Патенты автора Манувера Валентин Александрович (RU)
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Описан новый высоковирулентный штамм вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ) серотипа 1, обладающий высокой биологической активностью в нативном виде, а также высокой антигенной и иммуногенной активностью после инактивации. Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России под № 2888. Штамм «DD1» вируса ИББ может быть использован для производства высокоиммуногенных инактивированных сорбированных и эмульгированных вакцин. 3 табл., 4 пр.
Предложен способ получения рекомбинантного белка VP3 вируса инфекционной бурсальной болезни, включающий создание генно-инженерной конструкции. При этом используют клетки эмбриональной почки человека (линия Expi293F), трансфекцию которых проводят плазмидой pEG-VP3-His, содержащей вставку по сайтам рестрикции HindIII и BamHI нуклеотидной последовательности, кодирующей зрелый белок VP3 штамма DDI IBDV с 6-гистидиновым участком на С-конце и стоп-кодоном (нуклеотидная последовательность гена VP3-His - SEQ ID №1), под контролем немедленно-раннего промотера цитомегаловируса, а также содержащей ген, обеспечивающий устойчивость к неомицину и канамицину, под контролем промотера ранних генов вируса SV40. Отбирают клоны, растущие на селективном маркере G-418. Анализируют клоны на продукцию рекомбинантного VP3 с помощью вестерн-блоттинга с окраской моноклональными антителами на гистидиновый тэг. Переводят клетки целевого клона в суспензионную культуру, культивируют, затем получают цитоплазматическую фракцию клеток линии Expi293F/VP3-His. Рекомбинантный белок VP3 выделяют из указанной цитоплазматической фракции клеток с помощью аффинной хроматографии на колонке с сорбентом Ni-NTA-сефарозой, после чего проводят анализ антигенной активности выделенного рекомбинантного белка VP3. Изобретение обеспечивает получение стабильных линий клеток человека, продуцирующих правильно фолдированный и высокоиммуногенный белок VP3. 6 ил., 6 пр.
Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии, в частности к рекомбинантной плазмидной ДНК pET15/N-Dest+. Указанная плазмидная ДНК предназначена для экспрессии в клетках Escherichia coli гена дестабилазы медицинской пиявки Hirudo medicinalis. Настоящее изобретение также относится к способу получения плазмидной ДНК pET15/N-Dest+ и к штамму Escherichia coli BL21(DE3)Gold/pET15/N-Dest+, полученному путем трансформации штамма Escherichia coli BL21(DE3)Gold плазмидой ДНК pET15/N-Dest+. Настоящий штамм является продуцентом рекомбинантной дестабилазы. Изобретение также относится к способу получения штамма Escherichia coli BL21(DE3)Gold/pET15/N-Dest+ и к способу получения рекомбинантной дестабилазы с использованием указанного штамма. Изобретение позволяет получить рекомбинантную дестабилазу с высоким выходом и чистотой. 5 н. и 5 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл., 6 пр.
ШТАММ Escherichia coli BL21(DE3)Gold/pETmin-CypA - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ЦИКЛОФИЛИНА А ЧЕЛОВЕКА // 2557305
Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма Escherichia coli BL21(DE3)Gold/pETmin-CypA - продуцента рекомбинантного циклофилина А человека. Охарактеризованный штамм получен путем трансформации клеток штамма BL21(DE3)Gold плазмидой pETmin-CypA. Плазмида имеет размер 5865 пар нуклеотидов и содержит фрагмент XhoI-NdeI вектора рЕТ-22b(+), несущего ген устойчивости к ампициллину ampR, промотор и терминатор РНК-полимеразы фага Т7 и полилинкер. По сайтам XhoI-NdeI клонирован фрагмент, полученный с помощью ПЦР с использованием олигонуклеотидных праймеров 5′-TTATACATATGGTCAACCCGACCGTGTTCTTC и 5′-TTTCTCGAGTTATTCGAGTTGTCCACAGTCAGC плазмиды pCyPAwt/pGEX-2TK с клонированным фрагментом гена рчЦфА размером 498 п.н. Предложенный штамм высокопродуктивен, не требует сложной системы очистки и может быть использован в противоопухолевой терапии. 2 ил.
