Способ определения чувствительности к хемостерилянтам самцов комаров

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ .

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„ЯЦ„„1011090 (д) А 01 M 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ! - :

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

:М

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЖ (21 ) 3284899/30-15 (22) 08.05.81 (46) 15.04.83. Бюл. У 14 (72) Р.И. Лачинова, Н.ф. Захарова, С.П. Расницын, О.В. Захарченко и

H.À. Попова (71) Ордена Трудового Красного Знамени институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского (53) 632.939.1(088.8) (56) 1. Роче11 Y.,P., Craig G.Â.

Y. Есопош. Entomol., 1970, U 63, 3, 745-748. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТ

ВИТЕЛЬНОСТИ К ХЕМОСТЕРИЛЯНТАМ САМЦОВ КОМАРОВ, включающий обработку их хемостерилянтами на предимагинальной фазе, выделение из имаго самцов комаров придаточных желез и определение их чувствительности, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения,. обработку самцов комаров проводят на фазе куколки хемостерилянтом в дозе, дающей уровень стерильности 98-1003, придаточные железы выделяют из имаго в возрасте 0,5-2 сут, а чувствительность определяют по количеству белка, содержащегося в придаточных железах, и сравнивают с количеством белка у необработанных хемостерилянтом сам-g цов.

11090

Т а б л и ц а 1 материли" зованные 100

0,23+0,02 62,2

0,37+0,02 100,0. Контроль 100

1 10

Изобретение относится к медицине и сельскому хозяйству, в частности к способам борьбы с насекомыми - переносчиками болезней человека путем половой стерилизации химическими веществами, и может быть использовано при выборе препаратов стерилизующего действия и их доз для различных видов комаров.

Известен способ определения чувствительности к хемостерилянтом самцов комаров Aedea aegypti, заключающийся в том, что самцов на предимагинальной фазе развития - фазе личинки обрабатывают хемостерилянтом, выделяют из имаго самцов придаточные железы и .по объему желез определяют чувствительность самцов к хемостерилянту 11 .

Однако этот способ является очень неточным, так как придаточные железы самцов Аейев.aegypti не имеют определенной формы и их лишь условно ,принимают за конус и по соответствую:щей формуле рассчитывают объем, при

Изменении нормальной формы, например после копуляции, при стрессовых воздействиях и т.п., когда железы могут принять еще более неопределенные очертания, количественная оценка их по объему известным способом вообще становится невозможной.

Целью изобретения является повышеwe точности и сокращение времени определения.

Поставленная цель достигается тем.„ что обработку самцов комаров проводят на фазе куколки хемостерилянтом в дозе, дающей уровень стерильности

98-1003, придаточные железы выделяют из имаго в возрасте 0,5-2 сут а чувствительность определяют по количеству белка, содержащегося в придаточных железах, и сравнивают с количеством белка у необработанных хемостерилянтом самцов.

Предложенный способ был испытан на комарах Aedes aegypti L, Anopheles atroparvua.

Пример 1. В качестве хемостерилянта использовали тиофосфамид (тиотэф).

10 Брали 300 куколок самцов, из которых 120 - контрольные, 180 - обработаны 0,93 тиотэфом, т.е. дозой, дающей уровень стерильности 98, путем погружения в раствор на 4 ч

1S с последующим промыванием в чистой дехлорированной воде. Вылетевших самцов из обработанных и необработанных куколок содержали в одинаковых условиях при температуре 28+1 С и о

2р относительной влажности 75t53 °

Из контрольных и обработанных самцов в возрасте 0,5 сут выделили по 25 пар придаточных желез в физиологическом растворе "aeges", иэ них

2s экстрагировали секрет. Для этого выделенные железы перенесли в пробирку с 1,28 М NaCl и поместили на 24 ч в холодные условия. Надосадок отделили от осадка центрофугированием при 8000 об/мин в течение

10 мин и определили в нем количество белка по методу Лоури в модификации Hartåå.

Для сравнения была определена чувствительность самцов комаров к

35 тиотэфу по прототипу (по объему придаточных желез), Результаты .действия обработки тиотэфом самцов Aedes aegypti на фазе

40 куколки (О 9Ж раствор - 4 ч) на секреторную активность и размеры придаточных желез имаго в возрасте 0,5 сут, приведены в табл. 1.

361i7 11313 1,22+0,08 96,8 .

360+10 115+4 1,26+0,08 100,0

Стерилизованные 100

1,28+0,07. 79,0

54,6 367210 116+3

0,24+0,02

0,44+0,4

Контроль 100

1,62+0,10. 100,0

100,0 386+8 117+3

0,81+ 0,2

128,6

Стери- 100 лизованы

0 5

Конт- 100 роль

100,0

3 101109

Как видно иэ таблицы, обработка самцов Aedes ae ti дозой тиотэфа (0,9Ж раствор - 4 ч фаза куколка) оказывает отрицательное воздействие на секреторную активность придаточных желез имаго: у стерилизованных самцов в возрасте 0,5 сут дефицит белка полового секрета . в придаточных железах 37,83 по сравнению с контролем (не обработанными самцами) (табл. 1, графы 3., 4). Разница достоверна при Р = 0,95. В то же время при определении чувствительности по известному способу следует, что

Как видно из табл. 2, отрицатель" ное воздействие минимально эффективной дозы тиотэфа, установленное на

0,5 суточных самцах (табл. 1 графы 3, 4), стойко сохраняется у комаров старшего возраста: у стерилизованных самцов в возрасте 1 сут дефицит белка полового секрета в придаточных) железах возрос до 45,43 по сравнению с контролем (табл. 2 графы 3,4).Разница достовернапри Р=0,95.

Сравнивая данные, полученные пред- лагаемым способом на одновозрастных самцах Aedes aegypti (табл..! гра" фа 4, табл. 2 графа 4) и Anopheles

0 4 взятая доза тиотэфа не вызывает угнетающего действия на половую железу.

П р и м, е р 2. Обработку самцов комаров проводили как в примере 1.

Придаточные железы выделяли иэ самцов в возрасте 1 сут.

Результаты действия обработки тиотэфом самцов Аейез aegypti на фазе куколки-(0,94 раствор — 4 ч) на секреторную активность и размеры придаточных желез имаго в возрасте 1 сут представлены в табл. 2.

: Т а б л и ц а 2.Пример 3. Способ был испытан на самцах комаров Anopheles atro-.

parvus на фазе куколки, обработку самцов проводили как в примере 1.

Результаты действия обработки тиотэфом самцов Anopheles atroparvus на фазе куколки (О,93 раствор - 4 ч) на секреторную активность придаточных желез имаго в возрасте 0,5 сут представлены в табл. 3.

Т а б л и ц а 3

atroparvus (табл. 3 графа 5) видно, что указанные виды самцов неравноценны по чувствительности к установленным минимально эффективным дозам

Составитель Т. Лежнева

Техред Л, Пекарь Корректор A. Ильин втун

l Тираж 719

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

В 10110 тиотэфа. Исходя из полученных данных, можно считать, что 0,93-ный раствор. тиотэфа при действии на куколок в течение-4 ч является оптимальной до" зой для Anopheles atroparvus, так как у них сохраняется секреторная активность придаточных желез в пределах нормы при требуемом уровне стерильности яиц. Для самцов Aedes

aegygti эта доза токсична, так как <0 обработка куколок 0,93-ным раствором тиотэфа в течение 4 ч сопровождается ингибированием активности половых желез у имаго, Угнетение секреции половых желез у самцов приводит к снижению количества полового секрета, передаваемого самке при копуляции, что, в свою очередь, существенно влияет на половое поведение самок. 20

В гредложенном способе используют стерилизованных самцов не старше

2-х дневного возраста, поскольку установлено, что половые железы сте90 4 рилизованных и нормальн х самцов в этот период находятся в идентичном состоянии, а именно, в фазе накопления секрета и поэтому количественно сопоставимы.

Предложенный способ может быть использован для определения чувствительности к хемостерилянтам у самцов с железами любой морфологии. Способ является более точным, требует меньшего времени определения, позволяет выявлять изменения на более ранних стадиях воздействия стерилянтом, т.е. на стадиях, когда морфологические изменения желез еще не регистрируются.

Преимуществом способа является также, то что им оценивается функциональное состояние желез стерилизованных самцов непосредственно - по количеству секретированного белка, а не косвенно - по размерам желез, как это делается по известному мето ду °