Рекомбинантная плазмидная днк pbipr-abiga2m1f16-ht для получения рекомбинантного иммуноглобулина а изотипа iga2m1 - заявка 2016152555 на патент на изобретение в РФ

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pBiPr-ABIgA2m1FI6-ht, кодирующая человеческое антитело к гемагглютинину вируса гриппа А человека изотипа IgA2m1, содержащая ген тяжелой цепи, находящейся под контролем промотора hEF1-HTLV и сигнала полиаденилирования бычьего гормона роста BGH polyA, и ген легкой цепи, находящийся под контролем промотора CMV и сигнала полиаденилирования тимидинкиназы вируса герпеса цепей антитела, а также селективный маркер, обеспечивающий отбор трансфецированных эукариотических клеток, при этом промоторы hEF1-HTLV и CMV размещены в последовательности, обеспечивающей однонаправленную транскрипцию.
2. Рекомбинантная плазмидная по п. 1, характеризующаяся тем, что она выполнена на базе плазмиды pOptiVEC™-TOPO®, включающей также внутренний сайт связывания рибосом (IRES) вируса энцефаломиокардита (EMCV), ген ДГФР, сайт начала репликации в Е. coli из плазмиды pUC, ген β-лактамазы, а также следующие модификации - единичный сайт узнавания рестриктазы MluI вместо сайта узнавания рестриктазы SalI в положении 23, единичные сайты узнавания рестриктаз NheI и XhoI после промотора CMV для клонирования ДНК легкой цепи антитела.
3. Рекомбинантная плазмидная по п. 1, характеризующаяся тем, что селективный маркер представляет собой ген ДГФР.
4. Рекомбинантная плазмидная по п. 1, характеризующаяся тем, что ген легкой цепи включает фрагменты ДНК, кодирующие вариабельный домен легкой цепи человеческого антитела к гемагглютинину вируса гриппа А человека и константный домен каппа-типа, фланкированные сайтами рестрикции NheI и XhoI;
5. Рекомбинантная плазмидная по п. 1, характеризующаяся тем, что ген тяжелой цепи содержит фрагменты, кодирующие вариабельный домен тяжелой цепи человеческого антитела к гемагглютинину вируса гриппа А человека и константный домен изотипа IgA2m1, фланкированные сайтами рестрикции NheI и XhoI
6. Рекомбинантная плазмидная ДНК по п. 1, характеризующаяся тем, что ген тяжелой цепи кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.
7. Рекомбинантная плазмидная ДНК по п. 1, характеризующаяся тем, что ген тяжелой цепи имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2.
8. Рекомбинантная плазмидная ДНК по п. 1, характеризующаяся тем, что ген легкой цепи кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3.
9. Рекомбинантная плазмидная ДНК по п. 1, характеризующаяся тем, что ген легкой цепи имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 4.
10. Рекомбинантная плазмидная ДНК по п. 1, характеризующаяся тем, что указанный промотор/энхансер ранних генов цитомегаловируса человека (CMV) имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 5.
11. Рекомбинантная плазмидная ДНК по п. 1, характеризующаяся тем, что указанный гибридный промотор hEF1-HTLV имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 6.
12. Рекомбинантная плазмидная ДНК по п. 1, характеризующаяся тем, что указанный сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста BGH polyA имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 7.
13. Способ получения линии эукариотических клеток продуцентов человеческого антитела изотипа IgA2m1 к гемагглютинину вируса гриппа А (ВГА) путем трансфекции клеток рекомбинантными плазмидными ДНК по п. 1.
14. Способ получения по п. 13, характеризующийся тем, что для получения линий эукариотических клеток продуцентов используют линию клеток яичника китайского хомячка СНО.
15. Линия эукариотических клеток - продуцент человеческого антитела изотипа IgA2m1 к гемагглютинину вируса гриппа А (ВГА), полученная путем трансфекции рекомбинантной плазмидной ДНК по п. 1.
16. Линия клеток по п. 15, представляющая собой линию клеток яичника китайского хомячка СНО, полученную путем трансфекции линии клеток СНО DG44 рекомбинантной плазмидной ДНК по любому из п. 1.
17. Способ получения человеческого антитела изотипа IgA2m1 к гемагглютинину вируса гриппа А (ВГА), включающий:
культивирование в питательной среде линии клеток по п. 15,
выделение полученного целевого белка из культуральной жидкости.
Наверх