Способ электрофоретического переноса молекул

 

Изобретение относится к электрофоретическому разделению молекул , в частности, к способам перекоса разделенных на геле молекул. Цель изобретения - снижение энергозатрат и увеличение скорости разделения. Перенос молекул из геля ведут под действием электрического тока, причем используют однонаправленный пульсирующий ток, представляющий собой по форме синусоиду на участке, составляющем долю полупериода, причем на остальной части периода ток равен нулю.

СОЮЗ СОНЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИ )

РЕСПУБЛИН (>1 4 ", 25 B 7,/00 .:ыл молекул .

L> .:! . ri3> "» е > г. в! r повышение эффекI ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕ 1

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И О П-)Р!=)ТИЖ,)

ПРИ ГКНТ CCCP (2! ) . I . I .. .2,! 31 — ;

; 2, ) 0; 86 .".5 ° ? > 0>Г 9 В».i ) )! (, 1 I 1".исти-у м<в ек..л >рн )й генетики

)>,)1 ССС)

; 7? > А. )!, Век э>r» ..!- Маилосьян > „А . I l à ". ", å >-! к о

5; 543, 545. 51088, 8) (56) 8оц lern Е,M, J, Mol, Biol. 98, r 9" 5, р. 503. (5;> 00! .",; з.)ЕКТРО ЖГЕТ))>)ЬС!!ОГО ПЕ-! ),II>lI,>"-> .10.1.!".КУ. i

))з )ире ени. о >>оси ся к электрофор тическому ра -rä«J!å,. >ю молекул в подд .ржив.е>)>>>их cp«J>à."., в частности к сliocor)c>M» в.>«чения и.з сред разделен—

-. ив ности )>;)» е«с,) „

Сущность способа !!ореииса макромо-! «ê,J! заключаетс в >рименении вместо ояыногс > ока ..у»ь; ирую>цего тока .)C>li> lH фОР!-Ы.

Блек! р>)форез проводят в пластинах (размеры ) 35х) )0х), 4 м.!) 157. геля (сшивка 0,8; 3>!) в 0, 33 М трис-))0) буфера рН 8, г с добав)и.нием SDS в концентраJrJH О,!/, )s кач"стье электроцk- or о буфера ис новь ую! О, 025 М трв>.— г 92 >..1 -„,, >! 8 ) « пе«r!» и S)> >!, .. ....., .. >rr!r> . ) q„, ).:ел"

>r;,IrÜrÑ ПРСИаРа Ь>,Н .ООР r!P) «РОВ И СУМмарь ый )и>;ат кле",.:< Г., соl i) растворяю", в . уфер об,: :эп по ко)>центра>)ии 5 мг r;r! и прс гр >!;>: г! в кипящей ис>дяной бац> в: >! ии .. мн>> . Нри

„„SU„„1502662

2 (57) Изобретенис относит ся к электрофоретическ ому ра здел е нию молек у:>, в частности к способам перекоса раздеJ1r и>!ых на геле молекул. Цель изобреения — снижение энергозатрат и увели>и ние скорое.ти разделения. Перенос молекул из геля ведут под действием

;лектрического тока, причем используюг однонаправленный пульсирующий ток, .редставляющий собой по форме сину.г»rJ) на участке, составляющем долю олv>)åpèoäà, причем на остальной час>и периода ток равен нулю, злектрофорезе на дорожку наносят по

10 мкл препарата, Электрофорез ведут при напряже)>ии U =150 В до тех пор, пока бромфеноловый синий не достигнет нижней гран>гцы геля, Гель после электрофореэа вымачивают в 0,025 M трис-НС)

О, 1 92 M глицин буфере рН 8,6 в течение 30 мин для удаления SDS, На поверхность пористой пластины из оргстекла последовательно кладут слой фильтровальной бумаги (толщина 5 мм), увлажненной упомянутым з!ппе трис-глициновым буфером, гель, нитроцеллюлозный фильтр, слой филь-рова)>ьной бумаги, увлажненной трисглициновым буфером, Нитроце:!)>юлозный фильтр предварительно вымачивают

30 мин в трис — глициновом буфере. Не— обходимо избегать попадания пузырей воздуха между гелем и:>итр ц«>!люлоэ— нь;и фильтром, На Il>1«J!åärr>r;! «>>ои бумаги кладут втору») п»рис ты. и >а«тину из оргстекла и !l>));ó÷å!!!!I,:;: - >н;>вич формула изобретения

Опособ электрофоретическога переноса молекул из полиакриламидного геля на нитроцеллюлозный фильтр путем обработки электрическим током, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности процесса, перенос ведут с использованием однонаправленного пульсирующего тока, представляющего собой по форме синусоиду на участке, составляющем долю полупериода, а на остальной части периода ток равен нулю, Составитель Т, Барабаш

Редактор A.éàíäîð Техред Л.Олийны Корректор 0,Öèïëå

Подпис но е

Заказ 5049/37

Тираж 605

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

3 1 50266 стягивают болтами через отверстия, просверленные в ребрах жесткости и пористых пластинах. В канавки, проточенные в ребрах жесткости, вставляют электроды и собранную таким образом ячейку помещают в непроводящую камеру, наполненную 0,025 M трис-HС1

О, 192 М глицин рН 8,6 буфером.

Перенос ведут под действием пульси-10 рующего синусоидального напряжения с отсечением напряжения в момент полупериода Р (О < P (1), ь .--. Конкретное значение подбираетсяьвкспериментально и определяется 15 по41истостью геля и величиной перенос симых макромолекул, Стратегия в подI боре р состоит в том, чтобы обеспечить максимальное значение амплитудного напряжения при минимальном теп- 20 ловыделении за счет протекания электрического тока.

Перенос ведут с /30, 725, Б р

9 В/см в течение 1,5 ч. В качестве контроля провели перенос по известному способу при постоянном на ) 4 пряжении V=9 В/см в течение 1,5 ч, После визуализации зон, оставшихся в геле и перенесенных на нитроцеллю— лозный фильтр, оказывается, что эффективность переноса по предлагаемому способу выше, чем по известному способу (в 2-4 раза — по оставшемуся в геле белку), при этом не происходит разогрева геля, т,е. нет непроизводительных расходов энергии,