Средство для определения продуктов реакции перекиси водорода с пероксидазой

 

Изобретение относится к индикаторам окислительно-восстановительных реакций и может быть использовано в медицинской диагностике. Цель изобретения - повышение стабильности хранения средства. Средство содержит производное имидазола, которое наносят на носитель. Стабильность средства до 10 дней (прототипа - 3 дня).

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

09) (ll) (5д 4 G 01 N 33/68

48

ЧЕСН4Я

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И FlATEHTY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHSIM

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 3871843/28-14 (22) 28.03.85 (31) P 3411997.3 (32) 31.03.84 (33) DE (46) 23.07.89. Бюл. N- 27 (71) Берингер Маннхайм Гмбх (DE) (72) Ульферт Денеке, Вернер Гютляйн, Манфред Кур, Хартмут Мердес, ХансРюдигер, Муравски — (DE) и Ханс

Вилингер (AU) (53) 612.015 (088.8) (56) Заявка ФРГ ¹ 2735690, кл. С 07 D 233/64, 1975.

Изобретение относится к индикаторам окислительно-восстановительных реакций, в частности к средству для определения продуктов реакции перекиси водорода с пероксидазой, которое можно использовать в медицинской диагностике.

Цель изобретения — повышение стабильности хранения.

Поставленная цель достигается предлагаемы средством для определения продуктов реакции перекиси водорода с пероксидазой, содержащим производное имидазола общей формулы., где R — водород, метил, оксибутил, тетрагидрофуранил, 2 (54) СРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕН1Л ПРОДУКТОВ РЕАКЦИИ ПЕРЕКИСИ ВОДОРОДА С

ПЕРОКСИДАЗОИ (57) Изобретение относится к инди.каторам окислительно-восстановительных реакций и может быть использовано в медицинской диагностике. Цель изобретения — повышение стабильности хранения средства. Средство содержит производное имидазола, которое наносят на носитель. Стабильность средства до 10 дн (прототипа — 3 дн). 2 табл.

R, R — одинаковы или различны и означают юлолидин, тетрагидрохинолин, замещенный метилом или бензилом, или остаток где К вЂ” гидроксил, аминогруппа, диметиламиногруппа, амино-(ди)-уксусная кислота, амино-этансульфокислота, амино-этанфосфоновая кислота, Р и R одинаковы или различны и означают водород, метоксил, трет-бутил, (ф причем R < и R одновременно не могут означать юлолидин или тетрагидро- хинолин, замещенный метилом или бензилом, и по меньшей мере один радикал В.4 означает гидроксил, или его

3 гидрохлорид и добавку из числа . твердых и жидких носителей при сле дующем соотношении компонентов,мас.У.:

Производное имидазола общей формулы (I) или

его гидрохлорид 0,01-1

Добавка иэ числа твердых и жидких носителей Остальное

Предлагаемое средство приготовляют простым смешиванием ингредиентов.

Производные имидаэола общей формулы (I), содержащиеся в предлагаемом средстве, являются новыми соединениями. Их получают известными методами, например, тем, что а) Ы -дикетон общей формулы

0 0

1 !! ll

- 12

1 в которой R u R имеют указанное значение, подвергают конденсации с альдегидом общей формулы

1496644 4

Целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли.

В примерах используют следующие производные имидазола Мг I — - XXXI:

I гидрохлорид 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)-4-(5)-(4-диметиламино-фенил}-5-(4)-метил-(1Н)-имидазола о

10 .т.нл. 215-219 С (разложение),Ъ мс,„с == 680 нм (Я = 25,500);

II гидрохлорид 2-(4-оксифенил) -4-(5) — (4-диметиламинофенил) -5-(4) -метил-(1Н) -имидаэола, т. пл. 242О С (раз15,ложение),%„„„с = 412 нм (E =2,1,860), III гидрохлорнц 2-(3,5-ди-трет-бутил-4-оксифенил) -4-(5)-(4-диметиламинофенил)-5-(4)-метил-(1Н)-имида-. зола, т.пл. 255ОС (разложение), 20

55 (III) О =* СН-R

22- С- С- З

И ll

50Н О (IV) в которой R u R имеют указанное значение, подвергают взаимодействию с альдегидом формулы (IIX) и аммиаком и получаемое при этом соединение формулы

Bz — Ч

М „, О (V)

) подвергают восстановлению, или в) ацилбромид общей формулы (ЧЕ) в,— с NH

МН (VII) в которой К имеет указанное энаI чение и с аммиаком в кислом растворе, или б) Ы -кетоксим общей формулы

К - СΠ— CHRBr

2. в которой К и R имеют указанное значение, подвергают взаимодействию с амидином общей формулы ! в которой R имеет указанное значе ние, в щелочной среде, макс=650 нм (Q = 41,830) ", IV гидрохлорид 2-(4-оксифенил)-4-(5) †(3,5-диметокси-4-оксифенил)—

-5-(4)-метил-(1Н}-имидазола, т.пл.

326 С (разложение),Я ц „,= 533 нм (Я = 6,400), V гидрохлорид 2-(3,5-ди-трет-бутил-4-оксифенил) -4- (Я вЂ” (3, 5.-диметокси-4-оксифенил) -5-(4) -метил-(1Н)о

-имидаэола, т.пл. 296 С (разложеave) ь % мс,кс = 673 нм (Я = 29,800)", UI гидрохлорид 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)-4-(5)-(4-оксифенил)-5 (4) -метил-(1Н) -имидаэ ола, т. пл. о

197-199 С (разложение), 9 кс

= 533 нм (Я = 6,400), VII гидрохлорид 2,4-(5) -ди-(3,5-диметокси-4-оксифенил) -5-(4) -метил-(1Н)-имидазола, т.пл. 158 С (разложение), $ „,„„= 590 нм (Я = 1 7, 900), VIII гидрохлорид 2-(4-диметиламинофенил) -4-(5) -(4-оксифенил) -5— (4) -метил-(1Н) -имидазола, т. пл.

225-230 С (разложение), 9 „н,qc 510 нм (E = 10, 500);

IX гидрохлорид 2-(4-диметиламинофенил) -4- (5) -(3, 5-диме токси-4-оксифенил) -5-(4) -метил-(1H) -имидазола, т.пл. 182-200 С (разложение), h»Äc =

670 нм (Я = 10, 800);

Х гидрохлорид 2-(6-метил-1,2,3,4-тетрагидрохинолино) -4-(5) -(3, 5-диметокси-4-оксифенил) -5- (4) -метило

-(1Н)-имидазола, т.пл. 190 С (разложение), h кс -" 700 нм (E.=19,400), ХЕ гидрохлорид 2-(9-юлолидино) -4-(5)-(3,5-диметокси»4-оксифенил)-5-(4)-метил-(1Н)-имидаэола, т. пл..

201 С (разложение),% „„„„ 690 нм (. =

** 25,399), 5 1

ХХХ гидрохлорид 2-(4-окси-3-меток сифенил) -4-(5) -(4-оксифенил)-5-(4)—

-метил-(1Н) -имидазола, т.пл. 270 С (разложение),3 „, „= 502 нм (Я =

3, 730);

XIII 2-(3,5-ди-трет-бутил-4-оксифенил)-4-(5) -(4-оксифенил) -5-(4)—

-метил-(1Н)-имидазол, т.п. 200-202 С (разложение), 9,ца„с = 486 нм (F =

= 6,700), XIV 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)

-5-(4) -метил-(1Н) -имидазолил-4-(5)—

-фенил-4-амино-N-этансульфокислота) о

У т. пл. ) 260 С (разложение), A c, xc =

615»M (Я = 27, 500);

XV 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)—

-5-(4)-метил-(1Н)-имидазолил-4-(5)—

-(фенил-4-амино-N-этанфосфоновая кис лота), т.пл. )250 С (разложение), 624 нм (Я = 25,600);

XVI 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)-5(4)-метил-(1H)-имидазолил-4-(5)-(фенил-4-аминоуксусная кисо лота), т.пл. 124 С (разложение), )1 макс = 620 нм (Я = 18,800);

XVII 2-(3, 5-ди-трет-бутил-4-оксифенил) -4-(5) -(4-аминофенил) -5-(4)—

-метил-(1Н) -имида зол, т. пл. 228230 С, h мак = 576 нм (Я = 31,200);

XVIII 2-(3,5-ди-трет-бутил-4-окси фенил) -5-(4)-метил-(1Н) -имидазолил-4-(5)-фениламиноуксусная кислота, аморфная, %, „„ = 614 нм (Я=39,900), XIX 2-(3,5-ди-трет-бутил-4-оксифенил)-5-(4)-метил †(1Н)-имидазолил-4-(5)-фениламино-диуксусная кислота), т. пл. 225 С (разложение), 3 макс = 580 нм (Я = 31,700), ХХ 2-(1-бензил-1,2,3,4-тетрагидрохинолино) †4 †(5) †(3,5-диметокси-4-оксифенил)-5-(4)-метил-(1Н)-имидазол, т.пл. 190 0 (разложение),3 „,а„с — 705 нм. (с. = 31,500);

XXI гидрохлорид 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)-4-(5)-(4-аминофенил)-5-(4)-метил-(1Н)-имидазола, т.пл.

250 С (разложение),% „„а» = 580 нм (f = 18,900), XXII гидрохлорид 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)-4-(5)-(4-амино-3-метоксифенил) -5-(4) -метил-(1Н) -имидазола, т. пл. 218 С (разложение), макс= 402 нм (Я = 15,400), XXIII гидрохлорид 2-(4-аминофенил)-4-(5) -(3,5-диметокси-4-оксифенил)-(1Н)-имидазола, т. пл. 285

290 С,Ъ = 560 нм (5 = 24,500), . XXIV гидрохлорид 2-(4-диметиламинофенил)-4-(5) -(3,5-диметокси-4496644 6 — оксифенил) -(1Н) -имицазола, т. пл.

295-298 С, Хм„,„= 626 нм (8=4,770)

XXV гидрохлор щ 2,4-(5) -бис-(4-диметиламинофенил) — (1Н) -имидазола, 5 т. пл. 233 †2 С,7 = 764 нм (Е = — 9800), XXVI гидрохлорид 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)-4-(5)-(4-диметилами10 но-фенил)-5-(4)-(2-тетрагидрофурил)-(1H)-имидазола, т. пл. 98/110 С (разложение) (нет четкой точки плавления) Rf = 0,36 (силикагель, элюент: хлороформ/метанол в соотно!

5 шенин:5:1), % axe = 680 нм (Я =

16, 700), ХХЧ»Х гидрохлорид 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)-4-(5)-(4-диметиламинофенил) -5-(4 -(4-оксибутил) -(1H)—

-имидазола, т.пл. 210-212 С (разложение), »,„,„„, = 640 нм (/=25,000), XXVIII гидрохлорид 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)-4-(5)-(4-диметиламинофенил)-4-(5) -метил-(1Н) -имидазола, т. пл. 218-219 С (разложение), макс = 680 нм (Я = 25,500), XXIX гидрохлорид 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)-4-(5)-(4-диметиламино-3-метоксифенил)-5-(4)-метил †(1Н)— о

-имидазола, т. пл. 211 С (разложение),% макс = 417 нм (E, = 28,300);

ХХХ 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил)—

-5-(4) †мет-(1Н)-имидазолил-4-(5)—

-(фенил-4-амино-N-моноэтан-2-сульфокислота) Rf = 0,44 (силикагель, элюент: изопропанол/простой н-бутиловый эфир/вода в соотношении 5:3:2), h макс

XXXI 2-(3,5-диметокси-4-оксифенил) — 5-(4)-метил-(1Н)-имидазолил-440

-(5) -(фенил-4-амино-N-бис-этан-2-сульфокислота), Rf = 0,28 (силикагель, элюент: изопропанол/простой н-бутиловый эфир/вода в соотношении

5:3:2),% макс = 610 нм (Я = 28,400) .

Взятые в скобки в названии соединений Nr I-XXXI цифры 4, и 5 соответственно означают соответствующее положение заместителя таутомерной

50 формы.

Пример 1. Фильтровальную бумагу пропитывают водным или метанольным раствором, содержащим 0,01, 0,1 . или 1,0 мас. производного имидазола, сушат и разрезают на куски, одну

55 часть котор используют для определения продуктов реакции перекиси во- дорода с пероксидазой сразу же, вторую часть — после хранения при темО пературе 35 С и относительной влаж1496644

8 ности воздуха 507 в течение 3 дн, а третью часть — после хранения в указанных условиях в течение 10 дн. Для осуществления опыта пропитанную раст5 вором производного имидазола бумагу увлажняют раствором 0,5 г перекиси водорода и 0,1 г пероксидазы в 100 мл воды и по истечении 5 мин при помощи фотометра определяют окраску бумаги в 7 отражения при 550 нм по сравнению с контрольной бумагой (т.е. бумагой, не увлажненной водным раствором перекиси водорода и пероксидазы) .

f5

Результаты опыта сведены в табл.1.

Сравнение данных табл. 1 свидетельствует о том, что предлагаемое средство проявляет лучшую стабильность хранения, выражающуюся в меньших потерях отражения.

Пример 2. Реактивная пленка для обнаружения перекиси водорода.

К сырой массе реактивной пленки 25 (около 99,5 мас.7), состоящей из

18 r дисперсии пластмассы сополимера из винилацетата и винилпропионата, 1,38 г альгината, 69 г буфера трисцитрата с рН 7,5 (0,45 моль/л), 0,025 г 1-(3-хлорфенил)-полукарбацида, 0,025 r IIgK эапц 2Н О, 0,05 r тритона X 100, 0,6 r гексанола и

20О медно-аммиачной пероксидазы, добавляется 0,47 r (около 0,5 мас.7)

2-(3-диметокси-4-гидроксифенил)-435 — (5) — (4-диметиламинофенил) -5-(4)—

-метил- (1 Н) -имидаз ол-гидр охлорида (соединение формулы I), Этот состав для покрытий нано40 сится толщиной мокрой пленки 200 p m на прозрачную пленку и высушивается.

На этот полученный таким образом слой наносится второй слой в качестве оптически белого фона состава с .толщиной слоя 200 рm и вы45 сушивается: 52 мп 0,1 м буфера трисцитрата с рН 7,0, 5,5 r двуокиси титана, .2,7 r диатомовой земли, 0,4 r альгината,,1,4 г дисперсии пластмассы добавки сополимера из винилацетата и винилпропионата, а также 0,2 r тритона Х 100.

Полученная таким образом набухающая и всасывающая реактивная пленка обрабатывается для испытания. Для обнаружения перекиси водорода на зону Дозирования наносится 30 1 опытного раствора. Через 1 мин реакФормул а и з о б р е т е н и я

Средство для определения продуктов реакции перекиси водорода с пероксидазой, содержащее производное имидазола и добавку из числа твердых и жидких носителей, о т л и ч аю щ е е с я тем, что, с целью повышения стабильности хранения, в качестве производного имидазола оно содержит соединение общей формулы (1) где R — водород, метил, оксибутил, тетрагидрофуранил, R u R — одинаковы или различны ( и означают юлолидин, тетрагидрохинолин, замещенный метилом или бензилом, или остаток

rpe R гидроксил аминогруппа ди метиламиногруппа, амино-(ди)-уксусная кислота, амино-этансульфокислота, амино-этанфосфоновая кислота, R u R — одинаковы или различны и

3 означают водород, метоксил, трет-бутил причем R„ è R< одновременно не могут означать юлолидин или тетрагидрохинолин, замещенный метилом или бензилом, и по меньшей мере один радикал R< означает гидроксил, или его гидрохлорид при следующем соотношении компонентов, мас.Ж:

Соединение формулы (I) или его гидрохлорид 0,01-1,0

Твердый или жидкий носитель

Остальное тивный клапан прижимается, а еще через 2 мин полученный цвет измеряется фотометром диффузного отражения.

С установленной ранее эталонной кривой считываются данные концентрации перекиси водорода.

В табл. 2 приводятся данные для эталонной кривой

1496644 причем в качестве твердого носителя применяют фильтровальную бумагу или набухаемую, соответственно всасыреактивную пленку, а в кажидкого. — воду или метанол. вающую честве б л ица 1

Х отражения при содержании производного имидазола равном, мас. Х, через время, дн

Производное имидазола, содержащееся в средстве, Nr средстве, 0 3

10

29

29

ЗО

29

33

29

29

3t

А — известное соединение 2,4-ди-(4-диметиламино-3,5-диметоксифенил)-5-(4-оксифенил)-имидазол

Б — гидрохлорид известного соединения А

%+ - отражение нельзя измерить из-3а сильной собственной окраски.

II

III

IV

VI

VII

VII

IX

XI

XII

ХШ

XIV

XV

XVI

XVII

ХЧШ.

XIX

ХХ

XXI

XXII

XXIII

XXIV

XXV

XXVI

XXVII

XXVIII

XXIX

ХХХ

XXXI

А

45 45

45 46

46 46

45 45

46 46

47 47

45 46

45 45

47 47

48 48

47 48

46 46

45 45

47 48

46 46

48 48

46 46

47 47

47 47

48 49

45 45

46 46

47 47

46 46

48 48

47 47

46 46

45 45

46 46

46 46

47 48

48 - 58

48 58

47

47

48

46

48

49

47

47

49

48

47

48

51

48

49

49

51

47

48

49

48

48

47

48

48

51

62

33 34

33 34

34 35

33 34

34 35

35 35

33 34

34 34

35 35

37 37

36 37

34 34

33 34

35 37

33 34

36 37 .34 35

34 35

34 35

38 38

35 35

34 35

35 35

33 34

38 38

35 36

34 34

34 34

33 34

33 34

38 39

42 54

42 54

36

36

37

36

37

38

36

36 .

38

37, 36

39

36

37

37

37

41

38

37

38

36

38

37

Зб

36

36

41

6t

28

28

29

28

29 30

28

29

34

29

28

32

28

32

29

29

30.

29

28

28

38

36

36

29

33

29

33

31

31

36

31

29

29

29.

37

38

38

32

31

36

32

33

33

39

33

32

33

32

38

33

32

31

31

31

40,12

1496644 .

Таблица 2

Концентрация пе- Диффузное отрарекиси водорода, жение, 7 мг/л

Составитель А.Агуреев

Редактор А.Козориз Техред Л.Олийнык Корректор Л.Патай

Заказ 4290/59 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

4,2

7,3

12,4

18,4

53,0

40,3

35 0

19,8