Конъюгат антитела и лекарственного средства, композиции на его основе и способы их получения - заявка 2016149433 на патент на изобретение в РФ

1. Конъюгат антитела и лекарственного средства, содержащий антитело, конъюгированное с конъюгируемым фрагментом через эндогенный акцепторный остаток глутамина на антителе, причем конъюгат антитела и лекарственного средства является гликозилированным в области Fc.
2. Конъюгат антитела и лекарственного средства по п. 1, причем конъюгат антитела и лекарственного средства является N-гликозилированным в области Fc.
3. Конъюгат антитела и лекарственного средства по пп. 1-2, в котором антитело представляет собой антитело человека.
4. Конъюгат антитела и лекарственного средства по пп. 1-2, в котором антитело представляет собой гуманизированное антитело.
5. Конъюгат антитела и лекарственного средства по пп. 1-4, в котором обе тяжелых цепи антитела являются конъюгированными с конъюгируемым фрагментом.
6. Конъюгат антитела и лекарственного средства по пп. 1-5, в котором конъюгируемый фрагмент содержит активный фрагмент, выбранный из группы, состоящей из следующего: фрагмент, который улучшает фармакокинетическое свойство антитела, терапевтический фрагмент и диагностический фрагмент.
7. Конъюгат антитела и лекарственного средства по п. 6, в котором активный фрагмент представляет собой токсин.
8. Конъюгат антитела и лекарственного средства по любому из пп. 1-7, в котором антитело и конъюгируемый фрагмент являются конъюгированными через линкер.
9. Конъюгат антитела и лекарственного средства по п. 8, в котором линкер представляет собой расщепляемый линкер.
10. Конъюгат антитела и лекарственного средства по п. 8, в котором линкер представляет собой нерасщепляемый линкер.
11. Композиция, содержащая конъюгат антитела и лекарственного средства по любому из пп. 1-10, в которой по меньшей мере приблизительно 50% конъюгатов антитела и лекарственного средства в композиции являются гликозилированными в области Fc.
12. Композиция по п. 11, в которой по меньшей мере 80% конъюгатов антитела и лекарственного средства в композиции характеризуются молярным отношением антитела к конъюгируемому фрагменту, составляющим 1:1, или 1:2.
13. Способ получения конъюгата антитела и лекарственного средства, содержащего антитело, специфически конъюгированное с конъюгируемым фрагментом, предусматривающий следующее: приведение в контакт композиции антитела с конъюгируемым фрагментом в присутствии трансглутаминазы при условии, достаточном для создания конъюгата антитела и лекарственного средства, причем по меньшей мере приблизительно 50% антитела в композиции являются гликозилированными в Fc-области, и при этом конъюгируемый фрагмент является конъюгированным с эндогенным акцепторным остатком глутамина на антителе.
14. Способ получения конъюгата антитела и лекарственного средства, содержащего антитело, специфически конъюгированное с конъюгируемым фрагментом, содержащим низкомолекулярный стебель и активный фрагмент, предусматривающий:
a) приведение в контакт композиции антитела с низкомолекулярным стеблем в присутствии трансглутаминазы при условии, достаточном для создания промежуточного конъюгата, содержащего антитело, специфически конъюгированное с низкомолекулярным стеблем, и
b) приведение в контакт промежуточного конъюгата с активным фрагментом, тем самым получая конъюгат антитела и лекарственного средства, причем по меньшей мере приблизительно 50% антитела в композиции являются гликозилированными в Fc-области, и при этом конъюгируемый фрагмент является конъюгированным с эндогенным акцепторным остатком глутамина на антителе.
15. Способ по п. 13 или 14, при котором трансглутаминаза представляет собой трансглутаминазу дикого типа.
16. Способ по п. 15, при котором трансглутаминаза дикого типа характеризуется аминокислотной последовательностью согласно SEQ ID NO: 16.
17. Способ по п. 13 или 14, при котором трансглутаминаза представляет собой сконструированную трансглутаминазу.
18. Способ по п. 17, при котором сконструированная трансглутаминаза содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью по отношению к SEQ ID NO: 16.
19. Способ по любому из пп. 13-18, при котором трансглутаминаза характеризуется чистотой, составляющей по меньшей мере приблизительно 90%.
20. Способ по любому из пп. 13-19, при котором молярное отношение трансглутаминазы к композиции антитела составляет приблизительно 10:1 - приблизительно 1:10.
21. Способ по любому из пп. 13-20, при котором трансглутаминаза иммобилизирована на твердой подложке.
22. Способ по любому из пп. 13-20, при котором антитело иммобилизировано на твердой подложке.
23. Способ по любому из пп. 13-22, при котором антитело представляет собой человеческое или гуманизированное антитело.
24. Способ по любому из пп. 13-23, при котором конъюгируемый фрагмент содержит активный фрагмент, выбранный из группы, состоящей из следующего: фрагмент, который улучшает фармакокинетическое свойство композиции антитела, терапевтический фрагмент и диагностический фрагмент.
25. Способ по п. 24, при котором активный фрагмент представляет собой токсин.
26. Сконструированная трансглутаминаза, способная конъюгировать Fc-содержащий полипептид с конъюгируемым фрагментом,
причем Fc-содержащий полипептид содержит N-гликозилированную область Fc,
причем N-гликозилированная область Fc содержит акцепторный остаток глутамина, фланкированный сайтом N-гликозилирования,
причем при реакции конъюгируемый фрагмент конъюгируется с Fc-содержащим полипептидом через акцепторный остаток глутамина, и
причем конъюгация является по меньшей мере приблизительно на 10% более активной, чем трансглутаминаза дикого типа при одинаковых условиях реакции.
27. Сконструированная трансглутаминаза, содержащая аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью по отношению к SEQ ID NO: 16, причем трансглутаминаза содержит делецию, выбранную из группы, состоящей из: D1-E4; Р244-Р247 и N282-L285.
28. Способ получения конъюгата антитела и лекарственного средства, содержащего антитело, специфически конъюгированное с конъюгируемым фрагментом, предусматривающий следующее: приведение в контакт композиции антитела с конъюгируемым фрагментом в присутствии сконструированной трансглутаминазы по п. 26 или 27 при условии, достаточном для создания конъюгата антитела и лекарственного средства, причем конъюгируемый фрагмент является конъюгированным с эндогенным акцепторным остатком глутамина на антителе.
29. Способ получения конъюгата антитела и лекарственного средства, содержащего антитело, специфически конъюгированное с конъюгируемым фрагментом, содержащим низкомолекулярный стебель и активный фрагмент, предусматривающий:
a) приведение в контакт композиции антитела с низкомолекулярным стеблем в присутствии сконструированной трансглутаминазы по п. 26 или 27 при условии, достаточном для создания промежуточного конъюгата, содержащего антитело, специфически конъюгированное с низкомолекулярным стеблем, и
b) приведение в контакт промежуточного конъюгата с активным фрагментом, тем самым получая конъюгат антитела и лекарственного средства, причем конъюгируемый фрагмент является конъюгированным с эндогенным акцепторным остатком глутамина на антителе.
Наверх