Способ определения количества инфузорий

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ИНФУЗОРИЙ путем их подсчета, 50 предусматривающий предварительное введение в анализируемую пробу субстрата реагента, отлич ающийс я тем, что, с целью повышения точности, перед подсчетом анализируемую пробу субстрата с реагентом перемешивают с последующим центрифугированием в течение 15-20 мин при 1-2 тыс. об/мин и отстаивают 30-60 мин, при этом в качестве реагента используют 4,0-0,6%-ный раствор хлористого натрия рН 7,1-7,3, а определение количества инфузорий осуществляют путем их автоматического подсчета в надосадочной жидкости . (Л а 30 20 1 ./ ff,2 ЯЗ ft 0,5 0,6 0.7 0,3 0,9 -t- w и J,Z %Naa 0UZ.1

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСИИХ

РЕСПУБЛИК () 9) (11) 75 А

4(51) С 12 M 3./00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСИОМЪ(СВИДЕ П=ЛЬСТ БУ ф 20

О.1 eZ О,З ОЯ e,S ge 07 О,В Og r,O ц У,2 /.ВСг

Фиг.1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3464892/28-13 (22) 08.07.82 (46) 23.06.85.Бюл. И 23 (72) В. Я. Шаблий, Ю. А. Колос и В. П, Сапейко (71) Украинский научно-исследовательский ветеринарный институт (53) 539.1(088.8) (56) 1. Шаблий В. Я., Игнатьев А. Д.

Использование инфузории Тетрахнмеиы пириформис как тест-объекта при биологических исследованиях в сельском хозяйстве. ВАСХНИЛ, M., 1978. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ KOJIHЧЕСТВА ИНФУЗОРИЙ путем их подсчета, предусматривающий предварительное введение в анализируемую пробу субстрата реагента, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью повышения точности, перед подсчетом анализируемую пробу субстрата с реагентом перемешивают с последующим центрифугироваиием в течение 15-20 мин при 1-2 тыс. об/мин и отстаивают

30-60 мин, при этом в качестве реагента используют 4,0-0 6Х-ный раствор хлористого натрия рН 7,1-7,3, а определение количества инфузорий осуществляют путем их автоматического подсчета в надосадочной жидкости.

75 2 ливать биологическую ценность продук= тов животноводства и кормов.

Использование счетчика микрочастиц Пикоскеля значительно сокращает время определения, но беэ предварительной подготовки пробы проведение способа и получение точных реэульта тов невозможно из-sa закупорки измерительного капилляра прибора.

Концентрация раствора хлористого натрия, время, скорость центрифугирования и другие параметры подобраны экспериментальным путем.

На фиг; 1 показан график зависи- .мости влияния концентрации хлористого натрия на активность инфузорий Тетрахимена пириформис; на фиг. 2 — график зависимости концентрации водородных ионов (рН) среды на активность инфузорий 1етрахимена пириформис, на фиг, 3 — влияние режимов центрифугирования на активность инфузорий

Тетрахимена пириформис.

Способ заключается в следующем:

1 мл питательной среды с выросшими инфузориями разводят 50 мл 0,40,6Х-ным раствором хлористого натрия (рН 7,1-7,3), тщательно смешивают и центрифугируют 15-20 мин при 12 тыс.об/мин. При этом механические частички, погибшие и частично живые инфузории осаждаются. Содержимое центрифужных пробирок отстаивают

30-60 мин, За это время живые инфу-. зории поднимаются в надосадочную жидкость. Далее осторожно берут

15-20 мл надосадочной жидкости, вносят в стаканчик и производят подсчет на счетчике микрочастиц Пикоскеля.

При этом способе инфузории не фиксируют.

Расчет полученного результата осуществляют по формуле

Н Ь Е

n = где n — количество инфузорий в 1 мл, L - коэффициент деления счетчика;

Š— результат счета на цифровом

:индикаторном табло;

Н - коэффициент разбавления;

Ч вЂ” измерительный объем приббра (для Пискокеля 0,378).

11628

Изобретение относится к биологии и может быть использовано при определении биологической ценности продуктов и кормов.

Известен способ определения количества инфузорий путем их подсчета, предусматривающий предварительное введение в анализируемую пробу субстрата реагента 11).

Недостатки этого способа — низкая 10 точность, длительность, трудоемкость.

Целью изобретения является повьппение точности.

Поставленная цель достигается тем,15 что согласно способу определения количества инфузорий путем их подсчета, предусматривающему предварительное введение в анализируемую пробу субстрата реагента, перед под- 20 счетом анализируемую пробу субстрата с реагентом перемешивают с последующим центрифугированием в течение 1520 мин при 1-2 тыс.об/мин и отстаивают 30-60 мин, при этом в качестве 25 реагента используют 0,4-0,6Х-ный раствор хлористого натрия рН 7,17,3, а определение количества инфузорий осуществляют путем их автоматического подсчета в надосадочной 30 жидкости

Предварительная подготовка пробы, предусматривающая разведение испытуемого субстрата 0,4-0,6X-ным раствором хлористого натрия рН 7,1-7,3 с последующим тщательным перемешиванием, Особенно важным в определении биологической ценности продуктов с использованием тест-объекта инфузорий является установление степени З5 влияния этого продукта на жизнедеятельность инфузорий. Наличис какихлибо нежелательных веществ в продукте или низкая усвояемость белков продукта сказывается на росте и развитии инфузорий, что проявляется в виде, замедления роста, снижения активности ее движения, вплоть до гибели инфузорий. Поэтому, определяя качество продукта, .прежде всего ориентируются на количество живых, активных инфузорий. Согласно суще. ствующему методу подсчета количества инфузорий в камере Фукс-Розенталя их фиксируют раствором формалина или другого вещества (т.е. их убивают) и все имеющиеся инфузории, не исключая ранее погибших, подсчитывают. о

При осуществлении предлагаемого 55 способа определяют количество только живых инфузорий, что, в свою очередь дает возможность более точно устанавобуславливает сохранение максимальной биологической активности инфузорий Тетрахимена пириформис. Кроме того, отделение испытуемых продуктов от выросших инфузорий путем центрифугирования в течение 15-20 мин при

1-2 тыс.об/мин с последующим отстаиванием 30-60 мин, отбором 15-20 мин надосадочной жидкости со всплывшими инфузориями для целлоскопического счета позволяет получить точный достоверный результат. Поскольку в определенных продуктах и кормах могут присутствовать те или иные токсические агенты становится очевидным, что погибшие в результате этого инфузории являются фоном, затрудняющим дать .достоверную оценку.

Поэтому, учитывая живые, активные инфузории и исключая погибшие, исследователь получает возможность дать наиболее объективное заключение по качеству испытуемого продукта в сравнении с контрольным продуктом или стандартом.

Пример. Необходимо выбрать наиболее рациональную технологиюизготовления корейки. Корейка Р 1 созревание при 2-4 С; корейка 11 2— созревание при 15-18 С; корейка

В 3 — созревание при 40-43 С; контроль — созревание при 0-3 С .

Этот вопрос решают путем определения биологической ценности на тест-объекте инфузории Тетрахимена пириформис.

Берут 4 навески 0,9; 0,6; 0,3 и

0,15 мг/мл, вносят в питательную среду, выращивают согласно известной методики и подсчитывают известным и предлагаемыми способами, В первом случае исполнитель заправляет камеру Фукса=Розенталя и под микроскопом считает инфузории в 10 квадратах. Всего необходимо подсчитать 4 пробы х 4 разведения =

l6 проб (160 квадратов).

Для получения достоверных.результатов необходимо опыт провести в

3 повторностях, lбх3=48 проб (480 квадратов). Для подсчета 48 проб необходимо 7-8 ч.

Согласно предлагаемому исследуемые пробы разводят раствором хлорис62875

4 того натрия, смешивают и центрифугируют (30-40 мин) отстаивают (3060 мин) . Подсчет на счетчике микрочастиц 48 проб 15-20 мин, Таким образом, один человек свободно может за день исследовать 90100 проб.

Непроизводительные затраты времени (переход от центрифуги до счетчи10 ка микрочастиц, заправка стаканчиков и т.д.) 20-30 мин.

Итого 90-150 мин.

Полученные результаты приведены в таблице.

Следовательно, наиболее рациональной является технология, по которой изготавливают корейку У 2.

Проведенные исследования по изучению активности инфузорий в зависи2О мости от концентрации хлористого натрия (фиг. 1) позволяют судить о том, что наиболее желательной является концентрация 0,4-0,67. Удовлетворительная активность сохраняется

25 до концентрации 0,9, а концентрация выше 1,27. является для инфузорий губительной.

Концентрация ионов водорода (РН) среды (фиг. 2) имеет пик активности

ЗО для инфузории в пределах 7,1-7,3.

Среда РН ниже 5 вызывает резкую атаксию инфузорий. Изменение рН среды в щелочную сторону является удовлетворительной до РН 8,0, после

З5 чего крайне снижается активность, появляются атипичные фоРмы инфузо-

PHH °

Появление атипичных форм также указывает на отрицате .ьное действие

40 запредельных параметров среды. Это обстоятельство учитывают при отработке различных параметров способа.

Центрифугирование взвеси инфузорий при 1-2 тыс.об/мин не оказывает

45 отрицательного воздействия на активность инфузорий (фиг. 3).

Таким образом, предлагаемый спосс. является более точным, достоверным, 50 быстрым и менее трудоемким по сравнению с известным камерным способом подсчета количества инфузорий, т.е. повышает эффективность методов токсико-биологической оценки, 55

1162875

Образец

Подсчет в камере

Фукс-Pозенталя одсчет счетчиком микрочастиц

КЭБ ОБЦ Количес тво . КЭБ ОБЦ инфуз орий в 1 мл

Количество инфузорий в lмн

Корейка У 1 3,9 10

Корейка S 2 4,3 10

Корейка РЗ 2,7 10

Контрольный 3 3 10

5Я 6.0 7,0 8,0 9,0 100

Фа 2 p8epeAI

4)

Е д 20 в

1904 118 4,0 10

2430 130 4,4.10

883 81 2,6 10

931 100 3 2 10

1952 125

2486 137

850 81

902 100

1162875

5 выс.о5)ти

2 3 фИ8.5

Заказ 4065/25 Тираж 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Составитель Н, Арцыбашева

Редактор В, Иванова Техред М.Надь Корректор И. Э. дейи