Способ получения биоспецифичных фосфолипидсодержащих сорбентов

 

СПОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ ШЮСПЕЦИФИЧНЫХ ФОСФОЛИПИДСаЛЕРЖАГДК СОРБЕНТОВ на основе гелей агарозы; пключаюр91й конденсацию карбоксипроизводных фосфолипидов с аминоалкилсе-, фарозой в присутствии водорастворимого карбодиимида в растворе полярного органического растворителя, о тл и ч а ю ц и и с я тем, что, с целью улучгаения адсорбционных характеристик путем повышения содержания фосАолитшдов на сорбенте, в качестве растворителя используют диметилсульфоксид .

(19) (И) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Зов 8 01

О

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНМ-: . н aBTOaCNOMY СЮЩЕТВЪСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTMA.(21) 3486692/23-26 (22) 30.08.82

{46) 30,11 ° 83. Бюп. Р 44 (72) Л.ff. Барсуков, Г.И. Музя и Л.Д. Бергельсон (71) Институт биоорганической химии им. И.М. 1 1емякина (53) 661. 83. 12 (088. 8) (56) 1. Матросович М.В., Платэ Н,А.

Тез. Всес. снмп. "Физиологически активные полимеры и другие полимеры медицинского назначения". Л., 1975, с. 29.

2. Епг.3 . ffiochim. „ 1982â 1231 р. 311-315 (прототип).

Р (54) (57) CJIOC08 ПОЛУЧЕНИЯ БИОСПЕЦИФИЧНЫХ ФО(.ФОЛИ1ПЩСОДЕРЖАЦИХ СОРБЕНТОВ на основе гелей агарозы; включающий конденсацию карбоксипроизводных Аосдюлипидов с аминоапкилсе-., Аарозой в присутствии водорастворимого карбодиимида в растворе полярного органического растворителя, о тли чающийся тем, что, с целью улучшения адсорбционных характеристик путем повышения содержания

ЬосАолипидов на сорбенте, в качестве растворителя используют диметилсульАоксид.

1 1051095 2

Изобретение относится к способам получения биоспецеАических сорбентов на основе гелей агарозы, содержащих иммобилизованные фосфолипидные лиганды, и может быть использовано при хроматографии веществ, отли" чающихся высоким средством по отношению к липидам, таким как липид-переносящие белки, ферменты липидного фарозой в присутствии водораетворимого карбодиимнда в растворе полярйого органического растворителя, в качестве последнего используют диметилсульАоксид.

Способ осуществляют следующим образом.

Промытый хлористым натрием и водой гель аминоалкилсейарозы (АН«семетаболизма, липид-зависимые фермен." ты, мембранные белки, сывороточные лилопротеиды .и апопротеины.

Известен способ получения полимерных гидрогелей с привитыми на их поверхность функциональными группами кислого и основного характера, что обеспечивает возможность дальнейшего присоединения к ним биологически активных веществ (1) .

Недостатком данного способа является трудность получения сорбентов с воспроизводимыми свойствами вслед-:ствие различных механизмов связывания иммобилизированных компонентов.

Наиболее близким к предлагаемому но технической сущности и достигаемо" му результату является способ получения биоспециджчных дюсфолипид-содержащих сорбвнтов на основе гелей агарозы, включающий конденсацию карбоксипроиэводных дюсдюлипидов с аминоалкилсеАарозой в присутствии водо" растворимого карбодиимида в растворе полярного органического растворителя Я, Согласно данному способу реакцию конденсации проводят в интервале р11

5,5-6,5, используя в качестве растворителя 40-50Х-ные раствори тетрагид" рофурана, перемешивая в течение 2448 ч. АН-сефарозу с карбоксифосдюлипидами в присутствии аминоалкильных производных карбодиимида.

Недостатком данного способа является низкая эдфективность реакции конденсации Аосдюлипидов на сорбенте и, как следствие этого, их невысокое содержание на геле АН-сефарозы {1,2"

2,5 мкмоль на 1 мп геля).

11ель .изобретения - улучшение адсорбционных характеристик путем повышения содержания иммобилизованных фосйолипидов на сорбенте, Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения биоспециАических дюсАопипидсодержащих сорбентов на основе гелей агарозы, включающему конденсацию карбоксипроизвод ях Аосфолипидов с аминоалкилгефарозы) перемешивают в течение 2448 ч при комнатной температуре с раствором карбоксипроизводных Aochozmпидов, таких как 1-ацил-2-азелаил"Яп-глицеро-3-4осдюхалии или 2-ациламино-3-окси-3-кар бокси-0- эритр опро" паноло- l-дюсюохолин, в диметилсуль4оксиде (503-ний водный раствор) в присутствии водорастворимах карбодиимидов, поддерживая в первые часы реакции рН в пределах 5 ° 5-6 5. Соот« ношение реагентов подбирают иэ расчета содержания в конечном продукте

5-14 мк моль Жос4юлипидов иа 1 мл геля. Чатем полученный адсорбент про2 мывают тетрагидрод ураном, метанолом, физраствором и в заключение водой.

В конечном итоге получают сорбент на основе геля агароэы с высоким содержанием (5-14 мк моль на 1 мп) иммобилизованного лиганда, ковалентно связанного с основой.

Л р и м е р i .3 г АН-сейарозы

4 В выдерживают в течение 30 мин в

0,5 И растворе ИаС.I> промывают на стеклянном фильтре тем же раствором

МаС.1 и водой до отсутствия реакции иа Сl . Отмытый гель (10 мл) переме.шивают 24-48 ч 1при комнатной темпераIóðå с 400.мкмоль 1-ацил-2-азелаил40

-Sn-глицеро-3-дюсдюхолин в 20 мп смеси диметилсульдюксид: вода (1: 1) в присутствии 2 ммоль гидрохлорида

1 "этил-3- (3-днметиламинопропил} карбодиимида, поддерживая в первые ча45 сы реакции рй в пределах 5-5-6 5.

Э 3 . °

Полученный адсорбент промывают 100 мл тетрагидроАурана, 100 мп метанола, 200 мл l И раствора МаС1 и водой. Со- держание АосАатиднлхолина, ковалентно связанного с гелем, определяют по r þñÀîðó, Получено 9,5 ип геля с содержанием 12-14 мкмоль дюсМтиднлхолииа на 1 мп.

Пример 2. 1,56 r АН"се4арозы 46 выдерживают в течение 30 мин в 0,5 М растворе МаС1, промывают на стеклянном 4ильтре тем же раствором

НаС1 н водой до отсутствия реакции

С1, Отмытый гель перемешивают 241057095

48 ч при комнатной температуре с

250 мкмоль 2-ациламино-3-окси-3-карбоксил-0-эритро-пропаноло-1-АосАохо- лин и 1 ммоль гидрохлорида 1-этил3-(3-диметиламинопропил)карбоднимида

s 10 мп смеси диметилсульдюксид: вода (1:l). В первые часы реакции понижение рй компенсируют добавлением 2N раствора Май до рН 6,0-6,5.

Полученный сорбент промывают 50-мл 1р тетрагидрофурана, 50 мл метанола, 100 мп 1 М раствора ИаС1 и водой.

Содержание сйннгомиелина, ковалентно связанного с гелем, определяют по содержанию АосАора. Получено 4,5 мп сорбента с содержанием 5 мкмоль сдингомиелина íà I мп.

Технико-экономическая эффективность предлагаемого способа заключается в том, что содержание иммобилизованных дюсАолипидных лигандов на сорбентах, полученных по нему, возрастает в 5-6 раз по сравнению с содержанием лигандов на сорбентах, полученных известным способом. Это увеличивает адсорбцию емкость гелей, повышает их селективность и уменьвает неспецидичную адсорбцию примесных белков. Кроме того, протекание амидной конденсации в водном диметилсульАоксиде с высоким выходом обеспечивает более 9ффектнвное испольэоважте исходных карбоксипроизводных юос4илипидов.

Составитель P. Пензии

Редактор А, Мотипь Те еН ИДртудев Корректор Г Реюетник

Заказ 9436/9 Тираж 537 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35, Раупская наб. д. 4(5

Филиал ПЛП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4