Способ определения чувствительности организма к глюкокортикоидам при гломерулонефрите у детей

 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для определения эффективности глюкокортикоидной терапии у нефрологических больных. Целью изобретения является повышение точности и упрощение определения чувствительности индивидуума к глюкокортикоидам при гломерулонефрите. Способ включает обработку лимфоцитов больного IN VITRO различными концентрациями глюкокортикоида с последующей оценкой специфического связывания гормона с лимфоцитами, о котором судят по перераспределению под влиянием гормона IN VITRO известных субпопуляций лимфоцитов теофиллин-чувствительной и теофиллин-(ТФ)-резистетной. При увеличении ТФ-чувствительной субпопуляции лимфоцитов по сравнению с контролем (без обработки глюкокортикоидом) констатируют чувствительность индивидуума к глюкокортикоидам, а при отсутствии нарастания ТФ-чувствительной субпопуляции лимфоцитов констатируют резистентность индивидуума к гормону. Положительный эффект способа состоит в повышении точности определения чувствительности к глюкокортикоидам, которая доказывается последующей гормональной терапией, и упрощении основных этапов выполнения способа.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

PECllYEi flHH

А1 (19I SU all (51) 5 G 01 N 33/53

3Г Е 1!- ..13! .". и e.

ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТЕНИ

И ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

11РИ ГННТ СССР (21 ) .4237500/28-1 4 (Ы) 27. 04. 87 (46) 07.01,90. Бюл. У 1 (71 ) Горьковский медицинский институт им. С.М.Кирова и Московский научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии (72) И,Г.Шиленок, Д.В.Стефани и И.Х.Бородинова (53) 615. 375 (088 .8) (56) Архив патологии, 1984, т. 16, Р 6, с. 21-26. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОРГАНИЗМА К ГЛЮКОКОРТИКО ИДАМ

ПРИ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТЕ У ДЕТЕЙ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для определения эффективности глюкокорти-, коидной терапии у нефрологических больных. Белью изобретения является повышение точности и упрощение определения чувствительности индивидуума

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для определения эффективности глюкокортикоидной терапии у нефрологических боль— ных, Белью изобретения является повышение точности и упрощение определения чувствительности индивидуума к глюкокортикоидам при гломерулонефрите.

2 к глюкокортикоидам при гломерулонефрите ° Способ включает обработку лимфа цитов больного in vitro различными конпентрациями глюкокортикоида с последующей оценкой специфического связывания гормона с лимфоцитами, о котором судят по перераспределению под влиянием гормона in vitro известных субпопуляций лимфоцитов теофиллинчувствительной и теофиллин-(ТФ) -реэистетной. При увеличении ТФ-чувствительной субпопуляции лимфоцитов по сравнению с контролем (беэ обработки глюкокортикоидом) констатируют чувствительность индивидуума к глюкокортикоидам, а при отсутствии нарастания ТФ-чувствительной субпопуляции лимфоцитов констатируют реэистентно с ть индивидуума к го рмону, Положи» тельный эффект способа состоит в повышении точности определения чувствительности я. глюкокортикоидам, которая доказывается последующей гормональной терапией, и упрощении основных, этапов выполнения способа.

Способ осуществляется путем оценки перераспределения под влиянием глюкокортикоидного гормона (преднизолона) in vitro субпопуляцией лимфоцитов крови больного, чувствительных и резистентных к алкалоиду теофиллину (ТФ) . При этом увеличение ТФчувствительной субпопуляции лимфоцитов по сравнению с контролем (беэ обработки лимфоцитов глюкокортикоидом) 3 1534403 4 свидетельствует о чувствительности пациента к гормону, т.е. позволяет предположить эффективность гхпококортнкоидной терапии, а отсутствие изме5 нений количественного состава ТФ-чувствительной субггопуляггии лимфоцитон . свидетельствует о резистентности индивидуума к глюкокортикоидам.

11 p и м е р. Кровь в количестве

3 мл берут натощак из локтевой вены в сбалансированный солевой раствор (3 мл) с гепарином (25 ед./мл), центридугируют 20 мин при 3000 об/мин и

20 С; дважды отмывают по 15 мин при

1500 об/мин в среде 199, после чего подсчитывают концентрацию клеток н

1 мл и доводят ее до 2 10 н 1 мл

6 .средой 199. В 6 пробирок добавляют по О, 1 мл лимфоцитон и О, 1 мл растно — 20 ра преднизолона в разных концентрациях. Расчет дозы преднизолона осу-! цествляют исходя из возможно-создаваемых концентраций его н крови при

1лспользонании терапевтических доз. 25

Для расчета был взят произвольный нес (30 кг) . Учитывая, что кровь составляет . 877, веса тела, объем (масса) ее будет равен 2,4 л. 457. составляет клеточные элементы и 557. плазма, сле- 30 довательно объем плазмы ранен 1,3 л.

Исходя из дозы предниэолона 1 мг/кг

его количество при весе 30 кг равно !

О мг. В 1,3 л плазмы будет 0,03 r преднизолона (0,030:1300), в мл б 5

23 IO, в 0,1 мл 2 10 преднизолон а . Готовят следующие ра знедения предниэолона в мл 0,97.-ного раствора NaC1:

1 1 10 40

2 Z.!0

3 3 10

4 4 1О

5 5 !0

6 . 610

После 45-минутной инкубации при

37 C лимфоциты отмывают средой 199, ресуспензируют, и добавляют 0,1 мл

5 мМ раствора ТФ. Инкубируют ч при

37о С, дважды отмывают средой 199, затем ресуспензируют, добавляют

О, 1 мл эритроцитон барана, инкубируют 1 0 мин при 37 С, центрифугируют

5 мин при 1000 об/мин, затем остан0 ляют на 1 ч при 4 С, после чего фик— си!руют 0,03 мл глютарового альдегида

26 мин, добавляют избыток дистиллированной воды, центрифугируют 10 мин пргл 1000 об/мин и делают мазки. Число розеток подсчитывают н мазках после фиксации в метилоном спирте и окраски по Браше. 3а розетку принимают лимфоцит, присоединивший 3 и более эритроцитов барана. Результаты выражают в процентах.

Если предварительная обработка лимфоцитов преднизолоном in vitro приводит к уменьшению ТФ-резистентной субпопуляции с соответствующим возрастанием ТФ-чувствительной по сравнению с контролем (без обработки преднизолоном), констатируют чувствительность пациента к глюкокортикоидам. При отсутствии изменений соотношения ТФ-резистентной и ТФ-чувствительной субпопуляций констатируют резистентность к глюкокортикоидной терапии.

Положительный эффект способа состоит в повышении точности определения чувствительности пацггента к глюкокортикоидной терапии, о чем можно судить только после проведенного курса лечения. Кроме того, предлагаемый способ за счет использования функционального подхода при оценке действия гормона на лимфоциты (путем регистрации перераспределения ТФ-резистентной и ТФ-чу гствительной субпопуляций лимфоцитон) значительно проще в исполнении и сравнении с известным.

Фо рмула изобретения

Способ определения чувствительности организма .к глюкокортикоидам при гломерулонефрите у детей, включающий обработку лимфоцитов больного in vitro различными концентрациями глюкокортикоида с последующей оценкой изменения специфического связывания гормона с лимфоцитами по сравнению с контролем, не содержащим глюкокортикоида, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, оценку связывания гормона с лимфоцитами проводят путем регистрации перераспределения под влиянием гормона субпопуляций лимфоцитов чувствительных и резистентных к теофиллину и при увеличении теофиллинчувствительной субпопу ляции лимфоцитов определяют чувствительность индивидуума к глюкокортикоидам, а при отсутствии нарастания теофиллинчунствительной субпопуляции лимфоцитов определяют реэистентность индивидуума к глюкокортико идам.