Способ формирования отделов нефрона в имплантатах

 

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и может быть использовано для образования функционирующих структур, нефронов почки, предназначено для образования функционирующих структур органов,создания экспериментальной модели для апробации фармакологических веществ, определения жизнеспособности биоптатов. Целью изобретения ,является образование функционирующих зрелых отделов нефрона в имплантатах путем того, что через 15-30 мин после извлечения почки у линейного животногодонора и измельчения ее до размеров 0,5-1 мм проводят совместную имплантацию коркового и мозгового веществ в соотношении 1:2 однолинейным животным-реципиентам равного или меньшего возраста. (Л С

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) .аааею ю др««м люу нРФ с +. (50 4

) р

v с

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3900549/28-14 (22) 20,05. 85 (46) 07.05.88. Бюл. У 17 (71) Тюменский медицинский институт (72) П.В. Дунаев, Г.С. Соловьев и С.М. Пантелеев (53) 611.611-018.7(088.8) (56) Лазаренко Ф.М. Закономерности роста и превращения тканей и органов в условиях культивирования (имплантации) их в организме. — М.: Медгиз, 1959, с. 160-183. (54) СПОСОБ ФОРМИРОВАНИЯ ОТДЕЛОВ НЕФРОБА В ИМПЛАНТАТАХ (57) Изобретение относится к области экспериментальной медицины и может быть исйользовано для образования функционирующих структур, нефронов почки, предназначено для образования функционирующих структур органов,создания экспериментальной модели для апробации фармакологических веществ, определения жизнеспособности биоптатов. Целью изобретения, является образование функционирующих зрелых отделов нефрона в имплантатах путем того, что через 15-30 мин после извлечения почки у линейного животногодонора и измельчения ее до размеров

0 5-1 мм проводят совместную имплантацию коркового и мозгового веществ в соотношении 1:2 однолинейным животным-реципиентам равного или меньшего а возраста.

1393388

Изобретение относится к эксперй= ментальной медицине и может быть использовано для образования функциони, рующих структур органон (образование

5 функционирующих структур нефронов может быть использовано для определения жизнеспособности биоптатов и органов для трансплантации, для излучения органотипической детерминации тканей, 10 для изучения влияния на нее различных медикаментозных средств)..

Целью изобретения является образование функционирующих отделов нефрона, что достигается совместной имплантацией коркового H мозгового ве,ществ в соотношении 1:2 от линейного донора однолинейным животным-реципиентам равного или меньшего возраста сразу после извлечения почки у доно- 20 ра.

Способ осуществляют следующим об разом.

У наркотизированного линейного животного-донора в стерильных условя-25 ях извлекают почку, скальпелем иссе,кают кусочек коркового и прилежащий к нему кусочек мозгового веществ в соотношении 1:2 и измельчают до размера 0,5-1,0 мм, кусочки коркового ,и мозгового веществ смешивают и им плантируют подкожно животному-реци пиенту той же линии. Период от извлечения органа у донора до имплантации кусочков его реципиенту состав- . ляет не более 30 мин. Используют реципиентов и доноров одной линии и одйого пола, при этом возраст реципиента не превышает возраст донора. Через

6-8 сут имплантаты извлекают из ор- А0 анизма реципиента, фиксируют в жидкости Карнуа, заливают в парафин и отовят срезы для гистологического

И гистохимического анализов. На гистологическом препарате определяют степень морфологической дифференцировки новообразованньж в имплантатах отделах нефронов, "Hc I.oõèìè÷åñêè определяют степень функциональной зрелости этих структур.

Пример 1. Проведена имплантация вещества почки линейных крыс

"Август" однолинейным животным. В стерильных условиях под эфирным наркозом у донора в возрасте 4 мес извле али левую почку, в стерильной чашк е Петри скальпелем вырезали кусочек г очки, включающий на I/ 3 корковое и иа 2/3 мозговое вешества, размельчали корковое, а затем мозговое вещество до размера кусочков 0,51,0 мм, смешивали кусочки корконого и мозгового веществ в соотношении

1:2 и стерильным зондом через разрез на коже брюшной стенки реципиента в возрасте 2,5 мес внесли имплантат в подкожную клетчатку. Разрез на коже реципиента зашивали стерильным шовным материалом. От момента извлечения почки у донора до имплантации прошло 20 мин.

На стадии 8 сут опыта животному внутрибрюшинно вводили питуитрин Н3 расчета 5 ЕД на 1 кг веса животногореципиента. Через 30 мин после введения провели эвтаназию реципиента путем декаптации, У реципиента экстирпировали почки и имплантат, фиксировали в жидкости Карнуа 1 ч, заливали в парафин. На гистологических срезах толщиной 5-7 мкм проводили гистохимическую реакцию связывания коллоидального железа по методу Хейла. Окрашенные срезы микроскопировали. В препаратах в разрастающейся соединительной ткани видны новообразованные эпителиальные структуры различных отделов нефрона, почечные тельца, включающие эпителиальный и соединительно-тканный компоненты и по своим параметрам идентичные таковым в интактных почках. В межклеточных пространствах новообразованных канальцев накапливаются гликозаминогликаны, при этом гистохимическая картина в имплантатах аналогична таковой в почках реципиента. Это, кроме морфологических тестов, служит еще одним подтверждением функциональной зрелости новообразованных в имплантатах отделов нефронов.

П р и м е > 2. Проведена имплантация ткани почки линейных крыс "Вистар" однолинейным животным-реципиентам. Как донор, так и реципиент имели одинаковый возраст 3 мес. В. стерильных условиях под эфирным наркозом у донора извлекали левую почку, в стерильной чашке Петри отделили корковое вещество от мозгового, с помощью торсионных весов отделили кусочек мозгового вещества весом 0,05 r и кусочек корков ого вещества весом О, 025 г . Полученные кусочки коркового и мозгового веществ скальпелем размельчили до размера кусочков. 0,5-1,0 мм, смешали кусочки коркового и мозгового веществ

1393388 в соотношении 1:2, через разрез на коже брюшной стенки реципиента сте-, рильным зондом внесли полученную массу в подкожную клетчатку. Разрез на коже реципиента ушили наглрухо. От

5 момента извлечения почки у донора до наложения шва на разрез на коже реципиента прошло 18 мин.

На стадии 6 сут опыта животному 10 внутрибрюшинно ввели питуитрин из расчета 5 Ед на 1 кг веса животного.

Через 30 мин после введения проведена эвтаназия реципиента путем декапитации, у животного экстирпированы имплантаты и почки, зафиксированы в жидкости Карнуа 1 ч, залиты в парафин. Изготовлены гистологические срезы толщиной 5-7 мкм, на которых проВедена комплексная реакция связыва- 20 ния коллоидального железа по Хейлу и шик-реакция по Мак-Манусу. В полученных гистологических препаратах четко видны сформированные почечные тельца и срезы канальцев различных 25 отделов нефрона, при этом гистохимическая картина и сформированных дистальных отделах аналогична таковой в почках реципиента, что подтверждает функциональную дифференцировку отделов нефрона в имплантатах., Пример 3. Проведена имплантация ткани линейных крыс "Август" однолинейньвл животным. Возраст донора и реципиента равен 3 мес. В стерильных условиях под эфирным наркозом у донора извлекли левую почку, в стерильной чашке Петри скальпелем вырезали кусочек коркового вещества весом 0,03 r и кусочек мозгового вещества весом 0,06 r, размельчили по40 лученные кусочки до размера 0 51,0 мм, смешали полученные кусочки коркового и мозгового веществ в общую массу и стерильным зондом через разрез на коже брюшной стенки реципиента внесли имплантат в подкожную клетчатку. Разрез на коже реципиента ушили стерильным шовным материалом.

От момента извлечения почки у донора до имплантации ткани почки в подкожную клетчатку реципиента прошло

16 мин.

На стадии 15 сут опыта у реципиента под эфирным наркозом экстирпировали имплантат, зафиксировали в жидкости Карнуа, залили в парафин. На гистологических срезах толщиной 57 мкм проведена комплексная реакция связывания коллоидального железа по Хейлу и шик-реакция по Мак-Манусу. Проведена докраска гематоксилином Гарриса ° На гистологических срезах хорошо видны сформированные канальцы различных отделов нефрона и почечные тельца по своей морфологической структуре аналогичные таковым в почках. Гистохимическая картина выявления нейтральных гликопротеинов и гликозаминогликанов позволяет четко дифференцировать сформированные проксимальные и дистальные отделы нефрона, что подтверждает органотипическую детерминацию эпителия нефрона и возможность формирования дифференцированных отделов нефрона в имплантатах.

Время (15-30 мин) пребывания материала после извлечения из организма донора до момента имплантации обусловлено тем, что при хранении донорского материала более 30 мин наступают изменения в компонентах нефронов и мочеотводящих путей в результате ишемизации тканей. Имплантация длительно ишемизированного материала не позволяет сформировать отделы нефрона. Имплантация материала ранее 15 мин невозможна по техническим причинам. Соотношение коркового и мозгового веществ 1:2 подобрано экспериментальным путем.

Предлагаемый способ позволяет мо-, делировать в имплантатах индуктивную систему нефрогенеза, устранить иммунологический конфликт в системе донор-реципиент, сохраняет жизнеспособность имплантируемых тканей, обеспечивает функциональную дифференцировку образующихся в имплантатах отделов нефрона.

Формула изобретения

Способ формирования отделов нефрона в имплантатах, включающий извлечение почки у донора, измельчение ее и имплантацию реципиенту, о т л и— чающий с я тем, что, с целью образования функционирующих отделов нефрона, проводят совместную имплантацию коркового и мозгового веществ в соотношении 1:2 от линейного донора однолинейным животным-реципиентам равного или меньшего возраста сразу после извлечения почки у,тонора,