Способ оценки активности эстеразы в лимфоцитах на цитологических мазках

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН t:;ò bw

I

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1Pg а У1.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPbITHA (21 ) 3646763/28-14 (22) 28.09,83 (46) 15.06,86. Бюл. 9 22 (71) Минский ордена Трудового Красного Знамени государственный медицинский институт (72) B.Â, Романов и А,И, Сыкало (53) 615.475(088.8) (56) Бирюзова В.И. и др. Электронномикроскопические методы исследования биологических объектов. М.: изд-во

Академии Наук СССР, 1963, 93.

Авторское свидетельство СССР

У 682229, кл. G 01 Н 33/)6, 1979. (54)(57) СПОСОБ OUEHKH АКТИВНОСТИ

ЭСТЕРАЗ11 В ЛИМФОЦИТАХ НА ЦИТОЛОГИЧЕС„Л0„„1237 44 А 1 (5D 4 С О1 И 1/30, А 61 В 1О/00

КИХ МАЗКАХ путем их фиксации, инкубации в среде с субстратом и учета активности фермента, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности способа фиксацию прово1 о дят в течение 8-10 мин при 20-22 С, при этом в качестве фиксатора используют пары параформа, а инкубацию в среде с субстратом проводят в течение 22-24 ч при 8-10 С и активность фермента оценивают по окрашенным зонам в цитоплаэме лимфоцитов с помощью диска, выполненного из прозрачного материала с расположенными по окружности метками переменной площади и формы, соответствующими возрастающей активности фермента, Та б Пмца цятов; в с прото терааояе! в мвяью елетэ

25

4 8 2

Т-е озт

9-е сут !

3-е еут

Ф5-е еут

24-е от

39Э с "?

6 8

5 t3 !

- 6

4 4

9 34

27

2 !О

2 !7

2 7

19

38 k9 ! 23 3!

1 )2

Изобретение относится к медицине, а именно к методам анализа биологических материалов, и может быть использовано для оценки состояния системы иммунитета у позвоночных по характеристикам активности ферментов лимфоцитов, Целью изобретения является повышение точности способа путем стандартизации и оптимизации всех этапов получения и обработки, мазка и применения морфометрии эон продукта реакции для объективизации классификации клеток, Способ осуществляют следующим об- разом.

Для получения достаточного числа лимфоцитов с равной степенью распластывания исследуют мазки концентрата. мононуклеаров, изготовленные с помощью специального устройства. Для.достижения оптимального распластывания клеток мазки быстро высушивают в струе воздуха, а с целью прочного прикрепления клеток досушивают при комнатной температуре в течение ч.

Для сохранения морфологии клеток, активности фермента и обеспечения воэможности хранения препаратов производят щадящую фиксацию мазков в о парах параформа при 20-22 С в течение 8-IO мин.

Для сохранения активности фермента, реакционной способности среды и более полного выявления активности фермента применяют инкубацию мазков

37944 2 при 8-IO С в течение 22-24 ч в инкубационной среде.

Активность фермента оценивают по окрашенным зонам в цитоплазме лимфоцитов с помощью диска, встроенного

/ в окуляр микроскопа, выполненного иэ прозрачного материала с расположенными по окружности .метками переменной площади и формы, соответствующими

I0 возрастающей активности фермента.

Объективизация выделения отдельных субпопуляций обеспечивается путем сравнительной оценки размеров гранул с эталонным рядом указанных меток,что

1 !

5 позволяет учесть площадь, занятую гранулами, Число гранул и их размеры являются тем объективным критерием, который наряду с топографией продукта реакции используют для выделе20 ния субпопуляций лимфоцитов крови.

Пример, В табл, и 2 представлены результаты по динамике субпопуляционной структуры лимфоцитов крови у.больного P.Ë.Â, с острым гематогенным остеомиелитом в процессе заболевания. Сравнение данных, полученных в соответствии с известным способом (выделение 2 субпопуляций)

30.è при использовании предлагаемого способа (выделение 7 субпопуляций), демонстрирует достоверную динамику, четко коррелирующую с клиническим состоянием, при анализе отдельных субпопуляций (У 1,3 и 5, 7) в рам35 ках предлагаемого способа. тов, выделенные в соответствия асаеммч способом, 2

1237944

Т а б л н ц е 2

C роя вабо". леванне убпопуляции лимфопмтол, яыделенные в соответствии т преплягаеммм способом (абсолютные аначення, ° 10 s литре) ) Эстерааополоеи- Зстерааонегательные влети» тиеиые плетни

У.е сут

095 063 010 020 005 010

0,23

0,42

2,18

9-е сут

O 1О 0 70 1,12 0!6 0 20 Og05 0 26

011 053 069 O II 0>27 002 038

1,57

0,53

2 16

0,20 Оi55 I 35

0,30

003 0 15 005 О 18

0О6 006 003 0 I3

i 43

0,03 0,40 0 88

Oi19

3,0

0,08 0,67 0,75 0,36

l 35 0>55 0 ° 20

1,0

Через 8 мес

itocJ1o вяя" доровлеиня

0,68 0,34 0,02 0,02 0,41 Оу05 0,27

I,l7

0,63

Составитель М. Позняк Редактор Н. Швыдкая Техред B.Êàäàð Корректор Г. Реиетник

Заказ 3281/43 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-.35, Раушская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4

13-е сут

15""е сут

24-е eye

39-е сут

Субпопупяцнн лнмФоцитов, выделенные я соответствии с протоа Ф типом (абсолютные енепеиия,. 1О

\ в литре)