Способ сорбции белка на поверхность стекла - заявка 2016149013 на патент на изобретение в РФ

1. Способ сорбции белка на стеклянную подложку, включающий предварительную очистку стекла, промывку фосфатно-солевым буфером, обработку поверхности стекла полиэлектролитом, промывку фосфатно-солевым буфером, сорбцию белка из раствора, оценку наличия сорбированного белка, отличающийся тем, что в качестве стеклянной подложки выбирают внутреннюю поверхность по крайней мере двух стеклянных капилляров, при этом для очистки, обработки, промывки и сорбции прокачивают жидкости через капилляр, очистку стекла осуществляют перекисно-аммиачным буфером, в качестве раствора белка выбирают раствор пероксидазы хрена в концентрации 0,03-0,07 мкг/мл, после сорбции белка осуществляют промывку внутренней поверхности капилляра фосфатно-солевым буфером до момента, когда при добавлении в промывные воды хромогенного субстрата, содержащего 3,3’,5,5’-тетраметилбензидини пероксид водорода, будет отсутствовать окраска, для оценки наличия сорбированного белка обрабатывают внутреннюю поверхность по крайней мере одного стеклянного капилляра хромогенным субстратом, содержащим 3,3’,5,5’-тетраметилбензидин и пероксид водорода, и по наличию голубой окраски капилляра судят о наличии сорбированного белка.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве полиэлектролита используют катионный полиэлектролит в концентрации 0,1-1 мг/мл, выбранный из: полиэтиленимина с молекулярной массой 600-1000 КДа, полиамингидрохлорида с молекулярной массой 50 КДа, полидиаллилдиметиламмоний хлорида с молекулярной массой меньше 100 КДа.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что после промывки проводят обработку анионным полиэлектролитом – полистиролсульфонатом натрия с молекулярной массой 70 КДа в концентрации 0,1 - 1 мг/мл, и повторную промывку.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве полиэлектролита используют анионный полиэлектролит полистиролсульфонат натрия с молекулярной массой 70 КДа в концентрации 0,1 - 1 мг/мл.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что для прокачки жидкостей используют перистальтический насос с функцией циклического дозирования, или шприцевую помпу, или шприц.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что при предварительной очистке прокачивают перекисно-аммиачный буфер на скорости 350-500 мкл/мин в течение 10 мин.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что при промывке после предварительной очистки прокачивают фосфатно-солевой буфер на скорости 500-1000 мкл/мин до нейтральной среды.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что при обработке поверхности стекла прокачивают полиэлектролит на скорости 350-500 мкл/мин в течение 10 мин.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что при промывке после обработки полиэлектролитом прокачивают фосфатно-солевой буфер на скорости 350 мкл/мин в течение 10 мин.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что при сорбции белка прокачивают раствор белка на скорости 200 мкл/мин в течение 5 мин.
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что при промывке после сорбции белка прокачивают фосфатно-солевой буфер на скорости 350 мкл/мин.
Наверх