Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus, используемый для получения моноклональных антител к группоспецифическому антигену b эритроцитов человека
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для определения группы крови человека. Целью изобретения является получение штамма гибридных культивируемых клеток мыши Mys musculus, продуцирующего моноклональные антитела к группоспецифическому антигену В эритроцитов человека. Штамм получают гибридизацией клеток селезенки мышей Balb/c, иммунизированных эритроцитами человека группы В (III), с клетками миеломы РЗ-Х63-Ag 8.653. Продуктивные клоны обозначаютD2. Штамм D2 хранится в коллекции перевиваемых клеточных линий ЦНИИгематологии и переливаниякрови под номером В-1/85. Клетки штамма растут в виде стационарной суспензии на среде RPMI-1640 или ДМЕМ с 20% эмбриональной телячьей сыворотки, имеют модальное число хромосом 85, две метацентрические хромосомы и одну акроцентрическую. Титр моноклональных антител в культуральной жидкости составляет 1 : 128 - 1: 1024, в асцитической 1 : 512000. Антитела выявляют антиген В в эритроцитах групп крови В (III) и АВ IY). Авидность антител в культуральной жидкости составляет 6 - 10 с. 1 табл.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для определения группы крови человека системы АВО. Целью изобретения является получение штамма гибридных культивируемых клеток мыши Mus musculus, продуцирующих моноклональные антитела к группоспецифическому антигену В эритроцитов человека, обладающего большей продуктивностью по сравнению с известным. Штамм получают следующим образом. Клетки селезенки мышей Balb/с, иммунизированных эритроцитами человека группы В (III), гибридизуют с клетками миеломы Р3-Х63-Ag 8,653 с помощью полиэтиленгликоля (мол.м. 1500). Эффективность слияния составляет 78%. Клонирование осуществляют методом лимитирующих разведений, эффективность клонирования составляет 60%. В массовую культуру штамм выводят после двух клонирований дающих 100% положительных клонов и обозначают D2. Штамм D2 хранится в коллекции перевиваемых гибридных клеточных линий ЦНИИГПК под номером В-1/85 и характеризуется следующими признаками. Морфологические признаки. Культура состоит из слабо прикрепляющихся к субстрату клеток с обычной для гибридных антителопродуцирующих клеток морфологией. Кариологические признаки. Кариотип соответствует Mus musculus. Модальное число хромосом 85 с интервалом варьирования 81-92. С помощью С-окрашивания выявляются две метацентрические хромосомы и одна большая акроцентрическая. Культуральные признаки. Среда для культивирования RPMI-1640 или ДМЕМ с 20% эмбриональной телячьей сыворотки, 4 мМ L-глютамина, 1% пирувата натрия, 1-2% Неpes-буфера, 5
10-5 2-меркаптоэтанола, 50 ед/мл пенициллина и 25 мкг/мл стрептомицина. Характер роста - стационарная суспензия. Метод снятия - встряхивание или снятие резиновым "полисменом". Частота пассирования - через 2-3 cут. Кратность рассева 1:3-1:4. При введении мышам Balb/c, предварительно обработанных пристаном, 2-5106 клеток асцит образуется через 9-18 дней. Стабильная продукция антител наблюдается в течение 5 пассажей на мышах, титр антител в асцитной жидкости составляет 1:512000, в культуральной 1:128-1:1024. Характеристика моноклональных антител. Моноклональные антитела (МА), продуцируемые штаммом D2, выявляют антиген В в эритроцитах как группы В (III), так и АВ (IV). Авидность антител в культуральной жидкости составляет 6-10 c. Консервация клеток. Клетки штамма D2 замораживают после 2-го и 3-го клонирования на 10, 12 и 35 пассажах в культуре и после роста в виде асцитной опухоли в мышах. Криозащитная среда: 50% ростовой среды, 40% эмбриональной телячьей сыворотки и 10% диметилсульфоксида. Режим замораживания: клетки в криозащитной среде помещают на сутки в холодильник при -70oC в пенопластовом контейнере, после чего переносят в жидкий азот. Выживаемость клеток при размораживании составляет 70-85%. Сведения о контаминантах линии. Бактерии, грибы, дрожжи и микоплазма не обнаружены. Использование штамма D2 иллюстрируется следующим примером. Образцы индуцированной клетками штамма D2 культуральной и асцитной жидкостей мышей исследуют по общепринятым методам со стандартными эритроцитами в солевой среде в 96-луночных платах (титр антител) и в реакции агглютинации на плоскости (авидность антител). Под авидностью антител подразумевается средство излучаемых антител к стандартным эритроцитам человека, оцениваемое по времени появления первых агглютинатов (первый параметр), времени наступления четкой реакции агглютинации (второй параметр) и времени появления крупных агглютинатов (третий параметр). Результаты исследования активности и авидности моноклональных антител приведены в таблице. Результаты, приведенные в таблице, свидетельствуют о высокой специфичности и авидности моноклональных антител, продуцируемых штаммом D2. Моноклональные антитела, получаемые при использовании известного штамма, реагируют в специфических реакциях в меньших титрах.
Формула изобретения
Штамм гибридных культивируемых клеток мыши Mus musculus N В-1/85 (Коллекция перевиваемых гибридных клеточных линий ЦНИИ гематологии и переливания крови), используемый для получения моноклональных антител к группоспецифическому антигену В эритроцитов человека.РИСУНКИ
Рисунок 1
