Патенты автора ФЕРРАРИ Эудженио (US)
Группа изобретений относится к способу амплифицирования геномного локуса в бактериальной клетке in vivo, бактериальной клетке-хозяину, его содержащей и способной его амплифицировать, а также культуре бактериальных клеток, способной амплифицировать геномный локус. Способ предусматривает введение локуса со структурой A1-P-M-A2 в популяцию бактериальных клеток-хозяев, приведение указанной популяции клеток в контакт с ингибитором фермента, необходимого для жизнеспособности клетки, культивирование и отбор клеток, которые являются устойчивыми к указанному ингибитору. В структуре локуса А1 и А2 являются прямыми повторами, Р содержит кодирующую последовательность для белка, представляющего интерес, способного экспрессироваться в бактериях, М содержит кодирующую последовательность для фермента, функционально связанную с промотором. Клетки, которые являются устойчивыми к указанному ингибитору, имеют множество копий указанной амплификационной единицы. Группа изобретений обеспечивает увеличение уровня экспрессии белка, представляющего интерес, в клетках-хозяевах. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл., 4 пр.
УЛУЧШЕННАЯ ПРОДУКЦИЯ БЕЛКА В BACILLUS // 2515112
Изобретение относится к области биотехнологии. Представлен выделенный химерный полинуклеотид для усиления продуцирования представляющего интерес гетерологичного белка, содержащий полинуклеотидную последовательность промотора SigA или SigH, функционально связанную с полинуклеотидом, кодирующим белок YmaH, причем химерный полинуклеотид содержит последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 1, 2, 3 или 13. Также описаны вектор экспрессии, содержащий указанную нуклеотидную конструкцию, и клетка-хозяин Bacillus для продукции представляющего интерес гетерологичного белка, содержащая указанный вектор. Предложен способ получения модифицированной клетки Bacillus, включающий трансформацию клетки-хозяина Bacillus-продуцента представляющего интерес гетерологичного белка указанным вектором; и выращивание указанной модифицированной клетки в оптимальных условиях. Описан способ получения представляющего интерес белка в модифицированной клетке Bacillus, где способ включает культивирование указанной клетки-хозяина; и выращивание указанной модифицированной клетки Bacillus в оптимальных условиях. Кроме того, раскрыт способ усиления экспрессии представляющего интерес гетерологичного белка из Bacillus, включающий получение указанной модифицированной клетки Bacillus; выращивание модифицированной клетки Bacillus в
оптимальных условиях; и экспрессию указанного представляющего интерес белка в модифицированной клетке Bacillus, где экспрессия указанного представляющего интерес гетерологичного белка в модифицированной клетке Bacillus усиливается по сравнению с экспрессией указанного представляющего интерес белка в указанной родительской клетке-хозяине Bacillus. Изобретение позволяет повысить выход целевого белка за счет сверхэкспрессии белка YmaH. 7 н. и 23 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 пр.
МOДИФИЦИРОВАННЫЕ ПРОТЕАЗЫ // 2496875
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой выделенный модифицированный полинуклеотид, кодирующий модифицированную полноразмерную протеазу. При этом часть указанного модифицированного полинуклеотида, которая кодирует про-участок указанной полноразмерной протеазы, содержит мутацию, кодирующую замену в одном аминокислотном положении, выбранном из положений, эквивалентных аминокислотным положениям 28-108 и 109 SEQ ID NO:5, 13 или 244, где указанный полинуклеотид имеет нуклеотидную последовательность, идентичную, по меньшей мере, приблизительно на 95% полинуклеотидной последовательности SEQ ID NО:4, 12 или 243 с учетом вырожденности генетического кода, где указанная модифицированная полноразмерная протеаза представляет собой сериновую протеазу, где указанная модифицированная полноразмерная протеаза представляет собой щелочную сериновую протеазу, полученную из предшественника щелочной сериновой протеазы дикого типа, где указанный предшественник щелочной сериновой протеазы представляет собой щелочную сериновую протеазу В. clausii или В. lentus, и где указанная модифицированная полноразмерная протеаза имеет повышенную активность продукции по сравнению с полипептидом указанного предшественника. Изобретение позволяет расширить арсенал высокоэффективных протеаз. 5 н. и 11 з.п. ф-лы, 9 ил., 2 табл., 4 пр.
