Способ получения спирамицина
№ 122846
Класс 30h, б
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
Заявитель
Общество химических заводов Рона-Пуленк (Франция)
Действительные изобретател1, :иностранцы Нинэ и Варье
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПИРАМИЦИНА заявлено 20 июня 1968 г, за № 602440 31 в Комитет ио делам изобретений и открытий прн Совете Министров СССР
Опубликовано в «Бюллетене изобретений>. ¹ 19 за 196 r.
Пример 1.
В эрленмейеровскую двухлитровую колбу вносят 260 игл следующей среды:
Кукурузный настой (50 о-ного сухого экстракта) 40 г
Глюкоза 20»
Хлористый натрий 5»
Сернокислый магний 1»
Водопроводная вода !000 м.г
Устанавливают рН 6,8 добавкой едкого натра и затем добавляют еще:
Углекислый кальций
Соевое масло о (4 лог
Эту среду стерилизуют 45 мин. при 120, После охлаждения ее засвают культурой штамма Streptomyces ambofaciens (ХКК? 2420 в галактике) . Затем культуру перемешивают на трясучке в течение 48 час.
Одновременно в эрленмейеровские колбы на 300 лг.г вводят по 5 мл следующей среды:
Известно, что антибиотик спирамицин состоит из трех компонентов
I, II, Ш, имеющих очень близкие свойства, и получается путем ферментации Streptomyces ambofaciens
Предлагается способ, позволяющий получать менее токсичные варианты спирамицина (II и III) путем подавления образования более токсичного варианта (спирамицина I). Это достигается тем, что в среду добавляют ацетилирующие или пропионалирующие радикалы № 122846
Кук рузный настой (50 "i>-ного сухого
Гл1окоза
Хлористы!1 натрий
Первичпь1й фосфорпокислый калий
Сернокислый магний
Водопроводная вода
35 г
50»
20»
2»
1000 л!.! экстракта) Относительная долл сперамицинов () а
Мгнсигагльиая
".:ê".Tèâf.îñTü.икг/>ил
Оодери1ание иропионагаида в среде, г/л
11 111!
1 151 i 26 1 23
285
0!
27 : 18 55
24 10 66
15 78
205
175
150
1 I
Пр имер 2.
В двухлитровую эрлспмсйсровскую колбу вводят 250 л1,г следующей среды;
Кукурузный настой (50"./о-ного сухого экстракта) 40 г
Крахмал 20»
Хлористый натрий 5»
Серпокислый магний 1»
Первис1ный фосфорнокис."Ibllf калий 2»
Водопроводная вода до объема 1000 л!л рН устанавливают на 6,8 добавкой едкого патра, после чего вводится:
Углекислый натрий 5 г
Эту среду стерплизуют в течение 45 мин. при 120 . После охлаждения засевают ее культурой штамма S. ambofacief1s и встряхивают на трясучке в течение 48 час. при 25".
Одновременно в эрленмсйеровские колбы на 300 ял вводят 40 ял следу1ощей среды:
1 укурузцый пастой (50 "о-ного сухого экстракта) 45 г
Глюкоза 5»
Углекислый кальций 25»
Водопроводная вода до общего объема 1000 ял
Устанавливают рН 7,0 добавкой едкого патра. рН CTHkfUP. lf llfllOT 1! Il 6,8 доб;1вкой Cg8010 IIBTpB, IIOC;lC чего добавляют:
Углекислый кальций 5 г
Затем вводят пропиопамид в количествах, указанных в нижеприведенной таблице, дающей результаты проведен ых опытов.
Зрленмсйеровские колбы стерилизуют 20 м,ш, при 120, охлажда1от и засевают 4 л!л культуры из двухлитровых колб, после чего встряхивают на трясучке lipll 25 . Лнализы проводят па 6-й, 7-й и 8-й дни с целью определения а1гпсл IB,.ll-. loll активности и относительных выходов трех спирамицинов.,i,n l 7 78 !6
После этого среду стерилизуют !3 течение 30 мин. Ирн 120 . Пос,10
UX.lB7l(eHH>l ка7кд IO 3p. ICI!.2leIIepOBC! 1 IO I(01бу засева!от 4 !.1 17ансе Оп!1санной заправочной культуры. Затем смесь встряхивают на трясу:1ке при 25 . Через 48 час. развитие грибка оказывается весьма удовлетворительным. После этого добавляют в каждую колбу 20 !1л стерильного н01ного раствора, содержащего 12 г/л чистого спирамицина 1 в виде осн.вания и 6 а/.1 пропионата натрия. Культуру встряхивают в теджен!!е
24 час., затем смешивают содержимое всех эрленмейеровских колб.
Хроматографический анализ бульонной культуры пок11зываст, !ГО она содержит 23 г/.г непреврашенного спирамици1 а 1 н 1Л B.. с.»ес ., состоящей из 20, спирамицина II и 80" спирамицина Ill.
Пример 3.
В э17, 2ен1!е1!еровcõ|10 кол оы l!!l: 00 л 2 зl :Опят по 40 л.2 с,lс т i ю1!геli среды:
Х,! 017исты и B I>!ÎI! III!
Глlокоз B
Углекислый кальций
Водопроводная вода до общего объема з
Д »
20»
1000 .".л.
Пример 4.
Готовят культуру $. Bmbofaciens в условиях, описанных в примере 3. Раствор спираы!нина основания 1 содержит еще 6 г/л пропионата натрия. В этом случае хроматографнческий анализ обнаруживает пр»вращение 2,04 г/,г спирамицина 1 в смесь из 11",о спира !IIIIIIIIB II и 89 спирамицина III; 0,96 г/л исходного спирамицина остается без изменения.
Пример 5.
00 .И.2 c, !ед к>щ; и
В эрленмейеровск 2е колбы на 300 >пл вводится по среды:
Азотнокислый аммоний
Глюкоза
Углекислый кальций
Водопроводная вода до общего объема
l3
50»
>)
1000 2пл
Колбы стерилизуют 30 х!ип. при 120, охлаждают и засевают по = !2.1 культуры, получение которой описано в примере 2. После трехдневной и!1ку Оации при 25 IIpII встряхивании HB трясучlсе в кажд1 ю колб1 п171:,!ивают 5 л1.г водного раствора с содержанием 100 г/л чистого спирамицина
1 в виде основания, 38 г/л пропионовой кислоты и 10 г2л шестивоzIIO! 0 хлористого кобальта. рН этого раствора предварительно доводят до 6,5
С1ерилизуют, засевают и выращивают культуру грибка в условия;, описанных в примере 5. По истечении 48 час. дооавляют по 20.!2.2 водного стерильного раствора с содержанием 9 г/.2 чистого CBIIpa»!IIII!I!B l в виде основания и 21 г/л пропионамида.
После трехдневной инкубации путе п хроматографического анализа обнару7кива!от превращение 1,86 г/л спирм!Ицина 1 в смесь из 55". о спирамицина II и 45". спирамицина Ш. 1,14 г/л спирамицина 1 остается беB изменения.
М 122846 путе. 1 дооавкн дкой !Iles 10 IH. 11ос;1 . Т1 0 ; Н I3Yioi1 HHlc) оации а на,:1 lsHруют методом хроматографии на бумаге. Превращено 8,70 г/.г снирамнцина I; выход 9 ./ спирамицина II и 91% спирамицина III.
Пример 6.
В эрленмейеровскую колбу на 300 лл наливают среды:
Хлористый аммоний
Глюкоза
Углекислый кальций
Водопроводная вода до общего объема
50 м,г следующей
10 г
50»
25»
1000 .ил
Предмет изобретения
Способ получения спирамицина, осуществляемый путем ферменгации Streptomyces ambofaciens, отличающийся тем, что, в целях получения менее токсичных вариантов спирамицина (II и III), в среду добавляют ацетилирующие или пропионалирующие радикалы.
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Редактор А. К .Лейкина Гр, 1З9
Подп. к печ. 20.! г-60 г.
Тираж 700 Цена 50 коп.
Ипформацио ио-издательский отдел.
Объем 0,34 и. л. Зак, 1975
Типографии Комитета по делам изобретений и открыто!! при Совете Министров СССР
Моска, Петровка, 14.
Колбу стерилизуют, засевают н инкубируют в описанных выше условиях.
По истечении 72 час. культуру центрифугируют и жидкость декантируют. Осадок взвешивают вновь в 50 лг,г чистого буферного раствора, находящегося в эрленмейеровской колбе на 300 лгл. Буфер содержит
9,85 г/л ледяной уксусной кислоты и 4,9 г/л уксуснокислого натрия и имеет рН 4. Кроме того, в буфере содержится еще 6,45 г/л хлоргидрата спнрамицина 1 и 1 г/л шестиводного хлористого кобальта. Суспензию этого мицелия инкубируют 80 час. при 25 при встряхивании на трясучке и хроматографируют HB бумаге. В результате 2,40 г/л спирамицина 1 превращаются в смесь остальных спирамицинов (II и III) в относительных размерах 90: 10.
