Способы и реагенты для очистки белков - заявка 2017101727 на патент на изобретение в РФ

1. Способ очистки белка из образца, включающий:
загрузку образца на хроматографическую колонку,
промывку колонки промывочным буфером, при этом промывочный буфер имеет электропроводность 80 мСм/см или выше, и
элюирование белка с колонки элюирующим буфером.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что промывочный буфер содержит соль, выбранную из группы, состоящей из (NH4)2SO4, Na2SO4, и CH3COONa.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что промывочный буфер содержит (NH4)2SO4 в концентрации приблизительно 0,8 M.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что элюирующий буфер имеет электропроводность 80 мСм/см или выше.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что элюирующий буфер содержит соль, выбранную из группы, состоящей из NaCl, KCl и NaOAc.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что элюирующий буфер содержит NaCl в концентрации приблизительно 1 М.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что способ включает по меньшей мере две стадии промывки.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что первая стадия промывки включает промывку колонки буфером, имеющим электропроводность 2 мСм/см или меньше.
9. Способ по п. 8, дополнительно включающий третью стадию промывки, при этом третья стадия промывки включает промывку колонки буфером, имеющим электропроводность 2 мСм/см или меньше.
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанный белок представляет собой фермент.
11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что фермент представляет собой ДНКазу или РНКазу.
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что ДНКаза является рекомбинантной ДНКазой.
13. Способ по п. 10, отличающийся тем, что фермент представляет собой ДНКазу, и при этом, буферы, применяемые в способе, содержат CaCl2.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что буферы, применяемые в способе, содержат 1 мМ CaCl2.
15. Способ по п. 1, отличающийся тем, что хроматографическая колонка представляет собой ионообменную хроматографическую колонку или хроматографическую колонку смешанного действия.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что колонка смешанного действия представляет собой мультимодальный анионообменник.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что колонка смешанного действия представляет собой колонку Capto Adhere.
18. Способ по п. 1, отличающийся тем, что образец представляет собой образец культуры клеток.
19. Способ по п. 1, отличающийся тем, что pH загруженного образца составляет от 5,0 до 9,0.
20. Способ по п. 19 , отличающийся тем, что pH загруженного образца составляет от 6,0 до 8,0.
21. Способ по п. 20 , отличающийся тем, что pH загруженного образца составляет приблизительно 7,0.
22. Способ по п. 1, отличающийся тем, что pH загруженного образца является таким же или больше pI белка.
23. Способ по п. 1 , отличающийся тем, что pH промывочного буфера составляет от приблизительно 5,0 до приблизительно 9,0.
24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что pH промывочного буфера составляет приблизительно 7,0.
25. Способ по п. 1, отличающийся тем, что pH элюирующего буфера составляет от приблизительно 5,0 до приблизительно 9,0.
26. Способ по п. 25, отличающийся тем, что pH элюирующего буфера составляет приблизительно 7,0.
27. Способ по п. 1, отличающийся тем, что способ дополнительно включает добавление детергента к образцу перед загрузкой образца на хроматографическую колонку.
28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что детергент представляет собой Тритон X-100.
29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что детергент добавляют к образцу при конечной концентрации 0,5%.
30. Способ очистки ДНКазы из образца культуры клеток, включающий:
добавление детергента к образцу культуры клеток;
загрузку образца напрямую на хроматографическую колонку смешанного действия;
промывку колонки первым промывочным буфером;
промывку колонки вторым промывочным буфером; и
элюирование ДНКазы с колонки элюирующим буфером.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что второй промывочный буфер и элюирующий буфер, каждый имеет электропроводность 80 мСм/см или выше.
32. Способ по п. 30, отличающийся тем, что второй промывочный буфер содержит 0,8 М (NH4)2SO4.
33. Способ по п. 30, отличающийся тем, что элюирующий буфер содержит 1 М NaCl.
34. Набор, содержащий промывочный буфер, имеющий электропроводность приблизительно 80 мСм/см или выше, и элюирующий буфер, имеющий электропроводность приблизительно 80 мСм/см или выше.
35. Набор по п. 34, отличающийся тем, что промывочный буфер содержит приблизительно 0,8 M (NH4)2SO4 и элюирующий буфер содержит приблизительно 1 М NaCl.
Наверх