Патенты автора Григорьева Евгения Сергеевна (RU)
Изобретение относится к диагностическим методам в медицине и может быть использовано в онкологии для определения циркулирующих опухолевых клеток у больных с целью определения чувствительности циркулирующих опухолевых клеток к химиотерапии и прогнозирования вероятности возникновения гематогенных метастазов при раке молочной железы. Определяют экспрессию на ядросодержащих клетках общего лейкоцитарного маркера CD45, эпителиальных маркеров CD326 (ЕрСАМ) и пан-цитокератина АЕ1/АЕ3 и маркера эритроцитов CD235a (гликофорина А), для этого образец ЭДТА-стабилизированной венозной крови в объеме 9 мл забирают утром натощак, первый мл крови в исследование не берут, далее проводят обогащение популяции циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) с помощью метода негативной селекции, к образцу крови добавляют полистироловые частицы с сорбированными антителами к CD45, CD66b и CD235a (гликофорин А) в концентрации 50 мкл на 1 мл крови и инкубируют при комнатной температуре в течение 20 минут, затем образец разводят 1:1 фосфатно-солевым буфером, наносят на градиент плотности с р равным 1.077 при соотношении 1 часть градиента и 2 части разбавленного образца, далее образцы центрифугируют при 1200g в течение 20 минут, затем удаляют 2/3 верхней фракции и собирают содержимое кольца на границе раздела фаз градиент-плазма, далее полученную клеточную суспензию отмывают в 3 мл фосфатно-солевого буфера, содержащего 5% фетальной бычьей сыворотки, центрифугированием при 300g в течение 10 минут и дважды при 110g по 10 минут, супернатант удаляют, к клеточному осадку добавляют 150 мкл буфера, далее образец делят на две части: неокрашенную контрольную пробу в объеме 50 мкл и окрашенную пробу в объеме 100 мкл, в обе пробы добавляют по 25 мкл фиксирующего буфера PerFix-nc Buffer 1, перемешивают на вортексе и инкубируют в течение 15 минут при 18-25°С, затем добавляют 300 мкл пермеабилизирующего буфера PerFix-nc Buffer 2, перемешивают на вортексе, в пробы немедленно добавляют антитела анти-CD45-АРС-Су7 (клон HI30, мышиные IgG1), анти-CD326(EpCAM)-AF488 (клон 9С4, мышиные IgG2b), анти-пан-цитокератин-АР647 (клон АЕ1/АЕ3, мышиные IgG1) и анти-CD235а(гликофорин А)-РегСР-Су5.5 (клон HI264, мышиные IgG2a) из расчета 5 мкл антител на 106 клеток, инкубируют в темноте в течение 20-30 минут при 18-25°С, далее к образцам добавляют по 3 мл буфера PerFix-nc Buffer 3 и центрифугируют при 300g в течение 6 минут, супернатант удаляют, затем к пробам добавляют по 100 мкл буфера, после чего весь полученный объем образца анализируют на проточном цитометре, одновременно детектируют сигналы флуоресцентных меток: AF488, РегСР-Су5.5, AF647, АРС-Су7 и рассчитывают концентрацию циркулирующих опухолевых клеток на 1 мл цельной крови по следующей формуле. Применение изобретения обеспечивает повышение информативности и чувствительности способа. 2 пр., 2 ил., 2 табл.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для прогнозирования пятилетней безметастатической выживаемости у больных раком молочной железы. Проводят молекулярно-генетическое исследование биопсийных образцов опухолевой ткани с последующим выделением РНК и определением уровня экспрессии генов YKL-39 и CCL18 с помощью количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. В качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой уровень экспрессии генов YKL-39 и CCL18 составляет 1 УЕ. При уровне экспрессии YKL-39 и CCL18 более 1 УЕ при комбинации генов YKL-39+CCL18+ прогнозируют 100% пятилетнюю безметастатическую выживаемость. В случае комбинаций YKL-39+CCL18−, YKL-39−CCL18+, YKL-39−CCL18− прогнозируют риск возникновения гематогенных метастазов в 85%, 71% и 69% случаев, соответственно. Изобретение обеспечивает расширение области применения способа за счет использования дополнительного маркера. 1 ил., 4 пр.
Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка путем иммуногистохимического исследования препаратов первичной опухоли. Для проведения исследования используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA) клон NBP 1-54388 при рабочем разведении 1:1200. При наличии позитивной цитоплазматической экспрессии CypA в клетках первичной опухоли прогнозируют низкий риск развития гематогенных метастазов. Изобретение позволяет прогнозировать низкий риск гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка и избегать избыточной агрессивной адъювантной терапии. 2 ил., 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования гематогенного метастазирования при кишечном типе рака желудка
