Способ подготовки жидкой питательной среды для выращивания микроорганизмов

 

1. СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНрЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫРА- ЩИВАНИЯ .МИКРООРГАНИЗМОВ, предус- ;матривающий растворение ингредиентов , необходимых для роста микроорганизмов , в воде с последующим выращиванием их в условиях аэрации, о тли чающийся тем, что, с целью повышения выхода биомассы, перед выращиванием питательную среду обрабатывают озоно-воздушной смесью до достижения концентрации озона 400 -2,6-10 мае.% от объема среды. 2. Способ поп., отличающийся тем, что перед растворением ингредиентов, нeoбxoди alIx для рОста микроорганизмов, воду обрабатывают озоно-воздушной смесью при содержании в ней озона 1 10-2,410 «асЛ (Л от объема воды. с

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) А

3(5ц С 12 Н I/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ю с

° °

° °

° еФ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (2 1.) 3480979/28- 13. (25) 3493459/28-13, 3486089/28-13 (22) 09.08 ° 82 (46} 15.05.84. Бюл. М 18 (72) В.А.Варганов, Г.П. Пинчук, В.ПаХраповицкий и Л.И.Колупаева (71) Белорусский государственный университет им.В.И.Ленина (53) 663.18(088.8) .(56) 1. Микробиология с.техникой микробиологических исследований. Под ред.

Лабанской А.С. М., 1978.

2. Практикум по микробиологии.

"Под ред. Егорова Н.С. Изд-во МГУ,. 1976, с.120. (54)(57) I. СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ЖИДКОЙ

ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ К4КРООРГАНИЗМОВ, предус- „-матривающий, . растворение ингредиентов, необходимых для роста мик-, роорганизмов, в воде с последующим выращиванием их в условиях аэрации, о. т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода биомассы, перед выращиванием питательную среду обрабатывают озоно-воздушной смесью до достижения концентрации озона

4 10 †2,6 10 мас.Ж от обьема среды.

2. Способ по п.l, о т л и ч а ю— шийся тем, что перед растворением ингредиентов, необходимых для рОс,та микроорганизмов, воду обрабатывают озоно-воздушной смесью при содер- Е жанна в нен озона 1 1О -2,4" 1б нао.х д1 от .обьема воды.

С.

1. 1092

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способам приготовления жидкой питательной среды для выращивания микроорганизмов. 5

Известен способ приготовления жидкой питательной среды, предусматривающий отвар разнообразных животных тканей 11) . Однако данный способ не обеспечи- 1О вает высокую скорость роста микроорганизмов.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту является способ подготовки жидкой питательной среды для выращивания микроорганизмов, предусматривающий растворение ингредиентов, необходимых для роста микроорганизмов в воде с последующим вы- 2II ращиванием их в условиях аэрации.

Согласно известному способу углеводы, минеральные соли микроэлементы растворяют в воде (2) .

Недостатком способа является низ-. кйй выход биомассы,микроорганизмов

Цель изобретения — повышение выхода биомассы.

Поставленная цель достигается тем что согласно способу подготовки жидкой питательной среды для выращивания микроорганизмов, предусматривающему растворение ингредиентов, необходимых для роста микроорганизмов, в

35 в условиях аэрации, перед выращиванием питательную среду обрабатывают озоно-воздушной смесью до достижения концентрации озона 4 10

2,6 10 мас.7. от объема среды.

При этом перед растворением ингредиентов, необходимых для роста микроорганизмов, воду обрабатывают, озоно-воздушной смесью при содержа-6 . -4 нии в ней озона 1 10 — 2,4- 10 мас.Е от объема воды.

Сущность способа заключается в следующем.

Жидкая питательная среда после приготовления и стерилизации подвергается однократной озоно-воздушной обработке при концентрациях озона в ней 6 10 6 — 2,6 » 10" мас.7. от объема среды, после чего производится засев микроорганизмов и осуществ.ляется их культивирование.

При обработке озоно-воздушной смесью воды, если процесс выращива174 2 ния микробов идет в нестерильных условиях, не требуется предварительной стерилизации воды и ингредиентов, если же процесс стерилен, то перед обработкой вода и ингредиенты стерилизуются отдельно, а затем стерильно смешиваются.

B табл.1 показано влияние концентрации озона на выход бактерий.

В табл. 2 показано влияние обработки озоно-воздушной смесью воды. на выход биомассы.

Hp и м е р 1. Бульон Хоттингера наливают в качалочную колбу объемом 50 мл и помещают для стерилизации в автоклав. После стерилиза-. ции питательную среду однократно обрабатывают путем барботажа озоновоздушной смесью Через слой среды проходит б. 10 .мас.7. озона от ее

Ю объема.

Бульон Хоттингера после озоновоздушной обработки засевают культурой бактерий Pseudomonas seryngae культивирование проводят на качалке

320 об/мин при 30 C и рН 7,2. Через

2 ч число клеток в мл составляет 232, через 4 ч роста — 901.

Пример 2. 100 мл жидкой пи-. тательной среды, содержащей, r:

WHACK 0,5; Nh

К НРО 0,3; КН РО 0,1; Е 50 17Н О

0,01; глюкозы 2,5; H<0 — 100 мл, помещают в качалочную колбу, до засева в нее микроорганизмов обрабатывают путем барботажа озоном в концентрации 4 10 мас.7 от объема среды. За-. тем в нее вносят суспензию бактерий

4»

Pseudomonas seryngae и культивируют их на качалке при 30 С и скорости

0 вращения каретки качалки 250-280 об/ мин. Бактерии культивируют 4 ч в логарифмической фазе роста. Изменение количества клеток определяют через каждые 2 ч путем высева на плотную питательную среду с последующим (сче.. том колоний. Через 2 ч роста число клеток в мл составляет 431, через

4 ч — 1683.

Пример 3. 100 мл водопроводной воды (стерильной, помещенной в колбу, однократна обрабатывают путем барботажа озоно-воздушной смесью, при этом суммарная концентрация озона в смеси составляет 1>10 мас.Ж от объема воды. После этого добавляют в стерильных условиях, Н1С1 О,1;

КН РО 0,2; NgSOy 7Н О 0,05; КОСI, 10921 74

0,2; СаСОг 0,4;" глюкозы 0,1. В приготовленную таким образом среду с рН

7,2 вносят 10 мг культуры Pseudomoпаз seryngae и культивируют при 30 С

4 ч на качалке. Изменение количества 5 бактерий в процессЕ роста определяют путем высева из сусупензии на плотную питательную среду с посЛедующим подсчетом колоний.

Число .клеток в мл увеличивается от 265 (контроль} до 317.

П р. и м е р 4 ° 100 мп дистиллированной воды, помещенной в колбу, однократно обрабатывают озоно-воздушной смесью при суммарной концентрации озона в ней 8"10 мас.X от

Таблица 1

Количество. клеток бактерий в 1 мл среды 10

Концентрация 0>9 мас.Ж от объема среды

Прирост, X OT контроля

22,-2

После 2 ч Прирост, После 4.ч роста X от роста контроля

Бульон Хоттигера

901

232

6,9

33,0

283

3090

979

40,0

1030

3.8, 7

301

52,4

43,3

7,9

3,8

233

3,0:1О

743 е 210

803

Минеральная среда

21.6

Контроль

1683

1290

431

471

22,9

29,.7

1796

43,6

19 0

2301

65,5

458

1682

21,0

10,6

1637

10,0

10,4

6,3

409

1580

397

1464

5 3

0,3

385

1389

Контроль (по прототипу)1

-6

16.10

18:10

2,5:10

1,0 l0

2,6-10

4 ° 10

6 10

i -10

294*10

5 10

1 "10

2,2 10 1 объема воды. Затем в колбу вносят

2 мп кукурузного экстракта, 10 мп

40Х.-ного раствора сахарозы и 10 мп пекарских дрожЖей. Культивирование

6 производят .при 28 С и рН 4,5 в течение 4 ч. Изменение количества клеток при росте в жидкой среде определяют путем высева суспензии клеток на плотную питательную среду с последующим счетом колоний. Число клеток в 1 мл возрастает с 118 до

129.

Предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет увеличить выход биомассы микроорганизмов на

90-95Х.

1092174

Таблица 2

Концентрация 0 в озоно воздушной смеси, мас.7. от объема

Но

Режим . приготовления среды

Прирост, / от контроля

Вид микроорганизмов.Количество клеток в мл. среды 1

Pseudomonas

seryngae

265

317

Стерильный

475

512

301

Пекарские дрожжи

118

Контроль

8 ° 10

Нестерильный

129

1,2 10

192

2 10

217

2,4 ° 10

136

П р и м е ч а н и е. Время культивирования 4 мин.

Составитель В. Голимбет

Редактор Л.Авраменко Техред М. Гергель Корректор С.Шекмар

Заказ 3207/16 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.„ д.4/5

Контроль

1:10.

5 -10

1.10

1,5" 10

Филиал ППН "Патент", r.Óæãoðoä, ул. Проектная,4