Способ получения лейкоцитарного альфа @ -гликопротеида

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (sg 4 С 07 К 15/14

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ASTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

AO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3822044/28-14 (22) 11.12.84 (46) 30.07.86. Бюл. И 28 (71) Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов (72) О.П.Шевченко, А.А. Дмитриев и Д.Д.Петрунин (53) 612.015(088.8) (56) Петрунин Д.Д., Лопухин Ю.М.»

Шевченко О.П. Бюлл. Зкспер. биол.

1983» М 7» с, 72-74.,(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕИКОЦИТАРНОГО АЛЬФА -ГЛИКОПРОТЕИДА путем

„,80„„124737 А 1 замораживания-оттаивания лейкоцитов, центрифугирования . и последующей очистки, отличающийся тем, что, с целью повышения чистоты и выхода, надосадочную жидкость обрабатывают каолином, отмывку сорбента проводят водой и насыщенным раствором двузамещенного гидрофосфата натрия, продукт элюируют 8-12Х-ным карбонатом натрия, диализуют, обрабатывают катионитным сильноосновным сефадексом средней зернистости и целевой продукт из надосадочной жидкости осаждают сернокислым аммонием 55-603-ного насыщения..

1247379

Изобретение относится к медицине, а именно препаративной и технологической биохимии, и касается получения биологически активного белкового продукта, используемого как в иммунохимии, так и в практической медицине.

Цель изобретения — повышение выхода и чистоты целевого продукта путем адсорбции на каолине при определенных условиях, обработки катионитным сильноосновным сефадексом средней зернистости и осаждения сернокислым аммонием при определенном насыщении..

Способ осуществляют .следующим образом.

Гной, полученный при вскрытии .флегмы, подвергают троекратному замораживанию-оттаиванию, центрифугируют, осадок удаляют, надосадочную жидкость инкубируют с влажным каолином при перемешивании, каолин отмывают водой, насыщенным раствором двузамещенного карбоната натрия, продукт элюируют 8-12Х-ным карбонатом натрия, надосадочную жидкость диализуют, смешивают с влажным SPсефадексом С-50, инкубируют при пе.ремешивании, отмывают дистиллированной водой и элюируют 2 М раствором хлористого натрия, к надосадочной жидкости добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония до 5560Х-ного насыщения, осадок растворяют в дистиллированной воде, диализуют и лиофилизируют.

Пример 1. 500 мп гноя, полученного при вскрьтгии флегмон, подвергают троекратному замораживаниюоттаиванию, центрифугируют ЗО мин при 8000 g осадок удаляют, а надосадочную жидкость инкубируют с 500 мл влажного каолина в течение 20 мин на магнитной мешалке. Каолин с сорбированными на нем белками трижды отмывают дистиллированной водой в количестве 1,0 л, всякий раэ удаляя воду при помощи центрифугирования, з :.тем каолин отмывают 1,0 л насыщенного раствора двузамещенного гидрофосфата натрия, центрифугируют в течение 20 мин при 8000 g. Надосадочную жидкость удаляют, а каолин инкубируют с 500 мл 8Х-ного раствора карбоната натрия в течение 20 мин, центрифугируют, надосадочную жидкость диализуют против дистиллированной

5 !

О

55 воды, полученную после диализа фрак" цию смешивают с 250 мл влажного SPсефадекса С-50, инкубируют в течение

20 мин на магнитной мешалке, надосадок удаляют центрифугированием, а сефадекс с сорбированными белками отмывают троекратно 1 0 л дистиллированной воды, всякий раэ удаляя надосадок при помощи центрифугирования.

К отмытому сефадексу добавляют 250 мл

2 M раствора хлористого натрия, инку бируют в течение 20 мин, центрифугируют при 8000 g осадок удаляют. K надосадочной жидкости добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония так, чтобы его концентрация составила 55 .-нбго насьицения, инкубируют о

24 ч при 4 С, центрифугируют в течение 30 мин при 8000 g, надосадочную жидкость удаляют, а осадок растворяют в 150 мл дистиллированной воды, диалиэуют против дистиллированной воды,лиофилизируют.В результатеполучают препарат лейкоцитарного альфагликопротеида с чистотой 70Х выход продукта. составляет 25Х.

Пример 2. 500 мл гноя подвергают замораживанию-оттаиванию,обрабатывают каолином, каолин отмывают дистиллированной водой и двузамещенным гидрофосфатом натрия, как описано в примере 1. Отмытый каолин инку-. бируют с 500 мл 12 -ного раствора карбоната натрия в течение 20 мин, центрифугируют, надосадочную жидкость диализуют против дистиллированной воды. Полученную после диалиэа фракцию смешивают с 250 мл влажного SPсефадекса С-50, инкубируют в течение

20 мин на магнитной мешалке, надосадок удаляют центрифугированием, а сефадекс с сорбированными белками отмывают троекратно 1 0 л дистиллированной воды, всякий раз удаляя надосадок при помощи центрифугирования.

К отмытому сефадексу добавляют

250 мп 2 М раствора хлористого натрия„ инкубируют в течение .20 мин, центрифугируют при 8000 g, осадок удаляют. К надосадочной жидкости добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония так, чтобы его концентрация составила 60 -ного насыщения. Дальнейшую обработку осуществляют, как описано в примере 1. В результате получают препарат лейкоцитарного альфа -гликопротеида с чис l тотой 75Х, выход продукта составляет 20%.

1247379 4 рат лейкоцитарного альфа -гликопротеида с чистотой 70, выход продукта составляет 20Х.

Составитель С.Мельникова . Техред И.Попович Корректор М.Самборская

Редактор Н.Киштулинец

Заказ 4077/24

Тираж 343 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

П р имер 3. 500мл гноя подвергают замораживанию-оттаиванию, обрабатывают каолином, каолин отмы вают дистиллированной водой и двузамещенным гидрофосфатом натрия, как описано в примере 1. Отмытый каолин инкубируют с 500 мп 10Х-ного раствора карбоната натрия в течение 20 мин, центрифугируют, надосадочную жидкость диализуют против дистиллированной воды. Дальнейшие манипуляции осуществляют, как описано в примере 1. В результате получают препаВ сравнении со способом-прототипом, который является единственным способом выделения лейкоцитарного альфа -гликопротеида, предлагаемый способ позволяет повысить выход про10 дукта (в 2-3 раза), а также чистоту продукта (по способу-прототипу выход не превышает 10Х, а чистота не превышает 15-20X).