Животные, отличные от человека, имеющие гуманизированный ген 1 запрограммированный гибели клеток - заявка 2016149434 на патент на изобретение в РФ

1. Грызун, экспрессирующий полипептид PD-1, причем полипептид PD-1 содержит человеческую часть и эндогенную часть.
2. Грызун по п. 1, где полипептид PD-1 образуется в результате трансляции в клетке грызуна с сигнальным пептидом грызуна.
3. Грызун по п. 1 или 2, где эндогенная часть содержит внутриклеточную часть эндогенного полипептида PD-1.
4. Грызун по п. 3, где эндогенная часть дополнительно содержит трансмембранную часть эндогенного полипептида PD-1.
5. Грызун по п. 4, где эндогенная часть имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную соответствующей аминокислотной последовательности мышиного полипептида PD-1, представленной на Фигуре 8.
6. Грызун по п. 4, где эндогенная часть имеет аминокислотную последовательность, идентичную соответствующей аминокислотной последовательности мышиного полипептида PD-1, представленной на Фигуре 8.
7. Грызун по любому из пп. 1-6, где человеческая часть содержит аминокислоты 35-145 человеческого полипептида PD-1.
8. Грызун по любому из пп. 1-6, где человеческая часть содержит аминокислоты 27-145 человеческого полипептида PD-1.
9. Грызун по любому из пп. 1-6, где человеческая часть содержит аминокислоты 26-169 человеческого полипептида PD-1.
10. Грызун по любому из пп. 1-6, где человеческая часть содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную соответствующей аминокислотной последовательности человеческого полипептида PD-1, представленной на Фигуре 8.
11. Грызун по любому из пп. 1-6, где человеческая часть содержит аминокислотную последовательность, идентичную соответствующей аминокислотной последовательности человеческого полипептида PD-1, представленной на Фигуре 8.
12. Грызун по любому из предыдущих пунктов, где полипептид PD-1, который содержит человеческую часть и эндогенную часть, кодируется эндогенным геном Pdcd1.
13. Грызун по п. 12, где эндогенный ген Pdcd1 содержит эндогенные экзоны 1, 4 и 5 Pdcd1.
14. Грызун по п. 13, где эндогенный ген Pdcd1 дополнительно содержит полный или неполный эндогенный экзон 3 Pdcd1.
15. Грызун, содержащий ген Pdcd1, который содержит эндогенную часть и человеческую часть, где эндогенная и человеческая части функционально связаны с промотором Pdcd1 грызуна.
16. Грызун по п. 15, где промотор Pdcd1 грызуна представляет собой эндогенный промотор Pdcd1 грызуна.
17. Грызун по п. 15 или 16, где эндогенная часть содержит эндогенные экзоны 1, 4 и 5 Pdcd1.
18. Грызун по п. 17, где эндогенная часть дополнительно содержит полный или неполный эндогенный экзон 3 Pdcd1.
19. Грызун по п. 17 или 18, где экзон 1, полный или неполный экзон 3, экзоны 4 и 5 эндогенного гена Pdcd1 по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичны соответствующим экзону 1, полному или неполному экзону 3, экзонам 4 и 5 эндогенного гена Pdcd1, представленного на Фигуре 8.
20. Грызун по любому из пп. 15-19, где человеческая часть кодирует аминокислоты 26-169 человеческого полипептида PD-1.
21. Грызун по любому из пп. 15-19, где человеческая часть содержит экзон 2 человеческого гена Pdcd1.
22. Грызун по п. 21, где человеческая часть дополнительно содержит полный или неполный экзон 3 человеческого Pdcd1.
23. Грызун по п. 22, где экзон 2 и полный или неполный экзон 3 человеческого Pdcd1 по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичны соответствующим экзону 2 и полному или неполному экзону 3 человеческого гена Pdcd1, представленного на Фигуре 8.
24. Грызун по п. 22, где человеческая часть содержит последовательность, подвергнутую оптимизации кодонов для экспрессии у грызуна.
25. Грызун по п. 22, где человеческая часть содержит SEQ ID NO: 23.
26. Грызун по любому из пп. 1-25, где грызун представляет собой крысу или мышь.
27. Полипептид PD-1, продуцируемый грызуном по любому из пп. 1-26.
28. Полипептид PD-1 по п. 27, где полипептид PD-1 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную гуманизированному полипептиду PD-1, представленному на Фигуре 8.
29. Выделенная клетка или ткань грызуна, геном которой содержит ген Pdcd1, который кодирует полипептид PD-1, имеющий человеческую часть и эндогенную часть, причем эти части функционально связаны с промотором Pdcd1 грызуна.
30. Выделенная клетка или ткань грызуна по п. 29, где промотор Pdcd1 грызуна представляет собой эндогенный промотор Pdcd1 грызуна.
31. Выделенная клетка или ткань по п. 29 или 30, где человеческая часть содержит экзон 2 человеческого Pdcd1.
32. Выделенная клетка или ткань по п. 31, где человеческая часть дополнительно содержит полный или неполный экзон 3 человеческого Pdcd1.
33. Выделенная клетка или ткань грызуна по любому из пп. 29-32, где клетка или ткань грызуна представляет собой клетку мыши или ткань мыши или клетку крысы или ткань крысы.
34. Эмбриональная стволовая клетка грызуна, геном которой содержит ген Pdcd1, который кодирует полипептид PD-1, имеющий человеческую часть и эндогенную часть, причем эти части функционально связаны с промотором Pdcd1 грызуна.
35. Эмбриональная стволовая клетка грызуна по п. 34, где промотор Pdcd1 грызуна представляет собой эндогенный промотор Pdcd1 грызуна.
36. Эмбриональная стволовая клетка грызуна по п. 34 или 35, где человеческая часть содержит экзон 2 человеческого Pdcd1.
37. Эмбриональная стволовая клетка грызуна по п. 36, где человеческая часть дополнительно содержит полный или неполный экзон 3 человеческого Pdcd1.
38. Эмбриональная стволовая клетка грызуна по любому из пп. 34-37, где эмбриональная стволовая клетка грызуна представляет собой эмбриональную стволовую клетку мыши и получена из линии 129, линии C57BL или их помеси.
39. Эмбриональная стволовая клетка грызуна по п. 38, где эмбриональная стволовая клетка грызуна представляет собой эмбриональную стволовую клетку мыши и получена из помеси линий 129 и C57BL.
40. Эмбрион грызуна, образуемый с применением эмбриональной стволовой клетки по любому из пп. 34-39.
41. Способ получения грызуна, который экспрессирует полипептид PD-1 с эндогенного гена Pdcd1, где полипептид PD-1 содержит человеческую последовательность, при этом способ включает:
(a) вставку геномного фрагмента в эндогенный ген Pdcd1 в эмбриональной стволовой клетке грызуна, при этом указанный геномный фрагмент содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует полный или неполный человеческий полипептид PD-1;
(b) получение эмбриональной стволовой клетки грызуна, образованной на стадии (а); и
(с) создание грызуна с применением эмбриональной стволовой клетки грызуна из стадии (b).
42. Способ по п. 41, где человеческая последовательность содержит аминокислоты 35-145 человеческого полипептида PD-1.
43. Способ по п. 41, где человеческая последовательность содержит аминокислоты 27-145 человеческого полипептида PD-1.
44. Способ по п. 41, где человеческая последовательность содержит аминокислоты 26-169 человеческого полипептида PD-1.
45. Способ по любому из пп. 41-44, где нуклеотидная последовательность содержит экзон 2 человеческого Pdcd1.
46. Способ по п. 45, где нуклеотидная последовательность дополнительно содержит полный или неполный экзон 3 человеческого Pdcd1.
47. Способ по любому из пп. 41-46, где нуклеотидная последовательность содержит один или более селективный маркер.
48. Способ по любому из пп. 41-47, где нуклеотидная последовательность содержит один или более сайт сайт-специфической рекомбинации.
49. Способ получения грызуна, геном которого содержит ген Pdcd1, который кодирует полипептид PD-1, имеющий человеческую часть и эндогенную часть, причем эти части функционально связаны с промотором Pdcd1 грызуна, при этом способ включает:
модифицирование генома грызуна с тем, чтобы он содержал ген Pdcd1, который кодирует полипептид PD-1, имеющий человеческую часть и эндогенную часть, причем эти части функционально связаны с промотором Pdcd1 грызуна, с получением таким образом указанного грызуна.
50. Способ по п. 49, где промотор Pdcd1 грызуна представляет собой эндогенный промотор Pdcd1 грызуна.
51. Способ по п. 49, где человеческая часть содержит аминокислоты 35-145 человеческого полипептида PD-1.
52. Способ по п. 49, где человеческая часть содержит аминокислоты 27-145 человеческого полипептида PD-1.
53. Способ по п. 49, где человеческая часть содержит аминокислоты 26-169 человеческого полипептида PD-1.
54. Способ по любому из пп. 49-53, где ген Pdcd1 модифицируют для того, чтобы он включал в себя экзон 2 человеческого Pdcd1.
55. Способ по п. 54, где ген Pdcd1 модифицируют для того, чтобы он включал в себя экзон 2 человеческого Pdcd1 и полный или неполный экзон 3 человеческого Pdcd1.
56. Способ по любому из пп. 41-55, где грызун представляет собой мышь или крысу.
57. Грызун, получаемый с помощью способа по любому из пп. 41-56.
58. Грызун по п. 57, где грызун представляет собой мышь или крысу.
59. Способ снижения темпов роста опухоли у грызуна, при этом способ включает стадии:
введения лекарственного средства, целенаправленно воздействующего на человеческий PD-1, грызуну, геном которого содержит ген Pdcd1, который кодирует полипептид PD-1, имеющий человеческую часть и эндогенную часть, причем эти части функционально связаны с промотором Pdcd1 грызуна;
при этом введение осуществляют в условиях и в течение времени, достаточных для того, чтобы темпы роста опухоли у грызуна снизились.
60. Способ уничтожения опухолевых клеток у грызуна, при этом способ включает стадии:
введения лекарственного средства, целенаправленно воздействующего на человеческий PD-1, грызуну, геном которого содержит ген Pdcd1, который кодирует полипептид PD-1, имеющий человеческую часть и эндогенную часть, причем эти части функционально связаны с промотором Pdcd1 грызуна;
при этом введение осуществляют в условиях и в течение времени, достаточных для того, чтобы лекарственное средство опосредовало уничтожение опухолевых клеток.
61. Способ оценки фармакокинетических свойств лекарственного средства, целенаправленно воздействующего на человеческий PD-1, при этом способ включает стадии:
введения лекарственного средства грызуну, геном которого содержит ген Pdcd1, который кодирует полипептид PD-1, имеющий человеческую часть и эндогенную часть, причем эти части функционально связаны с промотором Pdcd1 грызуна; и
проведения анализа для определения одного или более фармакокинетических свойств лекарственного средства, целенаправленно воздействующего на человеческий PD-1.
62. Способ по любому из пп. 59-61, где человеческая часть содержит аминокислоты 35-145 человеческого полипептида PD-1.
63. Способ по любому из пп. 59-61, где человеческая часть содержит аминокислоты 27-145 человеческого полипептида PD-1.
64. Способ по любому из пп. 59-61, где человеческая часть содержит аминокислоты 26-169 человеческого полипептида PD-1.
65. Способ по любому из пп. 59-64, где лекарственное средство, целенаправленно воздействующее на человеческий PD-1, представляет собой антагонист PD-1.
66. Способ по любому из пп. 59-64, где лекарственное средство, целенаправленно воздействующее на человеческий PD-1, представляет собой агонист PD-1.
67. Способ по любому из пп. 59-64, где лекарственное средство, целенаправленно воздействующее на человеческий PD-1, представляет собой антитело к PD-1.
68. Способ по любому из пп. 59-67, где лекарственное средство, целенаправленно воздействующее на человеческий PD-1, вводят грызуну внутривенно.
69. Способ по любому из пп. 59-67, где лекарственное средство, целенаправленно воздействующее на человеческий PD-1, вводят грызуну внутрибрюшинно.
70. Способ по любому из пп. 59-67, где лекарственное средство, целенаправленно воздействующее на человеческий PD-1, вводят грызуну подкожно.
71. Способ по любому из пп. 59-70, где промотор Pdcd1 грызуна представляет собой эндогенный промотор Pdcd1 грызуна.
72. Способ по любому из пп. 59-71, где грызун представляет собой мышь или крысу.
73. Модель опухоли на грызунах, причем грызун экспрессирует полипептид PD-1, содержащий человеческую часть и эндогенную часть.
74. Модель опухоли на грызунах, причем грызун имеет геном, содержащий ген Pdcd1, который содержит эндогенную часть и человеческую часть, где эндогенная и человеческая части функционально связаны с промотором Pdcd1 грызуна.
75. Модель опухоли на грызунах, получаемая путем
a) обеспечения грызуна, геном которого содержит ген Pdcd1, который включает в себя эндогенную часть и человеческую часть, причем эндогенная и человеческая части функционально связаны с промотором Pdcd1 грызуна; и
b) имплантирования одной или более опухолевых клеток грызуну из стадии (а); с обеспечением таким образом указанной модели опухоли на грызунах.
76. Модель опухоли на грызунах по любому из пп. 73-75, где грызун представляет собой мышь или крысу.
77. Модель опухоли на грызунах по п. 76, где грызун представляет собой мышь.
78. Модель опухоли на грызунах по п. 77, где мышь выбрана из группы, включающей линию 129, линию C57BL/6 и линию смешанного происхождения 129xC57BL/6.
79. Модель опухоли на грызунах по п. 78, где мышь представляет собой на 25% 129 и на 75% C57BL/6.
Наверх