Способ получения минерализованных композитных микроскаффолдов для регенерации костной ткани - заявка 2016152064 на патент на изобретение в РФ

1. Способ получения минерализованного композитного микроскаффолда, включающий следующие стадии:
а) подготовку водного раствора фиброина шелка, путем растворения фиброина в смеси CaCl2:C2H5OH:H2O при соотношении компонентов смеси, обеспечивающем растворение в ней фиброина, в течение 5-7 часов при нагревании до 70±5°C и последующего диализа против воды, доведение полученного раствора водой до концентрации 20-30 мг/мл, при этом фиброина берут в количестве 100-150 мг/мл смеси;
б) подготовку водного раствора желатина, путем растворения сухого желатина в воде из расчета 20-30 мг/мл;
в) формирование композитного скаффолда путем заморозки в течение 6-8 суток при температуре - 18-25°C смеси растворов, полученных на стадиях а) и б), смешанных в объемном соотношении 7:3 с добавлением 0,8-1,2 об % ДМСО и последующей разморозки и обработки 96% этанолом для формирования β-складчатой структуры;
г) получение композитных микроскаффолдов путем криоизмелчения скаффолда, полученного на стадии в) в 96% этаноле с использованием диспергатора и сортировки полученных фрагментов скаффолда с получением микроскаффолдов размером 100-250 мкм;
д) получение минерализованных композитных микроскаффолдов путем погружения полученных на этапе г) микроскаффолдов сначала в водный раствор, содержащий 684 мМ NaCl, 9,5 мМ CaCl2, 3,5 мМ MgCl2, 21 мМ NaHCO3 и 4 мМ Na2HPO4, рН 4,0, на 6-14 часов и затем погружение в водный раствор, содержащий 684 мМ NaCl, 9,5 мМ CaCl2, 0,7 мМ MgCl2, 10,5 мМ NaHCO3 и 4 мМ Na2HPO4, рН 4,0, на 1-3 суток с последующим высушиванием полученного продукта.
2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что смесь CaCl2:C2H5OH:H2O берут в молярном соотношении компонентов 1:2:8.
3. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что для формирования β-складчатой структуры обработку размороженного скаффолда 96% этанолом осуществляют не менее 10 часов.
4. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что сортировку полученных фрагментов скаффолда осуществляют посредством последовательного пропускания суспензии микроскаффолдов через сита с диаметром отверстий 500, 250 и 100 мкм.
5. Применение минерализованного композитного микроскаффолда, полученного способом по п. 1, для восстановления костной ткани.
Наверх