Улучшенная нитрилгидратаза - заявка 2016152249 на патент на изобретение в РФ

1. Улучшенная нитрилгидратаза, имеющая по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную следующими SEQ ID NO: 46 - 49 в α-субъединице;
(а) SEQ ID NO: 46: X1X2X3YX5X6RX7KAX8E
(при условии, что R обозначает аргинин, K обозначает лизин, А обозначает аланин, Е обозначает глутаминовую кислоту, Х1 обозначает аминокислоту, отличную от тирозина, и каждый из Х28 независимо обозначает любой аминокислотный остаток);
(b) SEQ ID NO: 47: X9X10X11X12NX13X14X15X16X17HX19X20X21CX22LC
(при условии, что N обозначает аспарагин, V обозначает валин, C обозначает цистеин, Т обозначает треонин, L обозначает лейцин, Х9 обозначает аминокислоту, отличную от серина, и каждый из Х1022 независимо обозначает любой аминокислотный остаток);
(с) SEQ ID NO: 48: X23WDSX25SEX27RX28X29V
(при условии, что W обозначает триптофан, D обозначает аспарагиновую кислоту, S обозначает серин, Е обозначает глутаминовую кислоту, R обозначает аргинин, V обозначает валин, X23 обозначает аминокислоту, отличную от валина, и каждый из Х2529 независимо обозначает любой аминокислотный остаток);
(d) SEQ ID NO: 49: VX24DSX25SEX27RX28X29V
(при условии, что V обозначает валин, D обозначает аспарагиновую кислоту, S обозначает серин, Е обозначает глутаминовую кислоту, R обозначает аргинин, Х24 обозначает аминокислоту, отличную от триптофана, и каждый из Х2529 независимо обозначает любой аминокислотный остаток).
2. Улучшенная нитрилгидратаза по п.1, имеющая по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную следующими SEQ ID NO: 46 - 49 в α-субъединице;
(а) SEQ ID NO: 46: X1X2X3YX5X6RX7KAX8E
(при условии, что R обозначает аргинин, K обозначает лизин A обозначает аланин, Е обозначает глутаминовую кислоту, Х1 обозначает аминокислоту, отличную от тирозина, и каждый из Х28 независимо обозначает любой аминокислотный остаток);
(b) SEQ ID NO: 47: X9X10X11X12NX13X14X15X16X17HX19X20X21CX22LC
(при условии, что N обозначает аспарагин, V обозначает валин, C обозначает цистеин, Т обозначает треонин, L обозначает лейцин, Х9 обозначает аминокислоту, отличную от серина, каждый из X10 до X20 независимо обозначает любой аминокислотный остаток, Х21 обозначает валин и X22 обозначает треонин);
(с) SEQ ID NO: 48: X23WDSX25SEX27RX28X29V
(при условии, что W обозначает триптофан, D обозначает аспарагиновую кислоту, S обозначает серин, Е обозначает глутаминовую кислоту, R обозначает аргинин, V обозначает валин, X23 обозначает аминокислоту, отличную от валина, и каждый из Х2529 независимо обозначает любой аминокислотный остаток);
(d) SEQ ID NO: 49: VX24DSX25SEX27RX28X29V
(при условии, что V обозначает валин, D обозначает аспарагиновую кислоты, S обозначает серин, Е обозначает глутаминовую кислоту, R обозначает аргинин, Х24 обозначает аминокислоту, отличную от триптофана, и каждый из Х2529 независимо обозначает любой аминокислотный остаток).
3. Улучшенная нитрилгидратаза по п.1, имеющая по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, представленную следующими SEQ ID NO: 46-49 в α-субъединице;
(а) SEQ ID NO: 46: X1X2X3YX5X6RX7KAX8E
(при условии, что R обозначает аргинин, K обозначает лизин, А обозначает аланин, Е обозначает глутаминовую кислоту, Х1 обозначает глицин или валин и каждый из Х28 независимо обозначает любой аминокислотный остаток);
(b) SEQ ID NO: 47: X9X10X11X12NX13X14X15X16X17HX19X20X21CX22LC
(при условии, что N обозначает аспарагин, V обозначает валин, C обозначает цистеин, Т обозначает треонин, L обозначает лейцин, Х9 обозначает валин или треонин, и каждый из Х1020 независимо обозначает любой аминокислотный остаток, Х21 обозначает валин и X22 обозначает треонин);
(с) SEQ ID NO: 48: X23WDSX25SEX27RX28X29V
(при условии, что W означает триптофан, D обозначает аспарагиновую кислоту, S обозначает серин, Е обозначает глутаминовую кислоту, R обозначает аргинин, V обозначает валин, X23 выбран из группы, состоящей из изолейцина, лейцина, метионина и треонина, и каждый из Х2529 независимо обозначает любой аминокислотный остаток);
(d) SEQ ID NO: 49: VX24DSX25SEX27RX28X29V
(при условии, что V обозначает валин, D обозначает аспарагиновую кислоту, S обозначает серин, Е обозначает глутаминовую кислоту, R обозначает аргинин, Х24 обозначает лейцин и каждый из Х2529 независимо обозначает любой аминокислотный остаток).
4. Улучшенная нитрилгидратаза по любому из пп.1-3, где в вышеприведенной SEQ ID NO:46 Х2 обозначает Т (треонин), Х3 обозначает Е (глутаминовая кислота), Х4 обозначает Y (тирозин), Х5 обозначает Е (глутаминовая кислота), Х6 обозначает A (аланин), Х7 обозначает Т (треонин) и Х8 обозначает I (изолейцин),
в вышеприведенной SEQ ID NO:47 Х10 обозначает А (аланин), Х11 обозначает V (валин), Х12 обозначает F (фенилаланин), Х13 обозначает D (аспарагиновая кислота), Х14 обозначает S (серин), Х15 обозначает Q (глутамин), Х16 обозначает Т (треонин), Х17 обозначает Н (гистидин), Х18 обозначает Н (гистидин), Х19 обозначает V (валин) и Х20 обозначает V (валин), и
в вышеприведенных SEQ ID NO: 48 и 49 Х25 обозначает S (серин), X26 обозначает S (серин), Х27 обозначает I (изолейцин), Х28 обозначает Y (тирозин) и Х29 обозначает I (изолейцин).
5. Улучшенная нитрилгидратаза по любому из пп.1-4, где улучшенная нитрилгидратаза имеет аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 50.
6. Улучшенная нитрилгидратаза, имеющая аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 50 в α-субъединице, в которой по меньшей мере одна аминокислотная мутация, выбранная из следующих с (I) по (IV), включает:
(I) Х1 обозначает G (глицин) или V (валин),
(II) в Х9 обозначает V (валин) или T (треонин),
(III) X23 является аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из I (изолейцин), L (лейцин), М (метионин) и T (треонин), и
(IV) Х24 обозначает L (лейцин).
7. Улучшенная нитрилгидратаза по п.6, где Х2 обозначает Т (треонин), Х3 обозначает Е (глутаминовая кислота), Х4-обозначает Y (тирозин), Х5 обозначает Е (глутаминовая кислота), Х6 обозначает (аланин), Х7 обозначает Т (треонин), Х8 обозначает I (изолейцин), Х10 обозначает (аланин), Х11 обозначает V (валин), Х12 обозначает F (фенилаланин), Х13 обозначает D (аспарагиновая кислота), Х14 обозначает S (серин), Х15 обозначает Q (глутамин), X16 обозначает Т (треонин), Х17 обозначает H (гистидин), Х18 обозначает H (гистидин), Х19 обозначает V (валин), Х20 обозначает V (валин), Х25 обозначает S (серин), X26 обозначает S (серин), Х27 обозначает I (изолейцин), Х28 обозначает Y (тирозин) и Х29 обозначает I (изолейцин).
8. Улучшенная нитрилгидратаза по любому из пп.1-7, где нитрилгидратаза получена из бактерии Rhodococcus или бактерии Nocardia.
9. ДНК, кодирующая улучшенную нитрилгидратазу, описанную в любом из пп.1-8, или ДНК, которая гибридизуется в жестких условиях с ДНК, имеющей последовательность оснований, комплементарную вышеупомянутой ДНК, и кодирует белок, обладающий нитрилгидратазной активностью с повышенной устойчивостью к амидным соединениям при высоких температурах.
10. Рекомбинантный вектор, содержащий ДНК по п.9.
11. Трансформант, содержащий рекомбинантный вектор по п.10.
12. Способ получения нитрилгидратазы, включающий культивирование трансформанта по п.11 и сбор нитрилгидратазы из полученной культуры.
13. Способ получения амидного соединения, включающий приведение нитрильного соединения в контакт с улучшенной нитрилгидратазой по любому из пп.1-8, или с культурой, полученной при культивировании трансформанта по п.11, или переработанным продуктом культуры.
Наверх