивирование проводили с использованием в качестве штамма-пролуцента штамма Escherichia coli BL21 DE3 pColdIII-1269A, хроматографию проводили на анионите Sepharose FF 16/10 (GE, США), предварительно уравновешенной буферным раствором, содержащим 10-50 мМ трис-HCl при рН 7,5-8,0, а элюцию осуществляли линейным градиентом NaCl, а гель-фильтрацию осуществляли на сорбенте Superdex S-100, предварительно уравновешенным натрий-фосфатным буферным раствором при рН 8,0.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве натрий-фосфатным буферным раствором сорбент уравновешивали 50 мМ натрий-фосфатным буферным раствором, содержащим дополнительно 2% сахароза и 0,1% полисорбат 20.
4. Конъюгированная вакцина, содержащая конъюгат белка CRM197 и вспомогательные вещества, отличающаяся тем, что в качестве активного начала она содержит собой конъюгат белка CRM197, полученного по п. 2 и углеводной части, представляющей собой синтетические повторяющиеся последовательности олигосахаридов, спейсерированных с бычьим сывороточным альбумином и биотином в соотношении олигосахаридный лиганд - белок является 10-20:1.
5. Конъюгированная вакцина по п. 4, отличающаяся тем, что молярное соотношение олигосахаридный лиганд - белок составляет 15:1.
6. Конъюгированная вакцина по п. 4, отличающаяся тем, что в качестве олигосахаридов она содержит олигоманнуронозиды, соответствующие поверхностным углеводам P. Aeruginosa.
7. Конъюгированная вакцина по п. 6, отличающаяся тем, что в качестве олигоманнуронозидов она содержит β-(1→4)-олигоманнуронозиды.
8. Конъюгированная вакцина по п. 4, отличающаяся тем, что в качестве олигосахаридов она содержит олигоглюкозиды, соответствующие поверхностным углеводам грибов рода Candida и рода Aspergillus.
9. Конъюгированная вакцина по п. 8, отличающаяся тем, что в качестве олигоглюкозидов она содержит β-(1→3)-глюкоолигосахариды.
10. Конъюгированная вакцина по п. 4, отличающаяся тем, что в качестве вспомогательных веществ она содержит гидрофосфат додекагидрат натрия, дигидрофосфат дигидрат натрия, хлорид натрия, хлорид калия и воду.
11. Конъюгированная вакцина по пп. 4 или 6, или 8, отличающаяся тем, что содержание активного начала в вакцине составляет от 0,2 до 0,5% масс.; гидрофосфата додекагидрата натрия - 0,3-0,4%; дигидрофосфата дигидратка натрия - 0,03-0,04% масс; хлорида натрия - 0.,8-0,9% масс., вода - остальное.
Наверх