Препарат, содержащий фактор viii и пептиды фактора фон виллебранда - заявка 2016152151 на патент на изобретение в РФ

1. Композиция, содержащая комплекс Фактора VIII и один или несколько пептидов Фактора фон Виллебранда, где пептиды Фактора фон Виллебранда содержат по меньшей мере аминокислоты 764-1035 и 1691-1905 из SEQ ID NO: 1, но не содержат аминокислоты 2255-2645 из SEQ ID NO: 1.
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что пептиды Фактора фон Виллебранда являются фрагментами Фактора фон Виллебранда.
3. Композиция по п.2, отличающаяся тем, что фрагменты Фактора фон Виллебранда содержат аминокислоты 764-1905 из SEQ ID NO: 1.
4. Композиция по п.2, отличающаяся тем, что фрагменты Фактора фон Виллебранда имеют аминокислотную последовательность, которая соответствует аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, начиная с аминокислоты 764 и заканчивая между аминокислотами 1905 и 2153, и содержит до 10 делеций, вставок или замен.
5. Композиция, содержащая комплекс Фактора VIII и один или несколько пептидов Фактор фон Виллебранда, где
- пептиды Фактора фон Виллебранда являются фрагментами Фактора фон Виллебранда,
- комплекс Фактора VIII и фрагментов Фактора фон Виллебранда обладает уменьшенным связыванием с фосфолипидными мембранами по сравнению с Фактором VIII индивидуально,
- комплекс Фактора VIII и фрагментов фактора фон Виллебранда обладает уменьшенным связыванием с коллагеном III по сравнению с комплексом Фактора VIII и полноразмерного Фактора фон Виллебранда,
- комплекс Фактора VIII и фрагментов Фактора фон Виллебранда обладает уменьшенным связыванием с гепарином по сравнению с комплексом Фактора VIII и полноразмерного Фактора фон Виллебранда.
6. Композиция по пп.1-5, отличающаяся тем, что пептид Фактора фон Виллебранда имеет молекулярную массу <500 кДа, предпочтительно <400 кДа.
7. Композиция по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что пептиды Фактора фон Виллебранда обладают, по меньшей мере, одним из свойств, выбранных из группы, состоящей из
(i) константа аффинности связывания для гепарина KD>1 нМ, предпочтительно ≥ 2,43 нМ,
(ii) константа аффинности связывания для коллагена III KD>5 нМ, предпочтительно ≥ 17,02 нМ,
(iii) константа аффинности связывания для Фактора VIII KD<100 нМ, или <10 нМ, предпочтительно ≤ 6,19 нМ и
(iv) ингибирование связывания Фактора VIII с фосфолипидами, составляет, по меньшей мере, 70%, предпочтительно, по меньшей мере, 80%.
8. Композиция по пп.1-7, отличающаяся тем, что пептиды Фактора фон Виллебранда получены из Фактора фон Виллебранда путем протеолитического расщепления или химического расщепления, предпочтительно путем протеолитического расщепления с помощью протеазы V-8 S. aureus.
9. Композиция по любому из пп.1-8, отличающаяся тем, что Фактор VIII представляет собой полноразмерный Фактор VIII, Фактор VIII с делетированным B-доменом или Фактор VIII с B-доменом другого размера.
10. Композиция по любому из пп.1-9, отличающаяся тем, что Фактор VIII представляет собой Фактор VIII, выделенный из плазмы, или рекомбинантный Фактор VIII, где рекомбинантный Фактор VIII предпочтительно экспрессируется в человеческой клеточной линии.
11. Композиция по любому из пп.1-10, отличающаяся тем, что композиция обладает по меньшей мере одним из свойств, выбранных из группы, состоящей из
(i) пептиды Фактора фон Виллебранда экранируют Фактор VIII от связывания с антителами с минимизацией образования ингибитора у пациента,
(ii) стабилизирует Фактор VIII, обеспечивая остаточную активность Фактора VIII, составляющую по меньшей мере 90% после хранения в течение 12 месяцев в виде замороженной жидкости при -70°C,
(iii) стабилизирует Фактор VIII, обеспечивая остаточную активность Фактора VIII, составляющую по меньшей мере 90% после хранения в течение 24 месяцев в лиофилизированной форме при 5°C,
(iv) стабилизирует Фактор VIII, обеспечивая остаточную активность Фактора VIII, составляющую, по меньшей мере, 90% после хранения в течение 12 месяцев в лиофилизированной форме при 25°C,
(v) продлевает период полужизни Фактора VIII in-vivo по меньшей мере на 20% и
(vi) уменьшает образование ингибитора у ранее не получавших лечение пациентов до менее чем 20% после лечения с использованием композиции в течение 6 месяцев.
12. Композиция по пп.1-11 для применения при лечении или предотвращении нарушения свертываемости крови.
13. Композиция для применения по п.12, включающая не внутривенное введение композиции, предпочтительно, где не внутривенное введение является подкожной инъекцией.
14. Способ уменьшения количества вируса в препарате по пп.1-11, включающий стадию нанофильтрации пептидов Фактора фон Виллебранда до или после комбинации с Фактором VIII, в результате чего количество свиного парвовируса, если он присутствует, уменьшается, по меньшей мере в 100 раз.
15. Способ получения пептидов Фактора фон Виллебранда, включающий следующие стадии:
- инкубация Фактора фон Виллебранда с протеазой V-8 S. aureus в течение 2-16 часов при массовом соотношении масс./масс. фермента и Фактора фон Виллебранда, составляющем 1:5-1:100
- связывание и очистка на анионообменной смоле и сбор целевых очищенных пептидов vWF во фракции, поступающей из анионообменной смолы путем применения увеличенного количества концентрации соли.
Наверх