Культуральная среда для клеточной иммунотерапии - заявка 2017100024 на патент на изобретение в РФ

1. Способ приготовления среды для культивирования клеток, которая содержит смесь препаратов крови от двух или более доноров, включающий этапы:
a) обеспечения по меньшей мере первого препарата крови от первого донора;
b) измерения концентрации по меньшей мере одного показателя качества в первом препарате крови;
c) сравнения измеренной концентрации показателя качества с диапазоном концентраций, предопределенным для показателя качества;
d) выбора первого препарата крови для среды для культивирования клеток, если концентрация, измеренная для показателя качества, находится в предопределенном диапазоне, и, необязательно, преобразование первого выбранного препарата крови в первый обработанный препарат крови или иначе отмена выбора первого препарата крови.
2. Способ по п. 1, где этапы a)–d) проводят более чем с одним препаратом крови от различных доноров и выбранный препарат крови или обработанные препараты крови комбинируют для формирования среды для культивирования.
3. Способ приготовления среды для культивирования клеток, которая содержит смесь препаратов крови от двух или более доноров, включающий этапы:
a) обеспечения по меньшей мере первой смеси препаратов крови от двух или более доноров;
b) измерения концентрации по меньшей мере одного показателя качества в первой смеси;
c) сравнения измеренной концентрации показателя качества с диапазоном концентраций, предопределенным для показателя качества;
d) выбора первой смеси для среды для культивирования клеток, если концентрация, измеренная для показателя качества находится в предопределенном диапазоне, в ином случае отмена выбора первой смеси.
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где препарат крови выбран из цельной крови, плазмы, сыворотки или их подгрупп.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, где по меньшей мере один показатель качества выбран из цитокина или из группы, состоящей из эстрадиола, кортизола, глобулина, связывающего половые гормоны (SHBG), инсулина и инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF-1).
6. Способ по п. 5, где цитокин выбран из группы, состоящей из интерлейкина 6 (IL-6), интерферона-γ (IFNγ), агониста рецептора интерлейкина 1 (IL-1RA), интерлейкина 5 (IL-5), гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF), фактора некроза опухоли (TNFα), CCL5 (RANTES), интерлейкина 2 (IL-2) интерлейкина 1b (IL-1b), эотаксина, основного FGF, эпидермального фактора роста (EGF), тромбоцитарного фактора роста (PDGF-88), хемокина 10 с C-X-C мотивом (CXCL-10) 100 пг/мл, интерлейкина 13 (IL-13), интерлейкина 4 (IL-4), MCP1, интерлейкина 8 (IL-8), MIP1a, интерлейкина 10, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (GCSF), интерлейкина 15 (IL-15), интерлейкина 7 (IL-7) интерлейкина 12p70 (IL12p70), интерлейкина 17a (IL-17a), интерлейкина 9 (IL-9) и интерлейкина 21 (IL-21).
7. Способ по п. 6, где показатель качества выбран из группы, состоящей из SHBG, IGF-1, CCL5 и IL-6.
8. Способ по любому из предшествующих пунктов, где тестируют два или более показателей качества.
9. Способ по п. 8, где показатели качества выбраны из CCL5, эотаксина, PDGF-88, CXCL-10, IL-10, IL-13, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL12p70, IL-15, IL-17a, IL-21, основного FGF, EGF, IFNγ, GCSF, GM-CSF, MCP1, MIP1a, MIP1b, PDGF, IL-1RA, TNFα, эстрадиола, кортизола, IGF-1 и SHBG.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, где тестируют четыре показателя качества, и где показатели качества представляют собой SHBG, IGF-1, CCL5 и IL-6.
11. Способ по любому из пп. 5–9, где определенный диапазон концентраций на основании объема препарата крови составляет:
- ниже 3 нг/мл для CCL5,
- ниже 500 пг/мл для эотаксина,
- ниже 100 пг/мл для PDGF-88 и CXCL-10,
- ниже 200 пг/мл для IL-10,
- ниже 50 пг/мл для IL-13,
- ниже 20 пг/мл для IL-1b, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL12p70, IL-15, IL-17a, IL-21, основного FGF, EGF, IFNγ, GCSF, GM-CSF, MCP1, MIP1a, MIP1b, PDGF, IL-1RA и TNFα.
- по меньшей мере 65 пмоль/л, предпочтительно, по меньшей мере 75 пмоль/л, более предпочтительно, по меньшей мере 85 пмоль/л для эстрадиола;
- по меньшей мере 190 нмоль/л, предпочтительно по меньшей мере 210 нмоль/л, более предпочтительно, по меньшей мере 220 нмоль/л для кортизола;
- по меньшей мере 100 мкг/л, предпочтительно, по меньшей мере 130 мкг/л, более предпочтительно, по меньшей мере 140 мкг/л для IGF-1;
- ниже 31 нмоль/л, предпочтительно, ниже 29 нмоль/л для SHBG.
12. Способ по любому из предшествующих пунктов, где способ включает выбор донора, включающий:
a) обеспечение препарата крови от донора;
b) измерение концентрации, по меньшей мере, одного показателя качества в препарате крови первого донора;
c) сравнение измеренной концентрации показателя качества с диапазоном концентраций, предопределенным для показателя качества;
d) выбор донора для донорства плазмы или сыворотки, если величина концентрации для пула плазмы или концентрация, измеренная для показателя качества находится в предопределенном диапазоне, в ином случае отмена выбора первого донора.
13. Среда для культивирования клеток, которая содержит, на основании объема среды для культивирования клеток:
- CCL5 в концентрации ниже 3 нг/мл;
- эотаксин в концентрации ниже 500 пг/мл,
- PDGF-88 и/или CXCL-10 в концентрации ниже 100 пг/мл;
- IL-10 в концентрации ниже 200 пг/мл;
- IL-13 в концентрации ниже 50 пг /мл;
- IL-1b, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL12p70, IL-15, IL-17a, IL-21, основной FGF, EGF, IFNγ, GCSF, GM-CSF, MCP1, MIP1a, MIP1b, PDGF, IL1-RA, и/или TNFα в концентрации ниже 20 пг/мл;
- эстрадиол в концентрации, по меньшей мере, 65 пмоль/л, предпочтительно, по меньшей мере, 75 пмоль/л, более предпочтительно, по меньшей мере, 85 пмоль/л;
- кортизол в концентрации, по меньшей мере, 190 нмоль/л, предпочтительно, по меньшей мере, 210 нмоль/л, более предпочтительно, по меньшей мере, 220 нмоль/л;
- IGF-1 в концентрации, по меньшей мере, 100 мкг/л, предпочтительно, по меньшей мере, 130 мкг/л, более предпочтительно, по меньшей мере, 140 мкг/л; и/или
- SHBG в концентрации ниже 31 нмоль/л, предпочтительно ниже 29 нмоль/л.
14. Среда для культивирования клеток по п. 13, содержащая по меньшей мере один препарат крови, в частности, плазму и/или сыворотку.
15. Среда для культивирования клеток по п. 14, содержащая сыворотку от двух или более доноров.
16. Среда для культивирования клеток по п. 13, где среда для культивирования клеток представляет собой синтетическую среду.
17. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 13–16, дополнительно содержащая:
- белки в концентрации от 60,0 до 80,0 г/л;
- глюкозу в концентрации от 4,5 до 5,5 ммоль/л;
- небелковый азот в концентрации от 15 до 30 ммоль/л;
- азот мочевины в концентрации от 3,5 до 7,0 ммоль/л;
- азот аминокислот в концентрации от 3,0 до 5,0 ммоль/л;
- креатинин в концентрации от 70,0 до 140,0 мкмоль/л;
- креатин в концентрации от 25,0 до 70,0 мкмоль/л;
- мочевину в концентрации от 3,0 до 5,0 мкмоль/л;
- общие липиды в концентрации от 4,5 до 8,5 г/л;
- триглицериды в концентрации от 0,6 до 2,4 ммоль/л;
- холестерин в концентрации от 4,0 до 6,5 ммоль/л;
- липиды в концентрации от 0,3 до 0,4 ммоль/л;
- этерифицированные компоненты в концентрации от 0,7 до 0,8 ммоль/л;
- фосфолипиды в концентрации от 2,0 до 3,0 ммоль/л;
- жирные кислоты в концентрации от 0,3 до 0,9 ммоль/л;
- органические кислоты в концентрации от 4,0 до 6,0 ммоль/л;
- пируват в концентрации от 0,1 до 0,2 ммоль/л;
- цитрат в концентрации от 0,1 до 0,2 ммоль/л; и/или
- кетоны в концентрации от 0,3 до 0,5 ммоль/л.
18. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 13–17, содержащая любой один из:
- SHBG в концентрации ниже 29 нмоль/л;
- IGF-1 в концентрации, по меньшей мере, 100 мкг/л,
- IL-6 в концентрации ниже 20 пг/мл; и
- CCL5 в концентрации ниже 3 нг/мл.
19. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 13–18, содержащая
- SHBG в концентрации ниже 29 нмоль/л;
- IGF-1 в концентрации, по меньшей мере, 100 мкг/л,
- IL-6 в концентрации ниже 20 пг/мл; и
- CCL5 в концентрации ниже 3 нг/мл.
20. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 13–19, дополнительно содержащая PBS.
21. Применение среды для культивирования клеток по любому из пп. 13–20 для культивирования клеток.
22. Применение по п. 21, где клетки представляют собой лимфоциты, в частности, лимфоциты от пациента.
23. Применение по п. 22, где лимфоциты выращивают, размножают и/или наращивают в среде для культивирования клеток.
24. Применение по п. 23, где лимфоциты наращивают в среде для культивирования клеток в присутствии, по меньшей мере, одного антигена и цитокинового коктейля из IL-2, IL-15 и IL-21.
Наверх