Питательная среда для культивирования fusаriuм grамinеаruм- продуцента галактозооксидазы

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно касается составов питательных сред для культивирования FUSARIUM GRAMINEARUM ИМБ F N 1060 - процудента галактозооксидазы. Цель изобретения - повышение выхода галактозооксидазы. В питательную среду дополнительно вводят гидролизат отходов производства соевых бобов после выделения уреазы в количестве 4,0-8,0 г/л среды при следующем соотношении компонентов, г/л : галактоза 10,0-20,0

мочевина 9,0-11,0

дрожжевой экстракт 2,0-3,0

калий фосфорнокислый однозамещенный 5,0-6,0

натрий фосфорнокислый двузамещенный 7,5-8,5

магний сернокислый 0,2-0,3

марганец сернокислый 0,02-0,03

медь сернокислая 0,05-0,06

деминерализованная вода до 1 л, PH 6,9-7,1. При этом достигаются следующие характеристики по отношению к галактозооксидазе : активность 2,5-2,4 ед/мл культуральной жидкости, выход 2500-2400 ед/л.

СООЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

А1

09) (111 (51)5 С 12 И 1/14//(С 12 N 1/14, С 12 К 1:77) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕ ГЕНИЯМ И ОТНРЬЩЩм

ПРИ ГКНТ СССР,(21) 4482256/30-13 . (22) 27.06,88 (46) 15.10.90. Бюл. й- 38 (71) Научно-производственное объединение "Биолар" (72) 3.А.Виестуре, Э.А.Калниня, Т,Ф.Фридман, И.И.Каурова, В.Э,Шкинке и Т.Т.Буглова (53) 577.15(088.8) (56} Микробиология и фитотерапня.

1983, т. 1-7, У 2, с. 122-1 27..

Авторское свидетельство СССР

N- 1337403, кл. С 12 N 1/14, 1986.

Лабораторная методика производ= ства культуральной жидкости Fusarium graminearum ИИВ F М- 1060 с галактозооксидазной активностью, Утв. 30 ° 04.86, НПО "Биолар". (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ FUSARIUM СВАМТНЕАВШ (57) Изобретение относится к микробиологической промьппленности, а именно касается составов питательИзобретение относится к микробиологической и химической промьппленности, касается состава питательной среды для культивирования Fusarium

draminearum HMB F Р 1060 — продуцента галактоэооксидазы (D-галактоза кислород-оксипоредуктаза 1.1.3.9) °

Целью изобретения является повышение выхода галактоэооксидазы.

Питательная среда для культивирования штамма, включающая источники аммннного азота, углеводов, витаминов и минеральные соли, содержит в качестве индуктора накопления галакных сред для. культивирования Fusarium graminearum ИМБ Р Р 1060 - продуцента галактоэооксидазы. Цель изобретения — повышение выхода галактозооксидазы. В питательную среду дополнительно вводят гидролиэат отходов производства соевых бобов после выделения уреазы в количестве

4,0"8,0 г/л среды при следующем соотношении компонентов, г/л: галактоза 10,0-20,0;. мочевина 9.,0-11,0.; дрожжевой экстракт 2, 0-3,0; калий фосфорнокислый одноэамещенный 5,06,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный ",5-8,5; магний сернокислый

0,2-0,3; марганец сернокислый 0,02О, 03; медь с ер нок ислая О, 05-0, 06; деминералиэованная вода до 1 л, рН 6,9-7,1. При этом достигаются следующие характеристики по отношению к галактозооксидазе: активность 2, 5 2, 4 ед. /мл куль тураль ной жидкости, выход 2500-2400 ед./л. тозооксидазной активности гидролизат соевых бобов после выделения уреазы.

Соевый гидролизат готовят сле дующим образом.

Размолотые соевые бобы после экстрагирования 707.-ным этиловым спиртом для выделения уреаэы в количестве 100 г заливают 1 л деминералнзованной воды с 10 мл концентрированной фосфорной кислоты и выдерживают о в течение 4 ч при t = 55-60 С при постоянном перемешивании.

1599431

4,0

До1л

6,9

Оживление штамма Fusarium grami"

nearum ИМВ F Ф 1060 осуществляют на среде указанного состава в качалочных колбах. Инкубируют в термокаПосле охлаждения гидролизат фильт руют и нейтрализуют ЗОЖ-.ным КОН до рН 6,9-7,1 и лиофильно высушивают.

Использование лиофильновысушенного гидролизата соевых бобов в питательной среде способствует не только повышению выхода биомассы и увеличению активности галактозооксидазы в культуральной жидкости Fusarium

qraminearum ИМВ F N - 1060, но и сниЖает пигментацию культуральной жидкости

Гидролизат отходов соевых бобов содержит ряд аминокислот в количестse О, 6 — 1, 2 мг/г препарата, относительно большое количество аргинина, аспарагина, глютамина и может слуЖить дополнительным источником амминного азота и благоприятствовать росту микробиальных клеток . Использование амминного азота в дополнительном его

Источнике (гидролизате) приводит к увеличению синтеза белков, а значит, и ферментов, в том числе галактозо-. оксидазы.

Одновременное введение с гидролизатом фосфатов калия способствует стабилизации микробиальной среды (играют роль буфера), кроме того, клетка использует их как дополнительный источник фосфора и калия.

Культуральная жидкость при применении гидролизатов соевых бобов после. выделения уреазы имеет гораздо мень- шую пигментацию, что улучшает качество целевого продукта.

II р и м е р 1. Питательная среда содержит, г/л:

Галактоза 10,0

Мочевина 9,0

Дрожжевой экстракт 2,0

Гидролизат отходов соевых бобов

Калий фосфорнокислый однозамещенный 5,0

Натрий фосфорнокислый двузамещенный 7,3

Магний сернокислый 0,2

Марганец сернокислый О, 02

Медь сернокислая 0,05

Вода деминерализованная рН

ЗО

0,025

0,05

8,5 мере при 28 С в течение 72 ч на качалк е при 240 об. /мин.

В ферментационные колбы (среда та же) переносят посевной материал из расчета 6-87.. Инкубирование ведется при 28 С на качалке при ь

240 об./мин в течение 72-80 ч, до достижения в культуральной жидкости

1ð 2,4 ед./мл галактозооксидазной активности (СФЛ-540 нм). Мицелий предварительно отфильтровывается.

Выход: активность 2,50 ед./мл культуральной среды, Из примера 1 видно, что добавле" ние гидролизата отходов соевых бобов в качестве 4,0 г/л приводит к увеличению активности фермента.

Выделение фермента осуществляют язв ес т ныл сп ос о бом .

Пример 2, Питательная среда. содержит, г/л:

Галактоза 15,0

Моч евина 10,0

Дрожжевой экстракт 2,5

Гидролизат отходов соевых бобов 6,0

Калий фосфорнокислый однозамещенный 5,5

Натрий фосфорнокислый двузамещенный 8,0

Магний сернокислый 0,025

Марганец сернокислый

Медь сернокислая

Вода деминерализованная До1л рН 7,0

Выращивание и адаптацию культу4р ры, инокуляцию посевного материала, ферментацию культуры проводят аналогично примеру 1..

Выход: активность 2,45 ед./мл культуральной жидкости.

45 Из примера 2 видно что добавление гидролизата соевых бобов в количестве 6,0 г/л приводит к повышению активности галактозооксидазы.

Пример 3. Питательная среда содержит, г/л:

Галактоза 20,0

Моч евина 11,0

Дрожжевой экстракт 3,0

Гидролиэат отходов соевых бобов 8,0

Калий фосфорнокислый однозамещенный 6,0

Натрий фосфорнокислый двузамещенный

1599431

Формула из об ретения

Питательная среда для культивирования Ризагium graminearum ИМВ

F У 1060 " продуцента галактозооксидазы, содержащая галактозу, мочевину, дрожжевой экстракт, однозамещенный фосфат калия, двузамещенный фосфат натрия, сернакислый магний) сернокислый марганец, сернокислую медь и деминерализованную воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, .что, с целью, повышения выхода галактозооксидазы, питательная среда дополнительно со15 держит гидролизат соевых бобов после выделения уреазы при следующем соотношении компонентов, г/л:

Галактоза 10,0-20) 0

Моч евина 9,0-11,0

Дрожжевой экстракт 2,0-3,0

Гидролизат соевых

-бобов после выделения уреазы 4,0-8,0

Однозамещеиный фосфат калия 5,0-6,0

Двузамещенный фосфат натрия 7,5-8,5 .Сернокислый магний 0,2-0„3

Сернокислый марганец 0,02-0,03

30 Сернокислая медь . 0,05-0,06

Деминерализованная вода

Магний сернокислый

Марганец сернокислый

Медь сернокислая

Вода деминерализованная рН

0,3

0,03

0,06

До1л

7,1

Выращивание, адаптацию культуры, инокуляцию посевного материала, фер ментацию культуры проводили аналогично примеру 1.

Выход: активность 2,40 ед./мл культуральной жидкости.

Как видно из примера 3, добавление гидролизата отходов соевых бобов в количестве 8,0 г/л приводит к повышению активности галактозооксидазы.

Технико-экономический эффект изобретения заключается в повышении выхода единиц фермента 2500 ед./л и ферментной активности до 2,5 ед./мл, а также в снижении пигментации культуральной жидкости, что в свою очередь облегчает дальнейшее выделение и очистку целевого продукта, До 1

Составитель А.Карякин

Техред М.Дидык Корректор С. 1Певкун

Редактор Л. Веселовская

Заказ 3122 Тираж 494 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101