Средство, обладающее гемостимулирующей активностью, и способ его получения - заявка 2017103243 на патент на изобретение в РФ

1. Средство, обладающее гемостимулирующей активностью, содержащее ДНК животного происхождения не менее 95%, белка не более 1%, при этом длина фрагментов ДНК составляет от 200 до 600 п. н.о., а гиперхромный эффект не менее 30%, отличающееся тем, что его получают путем приготовления растворов исходного сырья ДНК и инертного нейтрального органического полимера, при низких концентрациях в водном растворе устойчивого к воздействию ионизирующего излучения, смешивания приготовленных растворов, облучения полученной смеси ионизирующим излучением и последующей очистки и концентрирования целевого продукта.
2. Способ получения средства по п.1, обладающего гемостимулирующей активностью, включающий приготовление раствора ДНК, приготовление раствора инертного нейтрального органического полимера, при низких концентрациях в водном растворе устойчивого к воздействию ионизирующего излучения, облучение ионизирующим излучением и смешивание полученных растворов, отличающийся тем, что смешивание полученных растворов осуществляют до облучения ионизирующим излучением и, кроме того, дополнительно проводят очистку раствора ДНК от примесных белков, расщепление исходной ДНК на низкомолекулярные фрагменты и итоговую очистку и концентрирование целевого продукта, при этом при использовании исходного сырья ДНК с содержанием примесных белков менее 2% очистку раствора ДНК от примесных белков проводят путем расщепления примесных белков одновременно с расщеплением исходной ДНК при облучении смеси растворов исходного сырья ДНК и инертного нейтрального органического полимера, при низких концентрациях в водном растворе устойчивого к воздействию ионизирующего излучения, и последующим отделением образовавшихся низкомолекулярных фрагментов белка и ДНК размером до 100 кДа любым доступным способом, а при использовании исходного сырья ДНК с содержанием примесных белков от 2 до 40% предварительно проводят дополнительную очистку раствора исходного сырья ДНК от примесных белков путем протеолиза, включающего приготовление раствора исходного сырья ДНК в водном солевом или буферном растворе, обеспечивающим поддержание рН раствора в ходе ферментолиза в пределах, необходимых для оптимального действия используемых протеаз, обработку полученного раствора исходного сырья ДНК комплексом нейтральных и щелочных протеаз, инактивацию добавленных ферментов и отделение образовавшихся белковых фрагментов любым доступным способом.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья ДНК используют ДНК животного происхождения, полученную любым известным способом, с содержанием ДНК не менее 60%, содержанием белка не более 40% и не содержащую в своем составе иных полимерных молекул природного или искусственного происхождения с молекулярным весом более 100 кДа, кроме белка и ДНК.
4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что для приготовления раствора ДНК при использовании исходного сырья, содержащего не менее 90% ДНК и не более 2% примесного белка, в качестве растворителя используют очищенную воду, процесс растворения проводят при температуре от 35 до 45°C в течение от 10 до 20 ч при постоянном перемешивании, а количество исходного сырья ДНК и растворителя подбирают таким образом, чтобы концентрация ДНК в полученном растворе составляла от 40 до 60 мг/мл.
5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что при использовании исходного сырья ДНК с содержанием ДНК не менее 60% и примесных белков от 2 до 40% для получения раствора ДНК предварительно проводят очистку раствора исходного сырья ДНК от примесных белков, для чего при приготовлении раствора исходного сырья ДНК в качестве растворителя используют водный раствор гидрокарбоната натрия концентрацией от 1,5 до 2,5 мас. %, обеспечивающий поддержание рН раствора в ходе ферментолиза в пределах от 6,0 до 9,0, при этом растворение ДНК проводят при температуре от 35 до 45°C в течение от 3 до 5 ч при постоянном перемешивании, а количество исходного сырья ДНК и солевого раствора подбирают таким образом, чтобы концентрация ДНК в полученном растворе составила от 40 до 60 мг/мл, после чего приготовленный раствор исходного сырья ДНК нагревают до температуры от 55 до 65°C, добавляют комплекс нейтральных и щелочных протеаз до концентрации от 1 до 3%, полученную смесь инкубируют при температуре от 55 до 65°C в течение от 3 до 5 ч при постоянном перемешивании, затем проводят инактивацию добавленных ферментов нагреванием реакционной смеси при температуре от 70 до 90°C в течение от 1 до 3 ч и отделяют образовавшиеся агрегаты центрифугированием при скорости вращения центрифуги от 6000 до 9000 об/мин в течение от 10 до 30 мин.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что в качестве комплекса нейтральных и щелочных протеаз используют препарат протеолитического действия «Алкалаза 2,4 LFG», с рабочим температурным режимом от 40 до 60°C, разрешенный для использования в пищевой промышленности.
7. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве инертного нейтрального органического полимера, при низких концентрациях в водном растворе устойчивого к воздействию ионизирующего излучения, используют полиэтиленгликоль с молекулярной массой от 400 до 6000 Да или триблок-сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена с молекулярной массой от 400 до 5600 Да и соотношением полиэтиленоксидного и полипропиленоксидного компонентов в пределах от 3:8 до 6:3.
8. Способ по п. 2, отличающийся тем, что для приготовления раствора инертного нейтрального органического полимера, при низких концентрациях в водном растворе устойчивого к воздействию ионизирующего излучения, используют очищенную воду, процесс растворения проводят при температуре от 35 до 45°C в течение от 10 до 20 ч при постоянном перемешивании, а концентрация полимера в полученном растворе составляет от 80 до 120 мг/мл.
9. Способ по п. 2, отличающийся тем, количества растворов ДНК и инертного нейтрального органического полимера, при низких концентрациях в водном растворе устойчивого к воздействию ионизирующего излучения, подбирают таким образом, что после смешения растворов концентрация ДНК в полученной смеси составляет от 20 до 30 мг/мл, а концентрация полимера - от 45 до 55 мг/мл.
10. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве ионизирующего излучения используют поток ускоренных электронов в дозе от 3 до 6 Мрад, а в качестве источника ускоренных электронов - импульсный линейный ускоритель ИЛУ-6 или ИЛУ-10.
11. Способ по п. 2, отличающийся тем, что итоговую очистку от образовавшихся после облучения низкомолекулярных фрагментов ДНК и иных низкомолекулярных примесей с молекулярной массой менее 100 кДа, а также концентрирование раствора целевого продукта проводят одномоментно диафильтрацией через ультрафильтрационную систему с диаметром пор 100 кДа, при этом кратность концентрирования составляет от 10 до 30.
12. Способ по п. 2, отличающийся тем, что для удобства хранения целевой продукт подвергают лиофильной сушке.
Наверх