Патенты автора Родионов Павел Валерьевич (RU)
Изобретение относится к области медицины и может быть применено для определения катехоламинов их метаболитов в объектах на основе матриц сложного состава, в том числе нерастворимых в воде, без их дополнительной пробоподготовки. Способ осуществляют путем изменения принципиальной схемы формирования и измерения аналитического сигнала, регистрируемого в чувствительном слое биосенсора, - переходом к твердофазной флуоресценции. Действие биосенсора основано на реакции ферментативной дериватизации катехоламинов и их метаболитов с органическими аминами (o-фенилендиамин, этилендиамин) с образованием производных хиноксалина, флуоресцирующих в области 450-550 нм. При этом компоненты индикаторной реакции иммобилизованы в чувствительном слое на поверхности биосенсора, в результате флуоресцентный сигнал формируется и регистрируется непосредственно на твердой поверхности в режиме отражения. Наибольшую интенсивность флуоресцентного сигнала получают при использовании в качестве дериватизирующего агента o-фенилендиамина и проведении процесса при концентрации пероксидазы хрена - 10-25 нМ; концентрации пероксида водорода - 250-500 мкМ; концентрации o-фенилендиамина - 50-100 мкМ; концентрации катехоламинов и метаболитов - 5-2000 нМ. В качестве буферного раствора берут 5 мМ фосфатный буферный раствор pH 9.5-10.0. Чувствительный слой биосенсора представляет собой двухслойную пленку {хитозан - o-фенилендиамин/хитозан - пероксидаза}, нанесенную ровным слоем на поверхность стеклянной пластинки (14×40 мм). Изобретение обеспечивает простое и чувствительное определение катехоламинов и их метаболитов в объектах, анализ которых с использованием оптических методов детектирования по инструментальным причинам был ранее затруднен или невозможен вследствие мешающего влияния матрицы реального объекта, а также недостаточной чувствительности и воспроизводимости биосенсоров. 3 з.п. ф-лы, 4 ил.
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ ПРОИЗВОДНЫХ КАТЕХОЛАМИНОВ И ИХ МЕТАБОЛИТОВ МЕТОДОМ ДЕРИВАТИЗАЦИИ // 2546672
Изобретение относится к новому способу получения флуоресцирующих катехоламинов, выбранных из допамина и адреналина, и их метаболитов, выбранных из гомованилиновой и ванилилминдальной кислот, методом дериватизации. Соединения могут быть использованы в качестве высокочувствительных и селективных маркеров для определения различный заболеваний. Способ дериватизации включает окисление исходных соединений и их взаимодействие с образующими конденсированные структуры аминами в среде CAPS-буферного раствора или глицин - КОН 0.1 мМ пероксидом водорода в присутствии в качестве катализатора пероксидазы хрена. Предпочтительно процесс проводят в 0,1 М буферном растворе при концентрации пероксидазы хрена 0,01-1 мкМ; концентрации пероксида водорода - 100 мкМ, концентрации амина - 0,1-33 мМ; концентрации катехоламинов и метаболитов - 0,03-1 мкМ. Способ является простым и технологичным, т.к. не требует повышенной температуры и осуществляется в водном растворе. 1 з.п.ф-лы, 2 ил., 3 пр.
