Способ получения простагландинов

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения простагландинов. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта, а также дополнительное извлечение целевого продукта из биомассы. Для осуществления способа штамм Fusarium sambucinum 2682 ВКМ N F-305D выращивают в питательной среде, содержащей, г/л: мелассу 20-30, сахарозу 20-25, аммоний азотнокислый 3-4, калий фосфорнокислый однозамещенный 2-5, воду 1,0 л. Выращивание ведут при 26°С в условиях аэрации и перемешивания. Полученную культуральную жидкость разделяют. Биомассу экстрагируют эталоном, а для более полного извлечения целевого продукта экстракцию проводят многократно. Нативный раствор экстрагируют хлороформом. Экстракты концентрируют и объединяют. Выход целевого продукта 18 - 25 мг/л культуральной жидкости. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения простагландинов. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта, а также дополнительное извлечение целевого продукта из биомассы. Для осуществления способа используют питательную среду, содержащую, г/л: мелассу 2,0-3,0; сахарозу 2,0-2,5; аммоний азотнокислый 0,3-0,4; калий фосфорнокислый однозамещенный 0,2-0,5 и вода 1,0 л. Стерилизуют 40 мин при 118-120^оС в автоклаве. П р и м е р 1. Штамм Fusarium sambucinum 2682 (ВКМ N F-305D) выращивают в ферментере вместимостью 100 л на среде следующего состава, г/л: меласса 20, сахароза 20; NH₄NO₃ 3; KH₂PO₄ 2 и вода 1,0 л. Объем среды 80 л, температура выращивания 26^оС, режим аэрации 1,0 об/об в 1 мин, длительность ферментации 40 ч. Затем к культуральной жидкости добавляют этанол в отношении 1: 6 по объему, выдерживают 12 ч при комнатной температуре, центрифугируют, надосадочную жидкость упаривают в вакууме при 40^оС до 1/7 объема, подкисляют 2 н HCl до рН 4,0 и трижды экстрагируют хлороформом (1:4). Объединенные хлороформные экстракты промывают водой и высушивают в вакууме при 40^оС. Получают маслянистую жидкость коричневого цвета с выходом 18 мг/л культуральной жидкости. Полученный продукт представляет собой смесь простагландинов Е₂ и Е₂. Идентификацию проводят методом УФ-спектрографии, ГЖХ и хромата масс-спектрометрии. П р и м е р 2.Ферментацию проводят по примеру 1. Затем культуральную жидкость фильтруют. Влажную биомассу экстрагируют этиловым спиртом в отношении 1: 2 (масса/объем), выдерживая смесь при комнатной температуре 48 ч. Операцию повторяют трижды. Эталонные экстракты упаривают до 1/7 объема. Полученные концентраты подкисляют - 2 н HCl до рН 4,0-4,2 и трижды экстрагируют хлороформом в отношении 1:3. Фильтрат культуральной жидкости подкисляют 2 н HCl до рН 4,0 и трижды экстрагируют хлороформом (1:14). Все хлороформные экстракты объединяют промывают водой и высушивают в вакууме. Выход простагландинов составляет 25 мг/л культуральной жидкости. П р и м е р 3. Ферментацию проводят на среде следующего состава, г/л: меласса 30; сахароза 25; NH₄NO₃ 4; KH₂PO₄ 5; вода 1,0 л. Условия выращивания и выделение продукта по примеру 2. Выход простагландинов 22 мг/л культуральной жидкости. П р и м е р 4. Процесс ведут по примеру 2, используя среду следующего состава, г/л: меласса 25; сахароза 22,9; NH₄PO₃ 3,5; KH₂PO₄3,0 и вода 1,0 л. Выход простагландинов 25 мг/л культуральной жидкости. Использование способа позволяет повысить выход простагландинов (по известному способу выход 1,8-7,0 мг/л среды).

Формула изобретения

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОСТАГЛАНДИНОВ путем выращивания штамма Fusarium sambucinum ВКМ N F-305D в жидкой питательной среде, содержащей мелассу, источник углерода, аммоний азотнокислый, калий фосфорнокислый однозамещенный и воду, в условиях аэрации и перемешивания с последующей экстракцией целевого продукта этанолом и хлороформом и его концентрированием, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, выращивание штамма осуществляют в питательной среде, содержащей в качестве источника углерода сахарозу при следующем количественном соотношении компонентов, г/л: Меласса - 20-30 Аммоний азотнокислый - 3-4 Калий фосфорнокислый однозамещенный - 2-5 Вода - 1,0 л полученную культуральную жидкость перед экстракцией разделяют, биомассу экстрагируют этанолом, а нативный раствор экстрагируют хлороформом, и после концентрирования полученные концентраты объединяют. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что, с целью дополнительного извлечения целевого продукта из биомассы, экстракцию этанолом осуществляют многократно.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 21.06.2000

Номер и год публикации бюллетеня: 6-2002

Извещение опубликовано: 27.02.2002        

---