Патенты автора Ениколопов Григорий Николаевич (RU)
Изобретение относится к области экспериментальной биологии и медицины и касается вариантов способа окрашивания препаратов цельных биологических тканей и органов методом клик-гистохимии. Предложенные способы позволяют окрашивать препараты образцов биологических тканей молодых и взрослых животных целиком, без предварительного секционирования. Использование предлагаемых способов окрашивания позволяет сохранять морфологию образцов и высокоспецифично выявлять этинильную группу даже в толще крупных препаратов (не менее 5 мм) биологической ткани. Изобретение значительно облегчает и ускоряет процесс визуализации и анализа препаратов за счет использования методов трехмерной микроскопии и томографии. Препараты образцов, окрашенные предлагаемыми способами, обладают высоким соотношением сигнал : фон и специфичностью окраски, что позволяет использовать их для проведения автоматизированного количественного и качественного анализа выявленных меток. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 пр., 2 ил.
Группа изобретений относится к области экспериментальной биологии и медицины для приготовления тотальных препаратов биологических тканей для оптической проекционной томографии, конфокальной, мультифотонной и светоплоскостной микроскопии и может быть использована для предклинических испытаний фармакологических препаратов и оценки физиологических воздействий на организм, а также для работы с материалом биопсий в диагностических и исследовательских целях. Способ иммуногистохимического окрашивания тотальных препаратов образцов биологической ткани включает фиксацию ткани раствором параформальдегида. Также способ включает постфиксацию, которую сначала проводят 0,5-1%-ным параформальдегидом в течение 48 ч при 4°C, а затем после трехкратной отмывки фосфатным буфером при комнатной температуре, в растворе 20%-ного диметилсульфоксида в 100%-ном метаноле в течение 1-2 ч при комнатной температуре. После этого образец ткани отбеливают в растворе, содержащем 100%-ный метанол:диметилсульфоксид: 30% Н2О2 в соотношении 4:1:1, в течение 2-4 ч на ярком свету при комнатной температуре до полного обесцвечивания. Затем образец отмывают 3 раза по 60 мин в 100%-ном метаноле при комнатной температуре и замораживают не менее чем на 1 час при -70…-80°C, после чего регидратируют последовательно в 50, 25 и 12,5%-ных растворах метанола в фосфатном буфере по 45-60 мин в каждом при комнатной температуре. Затем образцы трижды отмывают от метанола фосфатным буфером, причем два раза отмывают по 1-2 ч при комнатной температуре, а последнюю отмывку проводят в течение ночи при 4°C. Последующую пермеабилизацию образца проводят в фосфатном буфере, содержащем 2%-ный Triton Х-100, 5%-ную нормальную сыворотку, 5%-ный диметилсульфоксид, в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем образец отмывают трижды в фосфатном буфере, содержащем 0,2%-ный Triton Х-100, причем два раза отмывают по 30-60 мин при комнатной температуре, а последнюю отмывку проводят в течение ночи при 4°C. После этого проводят инкубацию последовательно в растворах первичных и вторичных антител, приготовленных на буфере, состоящем из 0,05 М Tris-HCl с pH 7,5; 0,15 М NaCl; 0,2% Triton Х-100, 5% диметилсульфоксид и 2,5-5,0% нормальной сыворотки животного-хозяина вторичных антител, при 4°C в течение 2-7 суток, с отмывками после каждой инкубации в буфере, состоящем из 0.05 М Tris-HCl с pH 7,5; 0,15 М NaCl; 0,2% Triton Х-100, сначала 3 раза по 60 мин при комнатной температуре, а затем в течение ночи при 4°C. Окрашенные образцы дегидратируют последовательно в 50, 96%-ных растворах этанола в фосфатном буфере по 45-60 мин в каждом при комнатной температуре. Затем образцы выдерживают сначала в 100%-ном этаноле при комнатной температуре 2-3 раза по 45-60 мин, а после в 2-бутоксиэтаноле при 4°C в течение 12-18 ч. Дегидратированные образцы просветляют при комнатной температуре в смеси бензил бензоата:бензиловый спирт, взятых в соотношении 2:1 в течение 3-4 ч. При этом способ окрашивания, начиная с операции постфиксации, проводят при помешивании со скоростью 650-800 об/мин. Второй вариант способа заключается в том, что инкубацию проводят в растворе флуоресцентно-меченных первичных антител, приготовленных на буфере, состоящем из 0,05 М Tris-HCl с pH 7,5; 0,15 М NaCl; 0,2% Triton Х-100, 5% диметилсульфоксид и 2,5-5.0% нормальной сыворотки, при 4°C в течение 2-7 суток. Достигаемый при этом технический результат заключается в осуществлении окрашивания тотальных препаратов образцов биологических тканей с сохранением их морфологии и обеспечением более широкого охвата выявляемых антигенов, а также в возможности проведения количественного анализа иммуногистохимически выявленных меток за счет высокого соотношения фон-сигнал и снижения аутофлуоресценции. 2 н. и 16 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.
Группа изобретений относится к области биотехнологии и направлена на молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют белок, проявляющий свойства биосенсора для детекции пероксида водорода в живых клетках, обладающий флуоресценцией в красной области спектра. Молекулы нуклеиновых кислот получены методами генной инженерии. Белок для детекции пероксида водорода имеет аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:2. Также обеспечиваются клетка-хозяин и кассета экспрессии, содержащие указанные молекулы нуклеиновых кислот. Использование изобретений позволяет осуществлять микроскопию в толстых слоях тканей, а также обеспечивает возможность совместной микроскопии нескольких флуоресцентных конструкций. 4 н.п. ф-лы, 7 ил.
Изобретение относится к области радиобиологии и экспериментальной медицины. Способ оценки фармакологических и токсикологических свойств веществ заключается в том, что исследуемое вещество вносят в питательную среду личинок и мух Drosophila melanogaster, сочетающих в своем геноме гипоморфные мутации ss- и СG5017-генов. Облучают личинок и мух ионизирующими лучами дозой в 1-10 рентген. Оценивают жизнеспособность, структуры конечностей и уровень транскрипции генов CG 1681, CYP6G1 и ss. Сравнивают полученные характеристики мух, выращенных на среде, содержащей исследуемое вещество, и мух, выращенных на среде, не содержащей исследуемое вещество, облученных и необлученных, и определяют фармакологические свойства вещества по результатам сравнения жизнеспособности, количества тарзальных сегментов конечности и уровня транскрипции генов CG 1681, CYP6G1 и ss у мух всех сформированных групп. Способ позволяет осуществить эффективный быстрый направленный отбор и определить свойства веществ с токсикопротекторными, радиопротекторными, токсикосенсибилизирующими и радиосенсибилизирующими свойствами. 7 ил., 2 табл., 2 пр.
