Способ диагностики хронического пиелонефрита

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПИЕЛОНЕФРИТА путем выявления возбудителя заболевания с помощью реагента на предметном стекле, о тличающийся тем, что, с целью повьнпения чувствительности и специфичности диагностики, в качестве реагента используют суспензию инактивированных стафилококков штамма Cowan I, а возбудитель выявляют по наличию их коагглютинации.

СОКИ СОВЕТСКИХ

4WNDhH РЕСПУБЛИК (19у ((Ц

4 (51) ГЮСУДЯРСТВЕНКЫЙ КОМИТЕТ СССР йб ДЕЛЯМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (2 t) 3614976/28-13 (22) 16.05.83 (46) 07.03.85. Бюл. В 9

{72) В.А.Нахаба (71) Кишиневский государственный медицинский институт

: (53) 616.6 (088.8)

:(56) 1. "New Engl. Т.Иео1." 1974, v. 290, р.588 {прототип). (54){57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПИЕЛОНЕФРИТА путем выявления возбудителя заболевания с помощью реагента на предметном стекле, о тл и ч а ю шийся тем, что, . с целью повышения чувствительности и специфичности диагностики, в качестве реагента используют суспензию инактивированных стафилококков штамма Cowan I, а возбудитель выявляют по наличию их коагглютинации.

1143411

Изобретение относится к медицине, преимущественно к способам лабораторной диагностики заболеваний.

Известен способ диагностики хронического пиелонефрита путем выявления возбудителя заболевания с помощью реагента на предметном стекле (1) .

Однако известный способ характе- ризуется недостаточной чувствительностью и специфичностью, а также сло-1О жен при выполнении.

Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности диагностики.

Указанная цель достигается тем, 15 что согласно способу диагностики хронического пиелонефрита путем выявления возбудителя заболевания с помощью реагента на предметном стекле в качестве реагента используют сус 20 пензию инактивированных стафилококков штамма Cowan I, а возбудителя выявляют по наличию их коагглютинаЦИИ.

Способ осуществляется следующим 25 образом.

Для получения 3-7Х-ной диагностической суспензии инактивированных стафилококков штамма Cowan I делают смыв микробов из 3-4 пробирок со ско-30 шейным агаром, промывают их на центрифуге при 3000 об/мин в течение

30 мин и ресуспендируют по объему осадка с последующим добавлением мер тиолята в концентрации 1:1000—

1: 10000.

3-8 мл свежей исследуемой мочи центрифугируют в течение 20-40 мин при скорости 1500 — 3000 об/мин. Микробный осадок отмывают 2-4 раза фиэ40 раствором и ресуспендируют отмытые микробы мочи в физрастворе до концентрации 3 — 15 ед. мутности.

На предметном стекле смешивают по капле обоих препаратов и учитыва ют агглютинацию, по наличию которой в течение 2-3 мин определяют характерные для хронического пиелонефрита фиксированные на бактериях антитела.

Пример. Инактивированную культуру стафилококков штамма Cowan Х получают путем смыва микробов из 4 пробирок со скошенным агаром, промывая их на центрифуге при

3000 об/мин в течение 30 мин и ресуспендирования по объему осадка, чтобы получить 57-ную суспенэию, к которой добавляют мертиолят до концентрации

1:10000.

Свежую мочу больных с бактериурией (100 тыс. и выше бактерий в 1 мл) в количестве 6 мл центрифугируют при

3000 об/мин 20 мин. Надосадок сливают, а микробный осадок двукратно промывают физраствором на центрифуге и ресуспендируют в физрастворе, чтобы получить суспензию с мутностью

5-10 ед. Каплю полученной суспензии микробов наносят на предметное стекло и затем добавляют каплю диагностического препарата стафилококков

Cowan I. Быстро наступающая агглютинация указывает на наличие антител, фиксированных на поверхности бактерий возбудителей пиелонефрита. Специфичность результатов устанавливается по отсутствию агглютинации кипяченой (в течение 2-3 мин для раз— рушения антител) суспензии микробов мочи. При бактериурии, происходящей из нижнего отдела мочевыделительной системы (воспаление мочеточников мочевого пузыря, уретры, простаты), выделяемые бактерии не покрыты антителами.

Предлагаемый метод изучен одновременно с методом иммунофлюоресценции при обследовании 68 больных хроническим пиелонефритом и 42 больных с заболеваниями мочевого пузыря и простаты. Методом коагглютинации выявили бактерии, покрытые антителами, у 64 из 68 больных хроническим пиелонефритом или в 94,1+4,03Х случаев, а методом иммунофлюоресценции положительные результаты получены только у 52 (76,5+6,547) больных.

Кроме того, последним методом получены положительные результаты у 14,3+6,40X. больных беэ хронического пиелонефрита.

Недостаточная чувствительность иммунофлюоресценции связана с разрушением бактериальных клеток в организме больного на мелкие фрагменты, слабосветящиеся и трудноотличимые от неспецифического фона в флюоресцентном препарате. Вместе с тем указанные микробные осколки, несущие на своей поверхности антитела, вполне могут взаимодействовать с белком А стафилококка и способствовать коагглютинации корпускул диагностикума.

Составитель П.Бонарцев

Редактор О.Черниченко ТехрецС.Легеза Корректор В.Бутяга

Заказ 795/5 Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытии

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Проектная, 4

3 1143411

Неспецифические результаты непря- мой иммунофлюоресценции у больных с уроинфекциями, локализованными в нижнем отделе мочевыделительной системы, связаны с тем, что флюоресцирующая антиглобулиновая сыворотка реагирует со всеми .иммуноглобулинамн человека, прикрепившимися к поверхности бактерий, не только по типу реакции антиген — антитело, но и 1р в результате неспецифической физикохимической адсорбции. Кроме того, в оболочке некоторых бактерий имеются белок А-подобные вещества, также .способные к неспецифическому связы в 1 ванию иммуноглобулинов в том числе и флюоресцирующих. Таким образом, при выявлении в люминесцентном микроскопе кокков даже с ободочным свечением нельзя быть уверенным в том, что на- 2О блюдаются антитела, покрывающие возбудителей пиелонефрита, а не неспеци4 фическую адсорбцию флюоресцирующих глобулинов этими бактериями. В то же время наличие белок А-содержащих стафилококков в исследуемой пробе мочи не оказывает влияния на специфичность способа коагглютинации, поскольку такие микробы могут лишь уча" ствовать в реакции вместе с аналогичными клетками диагностического препарата.

Предлагаемый способ более экономичен, т.е. 1 мл стафилококкового диагностикума оценивается в 0,03 коп, а 1 мл флюоресцирующей сыворотки к глобулинам человека — 3 руб. Кроме того, не требуется люминесцентного микроскопа (MJI-2 — 1200 руб. или

ЛЮМАМ-Р2 — 5000 руб), а также специалиста IIo люминесцентной микроскопии.

П здлагаемый способ более быстрый, т.е. время анализа 40 мин, а при vcпользовании иммуно пюоресценции 1 ч.