Способ идентификации нуцеллярных и гибридных растений цитрусовых

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству , а именно к селекции цитрусовых. Цель изобретения - ускорение процесса идентификации и повышение точности. Берут образцы листьев 2-3-месячных проростков, экстрагируют из них белки, проводят электрофорез и получают электрофореграммы листьев. Анализу подвер|-ают электрофореграммы изоферментов аспартатаминотрансферазы при анализе сеянцев, полученных в результате скрещивания грейпфрут х трифолиата и гексокиназы для сеянцев мандарин X апельсин. Нуцеллярные сеянцы имеют только аллель материнского растения, гибридные сеянцы-аллели обоих родителей, при этом электрофореграммы гексокиназы и аспартатаминотрансферазы не различаются у плодоносящих побегов и 2-3-месячных сеянцев.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1376989 А1 д11 4 А 01 Н 1/04, А 01 Q 7 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3929761/30-15 (22) 18.07.85 (46) 29.02.88. Бюл. № 8 (71) Институт обшей генетики АН СССР и Всесоюзное научно-производственное объединение по чаю и субтропическим культурам (72) Б. И. Капанадзе и В. А. Шевченко (53) 631.521 (088.8) (56) Amer 1. Bot. 1978, 65, (8), р. 869 — 881. (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ НУЦЕЛЛЯРНЫХ И ГИБРИДНЪ|Х РАСТЕНИЙ ЦИТРУСОВЫХ (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции цитрусовых.

Цель изобретения — ускорение процесса идентификации и повышение точности. Берут образцы листьев 2-3-месячных проростков, экстрагируют из них белки, проводят электрофорез и получают электрофореграммы листьев. Анализу подвер ают электрофореграммы изоферментов аспартатаминотрансферазы при анализе сеянцев, полученных в результате скрещивания грейпфрут х трифолиата и гексокиназы для сеянцев мандарин х апельсин. Нуцеллярные сеянцы имеют только аллель материнского растения, гибридные сеянцы-аллели обоих родителей, при этом электрофореграммы гексокиназы и аспартатаминотрансферазы не различаются у плодоносящих побегов и 2-3-месячных сеянцев.

1376989

Формула изобретения

Составитель Е. Шкрадюк

Редактор Н. Киштулинец Техред И. Верес Корректор В. Бутяга

Заказ 506/2 Тираж 661 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

П3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к селекции цитрусовых и может быть использовано в сельском хозяйстве.

В цитрусоводстве широко используются межвидовые гибриды, например мандарин х хапельсин,,грейпфрут х трифолиата, грейпфрут х лимон и др., применение которых в промышленных посадках позволяет избежать инбредного вырождения. Кроме того, такие гибриды, как правило, сочетают соединенные свойства принимающих учстие в гибридизации исходных форм. Идентификация на ранних стадиях развития гибридных форм среди сеянцев, полученных от скрещивания, и выбраковка нуцеллярных сеянцев, имеющих место в большом количестве при таких скрещиваниях, является важной практической задачей.

Цель изобретения — ускорение процесса индентификации и повышение ее точности.

Пример. У исследуемых образцов берется лист весом около 50 мг. Образец помещают в ступку, добавляют песок, заливают жидким азотом, добавляют 0,2 — 0,25 мл

0,05 М трис-НС! (рН 8,3) буфера, растирают пестиком, центрифугируют в течение 20 мин при 15000 об/мин в рефрижераторной центрифуге, сливают надосадочную жидкость, содержащую белки данной ткани, и проводят электрофорез в блоке 7,5о-ного полиакриламидного геля (рН 8,3) в трис-боратной системе при напряжении 300 В в течение

1 ч 30 мин. После окончания электрофореза гель извлекают из электрофоретической камеры и помещают в кювету для окраски. В случае излучения образцов гибридов мандарин х апельсин гели заливают красящей смесью, содержащей 90 мг декстрозы, 20 мг NgC1, 25 мг АТФ, 25 мг НАДФ, 20 мг НСТ, 3 мг ФМС, 80 ед (0,035 мл) глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы, 10 мл 0,5

M трис-HCl буфера (рН 8,0), 90 мл воды, выявляющей полосы активности фермента гексокиназы, а в случае анализа гибридов грейпфрут х трифолиата — красящей смесью, содержащей 160 мг аспартата, 40 мг а-кетоглутаровой кислоты, 60 мг прочной синей РР соли, 50 мл O,j М трис-НС! буфе2 ра (рН 8,8), выявляющей полосы активности фермента аспартатаминотрансферазы.

Изученные сорта в пределах вида не отличались друг от друга по электрофореграммам проанализировано 8 сортов мандарина, 6 сортов апельсина, 4 сорта грейпфрута и 1 трифолиата. Имеются аллельные отличия в спектрах изоферментов между различными видами, что и позволяет однозначно идентифицировать гибриды между видами.

Нуцеллярные сеянцы имеют только аллель материнского растения, гибридные сеянцы — аллели обоих родителей, при этом электрофореграммы гексокиназы и аспартатаминотрансферазы не различаются у плодоносящих деревьев и 2-3-месячных сеянцев.

Для установления достоверности идентификации гибридных и нуцеллярных сеянцев с помощью изоферментов были взяты в анализ 148 плодоносящих деревьев, среди

2р которых 70 по морфологическим и вкусовым показателям были идентифицированы как гибридные, а 58 — как нуцеллярные.

Результаты, полученные с использованием метода электрофореза, полностью совпали с результатами идентификации деревьев по морфологическим и вкусовым показателям.

Способ идентификации нуцеллярных и гибридных растений цитрусовых, включающий взятие образцов листьев, экстракцию из них белков, их электрофорез, получение электрофореграмм и их анализ на присутствие характерных полос-маркеров отцовского компонента для гибридных растений и по присутствию электрофоретических вариантов материнских растений для нуцеллярных растений, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса идентификации и повышения ее точности, получают электрофореграммы листьев 2-3-месячных проростков, а

40 анализу подвергают электрофореграммы изоферментов аспартатаминотрансферазы при анализе сеянцев, полученных в результате скрещивания грейпфрут х трифолиата и гексокиназы для сеянцев мандарин х апельсин.