Способ получения полипептидов - заявка 2016149411 на патент на изобретение в РФ

1. Промотор цитомегаловируса (ЦМВ) человека, который имеет в нуклеотидном положении -41 и/или -179 относительно участка инициации транскрипции нуклеотид G.
2. Промотор, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO 02 или SEQ ID NO 03.
3. Нуклеиновая кислота, отличающаяся тем, что включает нуклеиновую кислоту последовательности SEQ ID NO 02 или SEQ ID NO 03 и обладает силой промотора по меньшей мере 80% относительно основного немедленно-раннего промотора ЦМВ человека последовательности SEQ ID NO 01, когда функционально связана с нуклеиновой кислотой SEQ ID NO 04.
4. Способ получения полипептида, отличающийся тем, что включает следующие стадии, согласно которым:
a) трансфицируют эукариотическую клетку нуклеиновой кислотой, включающей кассету экспрессии, содержащую первую нуклеиновую кислоту последовательности SEQ ID NO 02 или SEQ ID NO 03, функционально связанную со второй нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид,
b) отбирают клетку, трансфицированную на стадии а),
c) культивируют клетку, отобранную на стадии b),
d) выделяют полипептид из клетки или культуральной среды,
и таким образом получают полипептид.
5. Способ по п. 4, где получение представляет собой получение в крупных масштабах.
6. Способ по п. 4, где полипептид представляет собой легкую цепь иммуноглобулина или тяжелую цепь иммуноглобулина, или их вариант, или их фрагмент, или их слияние.
7. Способ по п. 4, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота включает дополнительную кассету экспрессии, кодирующую селективный маркер.
8. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанная эукариотическая клетка является клеткой млекопитающего.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что указанная клетка млекопитающего представляет собой клетку яичников китайского хомячка (СНО, от англ. Chinese hamster ovary), клетку почки новорожденного хомяка (ВНК, от англ. baby hamster kidney), клетку почки эмбриона человека (НЕК, от англ. human embryonic kidney), Sp2/0 клетку или Per.С6® клетку.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что указанная клетка млекопитающего представляет собой клетку СНО или клетку НЕК.
11. Способ по любому из пп. 4-10, отличающийся тем, что указанный полипептид представляет собой иммуноглобулин, или фрагмент иммуноглобулина, или конъюгат иммуноглобулина.
12. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанный селективный маркер представляет собой дигидрофолатредуктазу, аминогликозидфосфотрансферазу или гигромицин-фосфотрансферазу.
13. Применение промотора последовательности SEQ ID NO 02 или SEQ ID NO 03 для получения полипептида.
14. Клетка, включающая промотор по п. 1 или нуклеиновую кислоту по п. 3.
Наверх