Способы культивирования клеток и среды, предусматривающие n-ацетилцистеин - заявка 2017101195 на патент на изобретение в РФ

1. Способ культивирования клеток, включающий:
получение среды для культивирования клеток, достаточной для поддержания клеточного роста, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин; и
культивирование клетки в среде для культивирования клеток, где клетка является ауксотрофной по холестерину клеткой миеломы или клеткой гибридомы.
2. Способ повышения жизнеспособности клеток, включающий:
получение среды для культивирования клеток, достаточной для поддержания клеточного роста, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин; и
культивирование клетки в среде для культивирования клеток, где клетка является ауксотрофной по холестерину, клеткой миеломы или клеткой гибридомы.
3. Способ повышения скорости клеточного роста, включающий:
получение среды для культивирования клеток, достаточной для поддержания клеточного роста, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин; и
культивирование клетки в среде для культивирования клеток, где клетка является ауксотрофной по холестерину клеткой миеломы или клеткой гибридомы.
4. Способ уменьшения времени удвоения клеток, включающий:
получение среды для культивирования клеток, достаточной для поддержания клеточного роста, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин; и
культивирование клетки в среде для культивирования клеток, где клетка является ауксотрофной по холестерину клеткой миеломы или клеткой гибридомы.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где клетки размораживают из замороженной исходной культуры.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где клетки находятся в фазе размножения.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где среда для культивирования клеток представляет собой бессывороточную и не содержащую животный белок среду.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где среда для культивирования клеток представляет собой среду с определенным химическим составом.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где среда содержит липиды.
10. Способ по любому из пп. 1-9, где клетки получают от млекопитающего.
11. Способ по п. 10, где клетки млекопитающего представляют собой клетки мыши, хомяка, крысы, обезьяны или человека.
12. Способ по п. 10, где клетки выбраны из группы, состоящей из: клеток NS0, NS1, U937, M19, SRD-12B, SRD-13A, CHO-215, X63Ag8, Sp2/0, J558L, U266, P3U1, XG-1, XG-2, XG-3, XG-4, XG-5, XG-6, XG-7, XG-8, XG-9, U266, RPM1-8226, LP1, L363, OPM1, OPM2 и NCLH929.
13. Способ по п. 12, где клетки получают из клеток NS0, NS1, U937, M19, SRD-12B, SRD-13A, CHO-215, X63Ag8, Sp2/0, J558L, U266, P3U1, XG-1, XG-2, XG-3, XG-4, XG-5, XG-6, XG-7, XG-8, XG-9, U266, RPM1-8226, LP1, L363, OPM1, OPM2 или NCLH929.
14. Способ по п. 12, где клетки представляют собой клетки NS0.
15. Способ по любому из пп. 1-12, где клетки сконструированы так, что они являются ауксотрофными по холестерину.
16. Способ по любому из пп. 1-15, где среда для культивирования клеток содержит: источник углерода, источники незаменимых и заменимых аминокислот, витамины, неорганические соли, металлические микроэлементы, pH-буферы, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, липиды и холестерин.
17. Способ по любому из пп. 1-16, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин при концентрации от приблизительно 0,25 мМ до приблизительно 3 мМ.
18. Способ по любому из пп. 1-17, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин при концентрации от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,5 мМ.
19. Способ по любому из пп. 1-18, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин при концентрации от приблизительно 1,0 до приблизительно 1,5 мМ.
20. Способ по любому из пп. 1-19, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин при концентрации от приблизительно 1 мМ до приблизительно 1,5 мМ.
21. Способ по любому из пп. 1-20, где среда для культивирования клеток содержит дрожжевой экстракт.
22. Способ по п. 21, где среда для культивирования клеток содержит 1 г/л дрожжевого экстракта.
23. Способ по любому из пп. 1-22, где среднее время удвоения меньше, чем в случае клеточной культуры с контрольной средой без N-ацетилцистеина.
24. Способ по п. 23, где происходит уменьшение среднего времени удвоения по меньшей мере на приблизительно 10% по сравнению со средой для культивирования клеток без N-ацетилцистеина.
25. Способ по п. 23, где происходит уменьшение среднего времени удвоения по меньшей мере на 15% по сравнению со средой для культивирования клеток без N-ацетилцистеина.
26. Способ по п. 23, где происходит уменьшение среднего времени удвоения по меньшей мере на 20% по сравнению со средой для культивирования клеток без N-ацетилцистеина.
27. Способ по п. 23, где происходит уменьшение среднего времени удвоения по меньшей мере на 25% по сравнению со средой для культивирования клеток без N-ацетилцистеина.
28. Способ по п. 23, где происходит уменьшение среднего времени удвоения по меньшей мере на 50% по сравнению со средой для культивирования клеток без N-ацетилцистеина.
29. Способ по п. 23, где среднее время удвоения клеток составляет 60 часов или меньше.
30. Способ по п. 23, где среднее время удвоения составляет 42 часа или меньше.
31. Способ по п. 23, где среднее время удвоения составляет 34 часа или меньше.
32. Способ по п. 23, где среднее время удвоения составляет 30 часов или меньше.
33. Способ по п. 23, где среднее время удвоения составляет приблизительно 29 часов или меньше.
34. Способ по любому из пп. 1-33, где происходит повышение жизнеспособности клеток по сравнению с клеточной культурой с контрольной средой без N-ацетилцистеина.
35. Способ по п. 34, где происходит повышение жизнеспособности клеток по меньшей мере на приблизительно 5% по сравнению со средой для культивирования клеток без N-ацетилцистеина.
36. Способ по п. 34, где происходит повышение жизнеспособности клеток по меньшей мере на 7% по сравнению со средой для культивирования клеток без N-ацетилцистеина.
37. Способ по п. 34, где происходит повышение жизнеспособности клеток по меньшей мере на 10% по сравнению со средой для культивирования клеток без N-ацетилцистеина.
38. Способ по п. 34, где жизнеспособность клеток составляет по меньшей мере приблизительно 90%.
39. Способ по п. 34, где жизнеспособность клеток составляет по меньшей мере 92%.
40. Способ по п. 34, где жизнеспособность клеток составляет по меньшей мере 93%.
41. Способ по любому из пп. 1-40, где клетки не экспрессируют гетерологичный белок.
42. Способ по любому из пп. 1-40, где клетки экспрессируют гетерологичный белок.
43. Способ по любому из пп. 1-40 и п. 42, где клетки трансформированы гетерологичной нуклеиновой кислотой.
44. Способ по п. 43, где гетерологичная нуклеиновая кислота представляет собой кДНК, вектор, плазмиду, нуклеиновую кислоту, функционально связанную с промотором, и/или нуклеиновую кислоту, которая встраивается в геном.
45. Способ по п. 42, где гетерологичный белок экспрессируется транзиентно.
46. Способ по п. 42, где гетерологичный белок экспрессируется стабильно.
47. Способ по любому из пп. 42, 45 или 46, где гетерологичный белок представляет собой антитело или его антиген-связывающий фрагмент.
48. Способ по п. 47, где антитело или его антиген-связывающий фрагмент представляют собой антитело к IL-13.
49. Способ по п. 48, где антитело представляет собой BAK502G9 или его антиген-связывающий фрагмент.
50. Способ по п. 48, где антитело или антиген-связывающий фрагмент имеют вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, которая по меньшей мере на приблизительно 80% идентична любой из SEQ ID NO: 1, 9, 17 или 25, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, которая по меньшей мере на приблизительно 80% идентична любой из SEQ ID NO: 2, 10, 18 или 26.
51. пособ по п. 48, где антитело или антиген-связывающий фрагмент содержат:
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую:
i. CDR1 HC, которая имеет одну мутацию по сравнению с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 3, 11, 19 или 27;
ii. CDR2 HC, которая имеет одну или две мутации по сравнению с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 4, 12, 20 и 28; и
iii. CDR3 HC, которая имеет одну или две мутации по сравнению с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 5, 13, 21 и 29; и
вариабельную область легкой цепи, содержащую:
i. CDR1 LC, которая имеет одну мутацию по сравнению с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 6, 14, 22 и 30;
ii. CDR2 LC, которая имеет одну или две мутации по сравнению с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 7, 15, 23 и 31; и
iii. CDR3 LC, которая имеет одну или две мутации по сравнению с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 8, 16, 24 и 32.
52. Способ по любому из пп. 1-52, где клетка является ауксотрофной по холестерину.
53. Способ по любому из пп. 1-53, где клетка представляет собой клетку миеломы.
54. Способ по любому из пп. 1-53, где клетка представляет собой клетку гибридомы.
55. Среда для культивирования клеток, содержащая N-ацетилцистеин, источник углеводов, источник аминокислот и источник холестерина.
56. Среда для культивирования клеток по п. 55, где источник углеводов и источник аминокислот являются различными.
57. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 55-56, где среда для культивирования клеток представляет собой бессывороточную и не содержащую животный белок среду.
58. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 55-57, где среда для культивирования клеток представляет собой среду с определенным химическим составом.
59. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 55-58, где среда дополнительно содержит липиды.
60. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 55-59, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин при концентрации от приблизительно 0,25 мМ до приблизительно 3 мМ.
61. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 55-59, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин при концентрации от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,5 мМ.
62. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 55-59, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин при концентрации от приблизительно 1,0 до приблизительно 1,5 мМ.
63. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 55-59, где среда для культивирования клеток содержит N-ацетилцистеин при концентрации приблизительно 1 мМ или 1,5 мМ.
64. Среда для культивирования клеток по любому из пп. 55-63, где среда для культивирования клеток дополнительно содержит дрожжевой экстракт.
65. Среда для культивирования клеток по п. 64, где среда для культивирования клеток содержит 1 г/л дрожжевого экстракта.
Наверх