Способ определения агглютиногенов в волосах человека

 

Изобретение относится к области медицины , биологии и может найти применение в судебной медицине и антропологии при определении антигенов в тканях эпидермального и костного происхождений, в частности в волосах. Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа Это достигается тем, что исследуемый объект смешивают с индифферентным сорбентом в соотношении 1 3-110 и помещают в хроматографическое устройство В нем объект непрерывно омывают изосыворотками в течение 6-8 ч Затем по наличию агглютинации эритроцитов определяют принадлежность агглютиногенов той или иной группе лиц.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si>s 6 01 N 33/538

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ. (21) 4627526/14 (22) 29.12.88 (46) 30.06,91. Бюл. N. 24 (71) Ташкентский государственный медицинский институт (72) Д.Д,Джалалов и С.Н.Ибадуллаев (53) 615.373 (088.8) (56) Дианова Т,Н, Судебно-медицинская экспертиза, 1974, М 1, с.33-35. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АГГЛЮТИНОГЕНОВ В ВОЛОСАХ ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к области медицины, биологии и может найти применение

Изобретение относится к медицине, биологии и может найти применение в антропологии при определении антигенов в тканях эпидермального и костного происхождений, Цель изобретения — повышение точности и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Для проведения аффинной хроматографии используется устройство. Устройство состоит из хроматографической пластины, выполненной из оргстекла, на одной стороне которой выполнены четыре паза и четыре гнезда. На верхней боковой стороне хроматографической пластины выполнены отверстия капиллярных каналов, которые проходят через толщу стекла и соединяются с гнездами. Капиллярный канал соединяет пазы с гнездами.

Волосы измельчают в фарфоровой ступке вместе с индифферентным.сорбентом

„„5U 1659857 А1 в судебной медицине и антропологии при определении антигенов в тканях эпидермального и костного происхождений, в частности в волосах. Цель изобретения— повышение точности и ускорение способа.

Это достигается тем. что исследуемый объ. ект смешивают с индифферентным сорбентом в соотношении 1:3-1:10 и помещают в хроматографическое устройство. В нем объект непрерывно омывают изосыворотками в течение 6 — 8 ч. Затем по наличию агглютинации эритроцитов определяют принадлежность агглютиногенов той или иной группе . лиц. (силикагель, окись алюминия и т.п.) до по- рошкообразного состояния, что дает возможность увеличить площадь соприкосновения антигенов волос с антителами сыворотки. Затем эту смесь помещают в два гнезда устройства для исследования одного обьекта. В пазы засыпают сорбент так, чтобы сорбент заполнил капиллярный канал с целью обеспечения непрерывного течения сыворотки, В отверстия капиллярного канала устанавливают пастеровские пипетки, диаметр которых у выхода капилляра составляет 0,2 мм, что обеспечивает непрерывное и замедленное течение сьisoротки. В увеличении диаметра нет необходимости, так как это способствует неоправданному перерасходу сыворотки.

Пастеровские пипетки заполняют цельными изосыворотками альфа и бета в подобранном рабочем разведении, Рабочее разведение для каждой серии сывороток подбирают отдельно. Как правило, эти рабо1659857 чие разведения соответствуют 1;64 при наличии титра сыворотки 1;128 и 1:128 при наличии сыворотки с титром 1:256 и т.д.

Одну пастеровскую пипетку заполняют альфа сывороткой, другую -- бета сывороткой.

Сыворотки стекают через капилляры, омывая непрерывно исследуемые объекты. Хроматография длится 6-8 ч. По истечении времени исследуемые обьекты переносят в . ;пробирки, куда добавляют по 2 капли физраствора, Затем пробирки с исследуемым материалом помещают в термостат при температуре+56 С на 30 мин, Поток в пробирки закапывают по 2 капли соответствующую

0,3ф -ную взвесь эритроцитов группы А или

В. В пробирку с исследуемым материалом, где пропускали сыворотку альфа, закапывают эритроциты группы А, а в другую — эритроциты группы" В. Затем центрифугируют ! при 1000 об. в 1 мин в течение 4 мин, Результаты учитывают микроскопически, Пример 1. Были взяты волосы у лица

" с А (И) группой крови. Волосы растирали в фарфоровой ступке вместе с силикагелем в соотношении соответственно 1:3. Смесь доводили до порошкообразного состояния.

Эту смесь помещали в два гнезда устройства. В два соответствующих паза засыпали сорбент (силикагель) так, чтобы сорбент заполнил капиллярный канал,В отверстия капиллярного канала установили две пастеровские пипетки, которые заполнили одну сывороткой альфа в рабочем разведе: нии 1:256, другую-бета, в рабочем разведении с физ. раствором также 1:256, Сыворотки брали по 3 мл. Хроматография длилась 6 ч. По истечении времени исследу1 емый материал переносили в пробирки: объект, который омывался сывороткой альфа— в одну пробирку, а объект, который омывался сывороткой бета — в другую пробирку. В пробирки закапывали по 1 капле физраствора и элюироаали в термостате при температуре+56 С 30 мин. Затем элюат перенесли в другие пробирки, чтобы исследуемый объект не мешал при микроскопии, а также при необходимости повторного исследования.

В пробирки с элюатом добавляли по 1 капле

0,3 / ную взвесь стандартных эритроцитов: в ту пробирку, где находился исследуемый материал, через который пропускали сиворотку альфа, добавили эритроциты группы

А, а в другую-эритроциты группы В, Центрифугировали 4 мин при 1000 об. в 1 мин, Затем пробирки встряхивали и содержимое переносили на предметные стекла и микроскопировали. В препарате. куда добавляли эритроциты группы А была явная агглютинация эритроцитов, которая указывает на присутствие агглютиногена А, В препарате, куда добавляли эритроциты группы В агглютанация эритроцитов отсутствовала.

При исследовании волос данной группы в соотношении с силикагелем 1:12 и хрома- .

5 тографированием в течение 6 ч агглютиногены не были обнаружены, Пример 2. Были взяты волосы у лица с В (!11) группой крови. Волосы растирали в фарфоровой ступке вместе с силикагелем в

10 соотношении соответственно 1:7. Смесь доводили до порошкообразного состояния.

Эту смесь помещали в два гнезда устройства. Два соответствующих паза заполняли .силикагелем. В отверстия капиллярного ка15 нала установили две пастеровские пипетки, которые заполнили, одну цельной сывороткой альфа с титром 1:128. предварительно разведя ее до рабочего разведения 1:64, другую пастеровскую пипетку — сывороткой

20 бета с рабочим разведением также 1:64.

Хроматография длилась 8 ч, Затем исследуемые материалы переносили в пробирки, добавляли по 1 капле физраствора и злюировали при температуре +56 С а течение 30

25 мин. Потом элюат переносили в другие пробирки, куда добавляли по 1 капле 0,3 -ной взвеси соответствующих стандартных эритроцитов. Центрифугироаали 4 мин при 1000 об. в 1 мин. Затем пробирки встряхивали и

30 готовили препарат для микроскопирования.

В препарате, где были добавлены эритроциты группы А, агглютинация эритроцитов отсутствовала. В препарате, куда добавляли эритроциты группы В, отмечалась агглюти35 нация эритроцитов, которая указывает на присутствие агглютиногена В.

При исследовании волос от этого же лица а соотношении с силикагелем 1:7 и хроматографировании втечение 12 ч сыворотка

40 иссякла, соответствующий агглютиноген В не был выявлен, хотя имели место единичное склеивание единичных эритроцитов, что можно связать с ресорбцией антител, Пример 3. Волосы rp-ки У„20 лет, с

45 неизвестной группой крови, Волосы растирали в фарфоровой ступке вместе с силикагелем в соотношении соответственно 1:3.

Смесь доводили до порошкообразного состояния. Эту смесь помещали а два гнезда

50 устройства. Даа соответствующих паза засыпали сорбентом (силикагелем) так, чтобы сорбент заполнил капиллярный канал. В отверстия капиллярного канала установили две пастеровские пипетки, которые запол55 нили одну сывороткой альфа в рабочем разведении (с физраствором) 1:128, другую— бета в рабочем разведении 1:64, Сыворотки брались по 3 мл. Хроматография длилась 8 ч. По истечении этого времени исследуемый материал переносили а

1659857

Составитель Г.Крюкова

Тех ред М.Моргентал Корректор О.Ципле

Редактор С.Лисина

Заказ 1839 Тираж417 Подписное.

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 пробирки: объект, который омывался сывороткой альфа — в одну пробирку, а объект, который омывался сывороткой бета — в другую пробирку. В пробирки закапывали по одной капле физраствора и элюировали в термостате при +56 С в течение 30 мин.

Затем элюат перенесли в другие пробирки и в каждую из них в отдельности добавляли по 1 капле 0,3 -ной взвеси стандартных эритроцитов группы А и В. В ту пробирку, где находился исследуемый материал, через который пропустили сыворотку альфа, добавили эритроциты группы А, а в другую— группы В. Пробирки центрифугировали 4 мин при 1000 об. в минуту. Извлекали их из центрифуги, встряхивали и содержимое переносили на предметные стекла и подвергали микроскопическому исследованию. При этом в объекте, куда добавлялись эритроциты группы А агглютинация не наступила, а в объекте, куда добавляли эритроциты группы

В, наступила хорошо выраженная агглютинация. Следовательно, в объекте установлен агглютиноген В, что соответствует третьей группе крови. В последующем, при проверке, у гр-ки У была установлена эта группа крови. . Положительный эффект от использования предлагаемого способа заключается в повышении точности определения принадлежности человеческих волос, что достигается благодаря использованию аффинной хроматографии. Точность определения согласно предлагаемому способу составляет

5 93,4, а согласно прототипу — 56,77. Повышение точности способа обеспечивается путем увеличения площади соприкосновения антигенов исследуемого материала с антителами сыворотки, что достигается благода10 ря разрушению структуры волос путем их измельчения и смешивания с индифферентным сорбентом, а также за счет непрерывного смывания объектов исследования сывороткой, что также ускоряет осуществле15 we способа до 6 — 8 ч (согласно прототипу—

20 ч).

Формула изобретения

Способ определения агглютиногенов в

20 волосах человека путем расщепления их, добавления изосыворотки альфа и бета и выявления агглютиногена в реакции абсорбции элюции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускоре25 ния способа, перед добавлением изосыворотки материал волос смешивают с индиферентным сорбентом в соотношении

1:3-1:10, а воздействие изосывороткой проводят путем хроматографии при непрерыв30 ном их взаимодействии в течение 6-8 ч.