Способ подготовки твердой фазы для гетерогенного иммуноферментного анализа

 

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа подготовки твердой фазы для иммуноферментного анализа. Сущность изобретения включает сорбцию модификатора формулы R - (Х = O)_n, где R - ароматический радикал, X - азот, углерод, n = 1 - 2, на поверхность твердой фазы. Преимущество изобретения состоит в повышении чувствительности проводимого иммуноферментного анализа. 4 табл.

Изобретение относится к иммунологии и биотехнологии, в частности к гетерогенному иммуноферментному анализу (ИФА), более конкретно - к способу подготовки твердой фазы (пластмассовые планшеты, шарики, стеки и т.д.) для осуществления последующей сорбции биоспецифических лигандов и последующего проведения ИФА (А. Г. Мешандин и др. Положит.реш. по заявке N 92154556, 30.12.1992).

К недостаткам решения, принятого за прототип, относятся: недостаточная чувствительность искомого ИФА, его нестабильность, проистекающая от нестабильности диазосоединений-модификаторов, опасность работы из-за взрывчатости диазосоединений, необходимость осуществления модификации твердых фаз и проведения сорбции биолигандов только при низких температурах.

Задачей изобретения являются повышение чувствительности реакции ИФА, улучшение условий труда при модификации твердых фаз, возможность проведения данной процедуры в более широком температурном диапазоне.

Решение этой задачи достигается тем, что в качестве модификаторов используют соединения общей формулы R-(X=O)_n, где R-ароматический радикал; X-азот, углерод, n=1-2. Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1. Осуществляют модификацию полистирольных планшетов для ИФА фирмы "Медтехника" (Россия) по прототипу и по предлагаемому способу. В качестве модификаторов используют с-нитрозодиметиланилин (НДМА), динитрозобензол (ДНБ), нафтохинон (НХ); в качестве прототипа - диазосоединение на основе бензидина. Модификацию полистирольных фаз для ИФА осуществляют при 4^oC и 25^oC, в качестве антигена используют противокоревой иммуноглобулин человека, в качестве конъюгата - козьи поликлональные античеловеческие антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена, в качестве субстрата - ортофенилендиамин в цитрат-фосфатном буфере. Результаты эксперимента представлены в табл. 1.

Из данных табл. 1 явно видны преимущества заявляемого технического решения в сравнении с прототипом, по обеспечению большей стабильности сигнала и чувствительности реакции ИФА, возможности модификации твердых фаз при комнатной температуре.

Пример 2. Осуществляют модификацию полистирольных планшетов фирмы "Медтехника" по прототипу и по предлагаемому способу. В качестве прототипа используют диазосоединение на основе п-бутоксианилина, в качестве модификаторов используют нитрозобензол (НБ), динитрозобензол (ДНБ), бензохинон (БХ) нафтохинон (НХ). В качестве биолигандов используют противокоревой иммуноглобулин человека, антиген кардиолипиновый и антитела к поверхностному антигену рака молочной железы. В остальном постановка реакции не отличается от примера 1. Результаты эксперимента представлены в табл. 2.

Пример 3. Осуществляют модификацию полистирольных шариков для реакции ИФА производства фирмы "Уралхимпласт" по прототипу и по предлагаемому способу. В качестве прототипа используют диазосоединение на основе анилина, в качестве модификаторов-НДМА, ДНБ, БХ, НХ, в качестве биолигандов используют препараты, аналогичные примеру 2. Постановка ИФА не отличается от таковой в примерах 1-2, результаты эксперимента представлены в табл. 3.

Пример 4. Осуществляют модификацию лунок поливинилхлоридных планшетов для ИФА производства фирмы "Флоу" (Великобритания). В качестве прототипа и заявляемых модификаторов используют соединения, аналогичные примеру 3, в качестве биолигандов используют генно-инженерные антигены ВИЧ, фракцию 1 чумного микроба и козьи поликлональные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита B. Постановка реакции ИФА не отличается от примеров 1-3. Результаты эксперимента представлены в табл. 4.

Таким образом, из представленных примеров явно видны преимущества заявляемого технического решения в сравнении с прототипом.

Формула изобретения

Способ подготовки твердой фазы для гетерогенного иммуноферментного анализа, включающий сорбцию модификатора на поверхность твердой фазы, отличающийся тем, что в качестве модификаторов используют соединения общей формулы R - (X=O)_n, где R - ароматический радикал; X - азот, углерод; n = 1-2.

РИСУНКИ

Рисунок 1