Способ получения 1,2-диацил-s @ -глицерина

 

Изобретение относится к биотехнологии , конкретно к способу получения 1,2-диацил-Зп-глицерина из фосфатидилхолина (ФХ) природного происхождения. Цель изобретения - упрощение процесса. Способ получения 1,2-диацил-5п-глицерина включает ферментативное расщепление фосфатидилхолина фосфолипазой С из Bacillus cereus ВКПМ В-2492, иммобилизованной на силикагеле. Процесс ведут в этаноле при 35-38°С и концентрации ФХ 7-12 % с последующим выделением целевого продукта с сорбента промывкой хлороформом. 1 з.п.флы, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я) С 12 Р 7/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4680101/13 (22) 30.03.89 (46) 30.06.91, Бюл. Nâ 24 (71) Московский институт тонкой химической технологии, Научно-п роизводственное объединение "Фермент" Всесоюзного научно-исследовательского института прикладной энзимологии и Харьковское предприятие бактерийных препаратов (72) Л,Б. Грабаускайте, Г.M. Сорокоумова, Е.Н. Звонкова, В.-О.В. Кулене, В.И, Швец и IO.M. Краснопольский (53) 577.125 (088.8) (56) Евстигнеева Р,П., Звонкова Е.Н„Серебреникова Г.А., Швец В,И. Химия липидов.

M. Химия, 1983, с. 17 — 24, Кейтс М. Техника липидологии. M.: Мир, 1975, с. 284.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения

1,2-диацил-SrI-глицерина (ДАГ) из фосфатидилхолина (ФХ) природного происхождения.

Цель изобретения — упрощение способа получения ДАГ.

Способ заключается в обработке фосфатидилхолина фосфолипазой С из Вас!Поз

cereus ВКПМ B-2492, иммобилизованной на силикагеле, в среде этанола с последующим выделением целевого продукта промывкой силикагеля хлороформом. Способ обеспечивает получение 1,2-диацил-$п-глицерина почти с количественным выходом.

Получение ДАГ по предлагаемому способу осуществляется следующим обра.зом.

» . Ж 1659483 А1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1,2-ДИАЦИЛSN-ГЛИЦЕРИНА (57) Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к способу получения 1,2-диацил-Sn-глицерина из фосфатидилхолина (ФХ) природного происхождения. Цель изобретения — упрощение процесса. Способ получения 1,2-диацил-Sn-глицерина включает ферментативное расщепление фосфатидилхолина фосфолипазой С из Baciilus

cereus ВКПМ В-2492, иммобилизованной на силикагеле. Процесс ведут в этаноле при

35 — 38 С и концентрации ФХ 7-12% с последующим выделением целевого продукта с сорбента промывкой хлороформом. 1 з.п.флы, 1 табл.

СВ, - ОСОК, 1 сн — осов, в,соо-сн о (фасфалиаага С)

l 1 н,соо-св +

О!1 Π— Р— о(сн<) к (снз)у

I о II

+ВО-P 0(CII ) N

pacmamudonronu

О где Й1, Вг — остатки жирных кислот, Фосфолипазу С инкубируют в вероналовом буфере с силикагелем. После отделения от буфера иммобилизованный фермент переносят в раствор фосфатидилхолина в этаноле (96%), Образовавшийся ДАГ выделяют путем промывки силикагеля хлороформом, Выход целевого продукта 92-94%.

Пример. В работе использованы

10%-ный яичный фосфатидилхолин, выпускаемый Харьковским предприятием по производству бактерийных препаратов, препарат фосфолипазы С (фосфатидилхо1659483 лин-холинфосфогидролазы, К,Ф,3.1.4.3) из

Bacillus cereus ВКПМ В-2492 в 0,01 M вероналовом буфере, содержащем 0,001 M

ZnClz, выпускаемый НПО "Фермент" (8ильнюс) с удельной активностью 280 ед/мг.

1 мл препарата фосфолипаэы С (120 ед) инкубируют с 1 r силикагеля L 40/100 (Chemafol ЧССР) в течение 1 сут при 4 С.

Через 1 сут на силикагеле связывается до

35 g, активного фермента. По ле отделения буфера полученную иммобилизованную

, ФЛС смешивают с 0 5 мл раствора 56 мг Ф) в 96 этаноле и инкубируют 3 ч при 37 С, После этого всю реакционную смесь переносят на стеклянный фильтр N 4 (пор. 16) и удаляют этанол, содержащий фосфохолин, Силикагель на фильтре промывают хлороформом (Зх5 мл), Соединенные промывки экстрагируют водой для удаления остатков фосфохолина. Полученный раствор ДАГ в хлороформе упаривают и досушивают при

30 С в вакууме, Получено 42 мг ДАГ (93 g), Содержание фосфора в продукте реакции

- 0,4 мкг/мг, что соответствует содержанию

ФХ не более 0,8%. Rf0,,65 на силуфоле UV254 в системе петролейный эфир — эфир 1:2.

Силикагель с фильтра, содержащий иммобилизованную ФЛС, предварительно. промытый этанолом; водой и вероналовым буфером, пригоден для повторного использования.

В таблице представлены примеры получения ДАГ по предлагаемому способу при различной концентрации ФХ и температуре процесса.

Предлагаемый метод является новым способом получения ДАГ из наиболее доступного природного фосфоглицерида-фосфатидилхолина. Благодаря обнаруженной высокой каталитической активности, иммобилизованной на силикагеле фосфолипазы

С иэ В,cereus, проявляемой в этаноле, удалось получить с высоким (почти количест5 венным) выходом оптически активный ДАГ, При применении синтетических приемов выход оптически активного ДАГ составляет

10 — 35 6, Применение иммобилизованной ФЛС в

10 среде спирта позволяет получить нужное вещество в одну стадию и существенно упростить его выделение, используя минимальное количество растворителей, Используемые реагенты — фосфатидилхо15 лин и фермент фосфолипаза С из B. cereus — являются легкодоступными и производятся в СССР.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет значительно упростить и удеше20 вить метод получения оптически активного

ДАГ, Формула изобретения

1. Способ получения 1,2-диацил-Sn-гли25 церина путем ферментативного расщепления фосфатидилхолина фосфолипазой С с последующим выделением целевого продукта,отл ича ющийсятем,что,с целью упрощения процесса, используют фосфати30 дилхолин фосфолипазу С из Bacillus cereus

ВКПМ В-2492, иммобилизованную на силикагеле, и процесс ведут в этаноле при температуре 35 — 38 С и концентрации фосфатидилхолина 7 — 12, а выделение це35 левого продукта осуществляют промывкой сорбента хлороформом.

2, Способ по п.1, отn и ч а ющ и й.с я тем, что используют 10 Д-ный раствор фос-. фатидилхолина.