Патенты автора Найденова Екатерина Владимировна (RU)
Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской диагностике, конкретно к способу определения РНК вируса Луйо (сем. Arenaviridae) методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) в режиме реального времени в материале от людей, животных и из объектов окружающей среды, и может быть использовано в научно-исследовательских и медицинских учреждениях, службах Роспотребнадзора. Задачей изобретения является разработка способа выявления РНК вируса Луйо, который предполагает проведение обратной транскрипции и ПЦР с учетом результатов в режиме реального времени с использованием соответствующих праймеров и зондов с последующей детекцией по наличию и отсутствию пересечения кривой флуоресценции на каждом из используемых каналов с установленной на соответствующем уровне пороговой линией. Накопление флуоресцентного сигнала по каналу JOE в исследуемых пробах свидетельствует о наличии РНК вируса Луйо, при этом результат считается валидным, если параллельно в этих же образцах по каналу FAM регистрируется накопление флуоресцентного сигнала ВКО. 5 пр., 1 табл., 7 ил.
Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются набора синтетических олигонуклеотидных праймеров и способа его использования. Представленный набор включает две пары праймеров, имеющих следующую структуру - FIV F: 5′-AAGAGTCCCAAATATGCCATAGG-3′ и FIV R: 5′-TCCATCCAAATTGCTACTGTTC-3′; FeLV F: 5′-GAATAAACCTCTTGCTGTTTGC-3′ и FeLV R: 5′-AATCAGATCGAATGACAGAGACAC-3′. Представленные праймеры не содержат полиндромные повторы нуклеотидов, не образуют выраженные вторичные структуры и не имеют протяженных G-C участков, а температуру отжига имеют 55°C для обеих пар олигонуклеотидов. Охарактеризованный способ включает подготовку реакционной смеси путем смешения буфера 10-кратного для ПЦР - 2,5 мкл, дНТФ (25 мМ) - 0,4 мкл, праймеров FIV F, FIV R, FeLV F и FeLV R (15 пмоль/мкл) по 1 мкл, Taq полимеразы (5 ед./мкл) - 0,2 мкл, MgCl2 (50 мМ) - 1,5 мкл, бидистиллированной воды - 11,4 мкл и пробы ДНК - 5 мкл, при этом амплификацию проводят в следующем режиме: тотальная денатурация 95°C - 3 мин, цикл денатурация (95°C - 20 или 60 сек) - отжиг (55°C - 20 или 60 сек) - элонгация (72°C - 40 или 60 сек), причем цикл денатурация-отжиг-элонгация повторяется 35 раз, заключительная элонгация 72°C - 5 мин, хранение 4°C - 10 мин, а детекция полученных результатов осуществляется методом электрофореза в 1,5%-ном агарозном геле. По наличию или отсутствию амплифицируемых фрагментов нуклеотидных последовательностей длиной 397 п.н. для FIV (feline immunodeficiency virus) и 221 п.н. для FeLV (feline leukemia virus) судят о наличии или отсутствии вирусов в организме кошки. Изобретения могут быть использованы в научных исследованиях для обнаружения генетического материала вирусов иммунодефицита - FIV и лейкемии FeLV кошек методом мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в крови животных. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл.
Изобретение относится к биотехнологии
