Патенты автора Удальева Светлана Германовна (RU)
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli N16 (pM.AluBI), являющийся продуцентом ДНК-метилтрансферазы AluBI, переносящей метальную группу с S-аденозил-L-метионина (SAM) на 6-й атом азота аденинового основания сайта узнавания, с образованием метилированной последовательности 5′-(m6A)GCT-3′/3′-TCG(m6A)-5′ на обеих цепях ДНК. Штамм получен путем трансформации клеток Escherichia coli RR1 плазмидой pM.AluBI-16. Данная плазмида сконструирована на основе вектора pUC19 и содержит ген, кодирующий ДНК-метилтрансферазу AluBI из природного штамма Arthrobacter luteus В. Изобретение позволяет получить рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli N16 (рМ.AluBI), продуцирующий с высоким выходом ДНК-метилтрансферазу с новой специфичностью. 4 ил., 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ сайт-специфического гидролиза С5-метилированной последовательности ДНК. Готовят реакционную смесь, содержащую буферный раствор и образец С5-метилированной ДНК, добавляют к смеси диметилсульфоксид до конечной концентрации 15-25%, а затем MD-эндонуклеазу, смесь инкубируют в течение часа при 30-37°C с последующим анализом результата гидролиза ДНК методом гель-электрофореза, при этом в качестве MD-эндонуклеазы используют GlaI с концентрацией 4-8 е.а./мкл или PcsI с концентрацией 1-2 е.а./мкл. Изобретение позволяет повысить эффективность сайт-специфического гидролиза С5-метилированной последовательности ДНК. 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 пр.
СПОСОБ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОГО ГИДРОЛИЗА ДНК // 2597984
Изобретение относится к области биотехнологии. Способ предусматривает приготовление реакционной смеси, содержащей буферный раствор и исследуемый образец ДНК. Добавляют к смеси ДНК-метилтрансферазу с активностью 2 е.а./мкл, модифицирующую цитозин в положении С5, выбранную из группы: Fsp4HI, НаеIII, HspAI, AluI, в зависимости от того, какой сайт необходимо расщепить, смесь инкубируют в течение часа, полученную С5-метилированную ДНК обрабатывают MD-эндонуклеазой ElmI с активностью 2 е.а./мкл или PkrI с активностью 2 е.а./мкл в зависимости от того, в какой позиции необходимо гидролизовать ДНК. С помощью данного способа можно осуществить исчерпывающий сайт-специфический гидролиз ДНК по шести- и восьминуклеотидным последовательностям, не расщепляемым традиционно используемыми эндонуклеазами рестрикции. 2 з.п. ф-лы, 3 ил., 6 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой штамм Plantibacter flavus 3Kz, депонированный в ВКПМ под регистрационным номером В-12248, являющийся продуцентом метилзависимой сайт-специфической эндонуклеазы PfsI, которая узнает и расщепляет обе цепи последовательности ДНК , перед центральным нуклеотидом N, с образованием однонуклеотидных 5′-выступающих концов, при наличии в данной последовательности не менее семи С5-метилированых цитозинов. Изобретение позволяет получить бактериальный штамм, продуцирующий метилзависимую сайт-специфическую эндонуклеазу PfsI с новой сайт-специфичностью. 2 ил., 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli N106 (pM.AgsI) . Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli N106 (pM.AgsI) получают трансформацией клеток штамма Escherichia coli RR1 плазмидой pM.AgsI-106, продуцирующий ДНК-метилтрансферазу M.AgsI, узнающую нуклеотидную последовательность ДНК 5′-TTSAA-3′ и метилирующую внешний остаток аденина этой последовательности с образованием 5′-TTSA(m6A)-3′. Вышеописанный способ позволяет получить рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli N106 (pM.AgsI), продуцирующий высокоактивную ДНК-метилтрансферазу заданной специфичности. 5 ил., 1 табл., 3 пр.
