Способ распознавания генотипов риса

 

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в сельском хозяйстве в селекционно-генетических исследованиях. Целью изобретения является упрощение анализа, повышение его точности и надежности. Способ состоит в том, что предлагают новые режимы экстракции запасных белков, изменяют процесс получения электрофореграмм и осуществляют их анализ, группируя компоненты в субфракции относительного реперного компонента В<SB POS="POST">50</SB>, после чего составляют белковые формулы, специфические для каждого сортообразца. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4632382/30-13 (22) 03.12.88 (46) 07.11.90. Бюл. ¹ 41 (71) Казахский научно-исследовательский институт земледелия им. В.P.Âèëüÿìñà (72) Ю.В.Перуанский и И.M.Ñàâè÷ (53) 631.522:58,083.5 (088.8) (56) Савич И.M., Перуанский Ю.В. Об идентификации сортообразцов риса по электрофоретическим спектрам проламина, Вестник с/х науки Казахстана, 1979, N 6, (54) СПОСОБ РАСПОЗНАВАНИЯ ГЕНОТИПОВ РИСА

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к селекции и семеноводству, и может быть использовано научными учреждениями при изучении коллекции исходного материала, создания и паспортизации сортов риса.

Целью изобретения является упрощение анализа и повышение его точности и надежности.

Способ состоит в том, что проламины и определенная часть глютелинов (запасных белков эндосперма зерна) риса извлекается спиртовой мочевиной при нагревании, после электрофорез- е полиакриламидном геле выявляются трихлоруксусной кислотой белковые компоненты, определяют относительную электрофоретическую подвижность (ОЭП) каждого компонента по реперному компоненту ВБо и на основе спектра составляют белковую формулу сорта (генотипа) риса, Пример 1. Зерна сортообразца риса

Аист В размалывают до тонкого порошка, Отвешивают 500 мг муки, заливают ее 3 мл

„, Я „„1604274 А1 (si>s А 01 Н 1/08, G 01 N 33/68 (57) Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в сельском хозяйстве в селекционно-генетических исследованиях. Целью изобретения является упрощение анализа, повышение его точности и надежности. Способ состоит в том, что предлагают новые режимы экстракции запасных белков, изменяют процесс получения электрофореграмм и осуществляют их анализ, группируя компоненты в субфракции относительного реперного компонента ВБо, после чего составляют белковые формулы, специфические для каждого сор- тообразцэ. 2 табл.

О70%-ного этанола, содержащего 2 M мочевины, перемешивают и инкубируют смесь

1/2 ч при комнатной температуре, а затем в течение 1 ч при 60 С. После центрифугирования при 10 000 g в течение 15 мин надосадочную жидкость собирают и упаривают до

1/8 — 1/10 объема, добавляют сахарозу до концентрации 20% и используют для электрофореза.

Полиакриламидный гель, содержащий

7,5% акриламидэ, 0,3 M уксусной кислоты и

8 M мочевины, полимеризуют в стеклянных трубках размером 110х5 мм с использованием в качестве катализирующей системы; сернокислого закисного железа, аскорбиновой кислоты и пероксида водорода. На трубку наносят 50 — 100 мкл раствора белка и электрофорез ведут первые 30 мин при силе тока 2 мА на трубку, а затем 1 ч при сиЛе тока 4 мА на трубку. После завершения электрофореза гели извлекают из трубки и помещают в пробирки с 10%-ным раствором трихлоруксусной кислоты. Через 30 мин появляются белые полосы белковых компо1604274

Таблица1

Сб ак ии

Образец

40 . 50

40 50

40 50

12

12

Аист В

Аист А (ВС5)

Аист А (ВС6)

Прикубанский В

Прикубанский А (ВС5)

Прикубанский А(ВСв) Пластик В

ПластикА(ВСв)

ВНИИР1390В

ВНИИР 1390

А (ВСБ)

ВНИИР 1390

А ВС6

16

16

19;

22

58

58

21

40 50

58

50.40

55

43

58

58

58

11 12

40 50

40 50

58

58

55 нентов, замеряют ОЭП их и составляют белковые формулы. Спектр делится на ясно различимые 4 субфракции: А (ОЭП 0- 38); В (3959); С(60 — 76) и D (77 — 100).

Исследования также показали, что при концентрации мочевины ниже 1,5 М и этанола ниже 65 число компонентов снижается из-за ухудшения извлечения запасного белка и соответственно уменьшается разрешающая способность способа (так для сорта

Аист В остаются только наиболее интенсивные компоненты субфракции В). При использовании этанола в концентрации выше .,75 и мочевины выше 2,5 М наблюдается частичная клейстеризация крахмала эндосперма, что впоследствии препятствует эффективному концентрированию белкового раствора. В связи с этим белковые компоненты теряют четкость, а наиболее близкорасположенные сливаются в одна Целое, нарушая электрофоретическую картину.

При этом их количество также снижается. В этой связи признано целесообразным использовать мочевину в концентрации 1,5—

2,5 М в растворе этанола 65 — 75 -ной концентрации (табл.2).

Пример ы 2 — 11 осуществляют аналогично, но в исследования вовлечены другие сортообразцы. Результаты представлены в табл,1.

Предлагаемый способ надежен, объективен, экспрессен, позволяет распознавать и паспортизировать близкие по происхождению генотипы риса, закладывать в память

ЭВМ белковые формулы этих генотипов.

5 Формула изобретения

Способ распознавания генотипов риса, включающий экстракцию из зерна запасных белков, их электрофоретическое

10 разделение и анализ полученных электрофореграмм, отличающийся тем, что, с целью упрощения анализа и повышения его точности и надежности, экстракцию белков проводят 1,5-2,5 М мочевиной, раство15 ренной в 65 — 75 -ном этаноле при нагревании. электрофоретическое разделение белков осуществляют в цилиндрических гелях, при этом в качестве каталитической системы полимеризации геля используют

20 закисное сернокислое железо, аскорбиновую кислоту и пероксид водорода, электрофореграммы получают путем фиксации белковых компонентов трихлоруксусной кислотой без дополнительной окраски и в

25 результате анализа электрофореграмм проводят распознавание генотипов, определяя относительную электрофоретическую подвижность каждого компонента относител ьно реперного Bso, группируя их в

30 субфракции в соответствии с их мобильностью, с последующим составлением специфических для генотипов белковых формул.

1604274

Образец б ак ии

95

95

95

62 65

85

100 f00

72 75

69 72

62

80

72 75

100

80, 85

77

85

90

80

Аист В

Аист А. (ВСь)

Аист А (BCb)

Прикубанский В

Прикубанский А (BC5)

Прикубанский А (ВСе)

Пластик В

Пастик А (В Cs)

ВНИИР

1390. В

ВНИИР

1390 А (ВС )

ВНИИР

1390 А

ВСв

62 66 69 75

62 65 72 75

62 65 69 75

62 65 69 75

60 62 65 70

62 65

62 65 69

62 65 69

Продолжение табл.1

1604274

Е

Q Д LA LA LA LA W. . cO <О П В П LA

< » CV СЧ i-.i» СЧ CV - СЧ N

О

zo

CO

++++ I 1 I 1 I 1 L !

++++ I +.I +11!1

++++ I ! 1 1 1

++++++++++++

++++++++++++

++++++++++++

++++++++++++

++++++++++++

++++++++++ 1+

+++++++ + I +++

++++++ I 1 1 +++

+ + + + 1 + 1 I I I I 1

++++! I I I 11 I I

++++ 1 I ++ I I I I

++++ 1 I I I I I

++++ 1 ! I ! !

L0 Ж LA LD LA LA LA М1 ct (D cf (О

Ю 1 (О 1 <ОЛ(О 1 <О 1. Ю