Способ получения @ -лизина
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ oL-ЛИЗИНА путем глубинного культивирования продуцирующих его микрооргани/Лов на питательной среде, содержащей мелассу в качестве источника углерода , источник азота, необходимые минеральные соли и стимулятор биосинтеза лизина, в условиях аэрации среды с последующим выделением целевого продукта, отличающийс я тем, что, с целью повышения выхода , в качестве стимулятора биосинтеза сС-лизина используют 1 5%-ный водный экстракт морских водорослей рода FUCUS .vesiculosus в количестве 0,02-0,8 г/л (Ьреды.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПИ ЛИК
09) (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21 ) 3442201/28-13 (22) 19.05.82 (46) 30.03.84. Бюл. М 12 (72) P.М.Анатолян, К.A.Калунянц, Т.Ф.Киселева, Л.A.Õeðñîíîâà, Э.Г.Симонянц и Э.М.Акопян
«(71) Всесоюзный научно-исследова-тельский биотехнический институт (53) 668.394 (088.8) (56) 1.Авторское свидетельство СССР
O 494040, кл. С 12 P 13/08, 1970.
2.Патент Японии Р 45-32233, кл. 32/2/ВО2, опублик. 1970.
З.Влияние экстрактов их зеленых водорослей S acuminaus на- развитие дрожжей С.lipolytica в газоконденсатосодержащих средах. — Узбекский биологический журнал, 1979, М 4, с. 12-14.
4.Дагис И.К.Карапюте И.К. Стимуляторы роста в водорослях Балтийского побережья. - Сб. "Физиологически активные вещества и их применение в растениеводстве". Вильнюс, институт Ботаники AH Лит ССР, 1965, с. 83-89.
5.Авторское свидетельство СССР.
В 661013, кл. С 12, Р 13/08, 1976.
3 5П С 12 Р 13/08// С 12 Я 1/38;
С 12 R 1/13 С 12 R 1/15 (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ о(.-ЛИЗИНА путем глубинного культивирования продуцирующих его микрооргани.Ъов на питательной среде, содержащей мелассу в качестве источника углерода, источник азота, необходимые минеральные соли и стимулятор биосинтеза лизина, в условиях аэрации среды с последующим выделением целевогопродукта, о тли ч ающи йс я тем, что, с целью повыаения выхода, в качестве стимулятора биосинтеэа eL-лизина используют 1
5%-ный водный экстракт морских водорослей рода Fucus,vesiculosus в количестве 0,02-0,8 г/л среды.
С2
1082815 азота,необходимые минеральные соли и стимулятор биосинтеза лизина,в усло65
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения (, -лизина ферментацией.
Известен способ получения,4-лизина путем глубинного культивирования 5 продуцирующих его микроорганизмов в питательной среде, содержащей минеральные соли, с введением в нее порционно или непрерывно источников углерода, необходимых для роста аминокислот, и стимуляторов роста с последующим выделением (. -лизина иэ культуральной жидкости одним из известных способов. В качестве стимуляторов роста используют кукурузный экстракт, клеточный сок картофеля, дрожжевой гидролизат или дрожжевой экстракт. Ферментацию ведут при 3032 С, рН 7,0-7,2, непрерывной аэрации и перемешивании (1 ), Известно использование экстрактов различных водорослей в качестве стимуляторов роста микроорганизмов, таких как хлорелла (2), зеленых водорослей S.acuminatus ГЗ 1, а также экстрактов морских водорослей рода
Fucus veciculosus $43
Однако указанные выше экстракты водорослей, в частности водные или спиртовые экстракты морских водорослей рода F.vesiculosus,èñïoëüçóþòñÿ
30 в качестве стимуляторов роста биомассы, т.е. их использование при выращивании дрожжей, грибов Aspergillus niger R p o . Lemna minor папраалено на повышение урожайности биомассы.
Наиболее близок к предлагаемому способ получения L -лизина путем глубинного культивирования его продуцентов на питательной среде, со- 40 держащей мелассу, в качестве источника углерода, кукрузный экстракт или ферментативный гидролизат дрожжевых клеток в качестве стимулятора биосинтеза и источника азота и мине- 45 ральные соли, при аэрации среды с чоследующим выделением L -лизина известным методом (5)
Недостатком способа является то, что он не обеспечивает достаточно высокого выхода L-лизина (33,4
39„0 г/л), а также предусматривает использование дорогих и дефицитных компонентов - источника азота, кановым является кукурузный экстракт.
Цель изобретения - повышение выхода L -лизи на.
Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения
-лизина, предусматривающему глубинное культивирование продуцирую- 60 щих его микроорганизмов на питательной среде, содержащей мелассу в качестве источника углерода, источник риях аэрации среды с последующим выделением целевого продукта,в качестве стимулятора биосинтеза L -лизина используют 1-5%-ный водный экстракт морских водорослей рода Fucus vesicu-.
losus a количЕстве 0,2-0,8 г/л среды, Экстракт готовят путем настаивания сухих водорослей в течение 2-4ч при 25-30. С, после чего центрифугируют, стерилизуют и вводят через 1016 ч после внесения в питательную среду посевного материала.
Культивирование продуцентов L -лизина Corynebacterium glutamicum T-3 или штамм "ВНИИгенетика" 4995, или
Brevibacterium Bp. 22 .,,или 22 4 Д проводят на питательной среде следующего состава, вес.В:
Меласса 16-21 (сахар
48%) Кислотный гидролизат БВК 3,5-4,1
Кукурузный экстракт
1-5%-ный водный экстракт морских водорослей 0.,002-0,008
ИН С1 1,5 - 2,5
Мел 1,5 - 2,5
Вода водопроводная рН среды составляет 7,4. Остальное
Пример 1. Для получения лизина используют культуру рода
Cor,glutamicum Т-З, которую выращивают на питательной среде следующего состава, вес.Ъ:
Меласса
1,0-2,0
Водный экстракт готовят из сухих морских водорослей рода Fucus
vesiculosuslIyTeM настаивания в .течение 2 ч при 25 С. По окончании экстракции суспензию центрифугируют при 6000 об/мин, стерилиэуют в течение 0,5 ч при 1,0 ати и полученный фугат используют в качестве стимулятора при биосинтезе L -лизина.
Ферментацию проводят в колбах
Эрпенмейера емкостью 250 мл в лабораторных условиях на качалке (240 об/мин). Процесс протекает при
30 + 1 С и рН 7,4. Объем ферментационной среды 10 мл.
16 (сахар
48%)
Кислотный гидролизат БВК 3,5
Кукурузный экстракт
ИН С1
Мел 1 5
Вода водопроводная Остальное рН среды составляет 7,4.
Через 10 ч после внесения посевного материала, выращенного в пробирках на скошенной агариэованной среде MIIA, добавляют стерильный
1Ъ-ный фугат водного экстракта морских водорослей рода Fuсus,vesiсиlosus из расчета 0,2 г/л (0,002 вес.%)
1082815
Составитель М.Ларина
Редактор Л.Пчелинская Техред H. Метелева Корректор Г.Решетник
Тираж 522 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Заказ 1677/24
Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Проектная,4
При этом на выходе (, -лизина (определяется методом бумажного электрофореза): в культуральной жидкости составляет 30 г/л.
Пример 2. Режим культивирования продуцента (. -лизина Cor. glu- 5
tamicum "ВНИИгенетика" 4995 аналогичен примеру 1.
Используют питательную среду следующего состава, вес.%:
Меласса 19 (сахар 48%) 1Я
Кислотный гидролизат БВК 3,8
Кукурузный экстракт 1,5
НН4 С1 2,0
Мел 2,0 15
Вода водопроводная Остальное рН. среды составляет 7,4.
Через 13 ч после внесения посевного материала добавляют в питательную среду стерильный фугат 3%-ного водного экстракта морских водорослей рода Fucus vesiculosus в количестве 0,5 г/л. Время настаивания сухих водорослей 3 ч.при 30 С. Через 72 ч ферментации выход L -лизина в культивированной жидкости составляет 45 r/л.
Пример 3. Режим культивиро-.. вания продуцента Ь -лизина Brevi- ЗО
bacterium $р. 2 L аналогичен примерам 1 и 2.
Используют питательную среду следующего состава, вес..%:
Меласса 21 (сахар
48%) Кислотный гидролиэат БВК
4,1
Кукурузный экстракт 1,5
БН4 С1 2,5
Мел 2,5
Вода водопроводная Остальное рН среды составляет 7,4.
Через 16 частов после внесения посевного материала добавляют в питательную среду стерильный фугат
5%-ного водного экстракта морских водорослей рода Fucus vesiculosus в количестве 0 8 г/л. Время настаиваt
0 ния сухих водорослей 4 ч при 35 С.
Выход L -лизина в культуральной жидкости через 72 ч ферментации составляет 39,1 r/ë.
Пример 4. Режим культивирования продуцента L -лизина В.Sp 22LD аналогичен примеру 3. Через 72 ч ферментации активность лизина составляет 42,8 г/л.
Таким образом, предлагаемый спо соб позволяет увеличить выход лизина с 30 до 45 г/л по сравнению с известным (33,4 - 39,6 г/л).
