Способ получения биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из вартонова студня пуповины человека - заявка 2016149581 на патент на изобретение в РФ

Способ получения биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из Вартонова студня пуповины человека, включающий в себя выделение из ткани пуповины после операции «кесарево сечение» первичной культуры мезенхимальных стволовых клеток из Вартонова студня, причем при выделении мезенхимальных стволовых клеток пуповину освобождают от остатков крови и промывают в растворе Версена с добавлением антибиотиков 100 Ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 0,25 мкг/мл амфотерицина в течение 1 ч при комнатной температуре на шейкере, вены канюлируют с обеих сторон и промывают физиологическим раствором (0,9%), затем осуществляют механическое и ферментативное воздействие на ткани пуповины и собирают отделившиеся клетки, отличающийся тем, что дезагрегацию ткани проводят раствором, содержащим 0,1% коллагеназы 2 типа и 0,15% коллагеназы 4 типа, приготовленным на среде DMEM\F12 в соотношении 1:1, инкубируют при 37°С в течение 30 мин, собирают отделившиеся клетки, центрифугируют при 800 об/мин в течение 15 мин, получая осадок клеток, который ресуспендируют в ростовой среде DMEM\F12, содержащей 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, 100 Ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, ресуспендируют осадок клеток в ростовой среде DMEM\F12 в соотношении 1:1, переносят в культуральные флаконы и культивируют в атмосфере, содержащей 5% CO2 до формирования 3/4 монослоя, меняя ростовую среду 3 раза в неделю, и при достижении 3/4 монослоя клетки пересевают в соотношении 1:3, причем после 1 пассажа часть клеток используют для выявления наличия в культуре вирусов СПИД, гепатита В и С и микоплазмы методом ПЦР и, в случае позитивного анализа, на эти инфекции культура бракуется.
Наверх