Устройство для выделения белков из биологических тканей

 

Изобретение относится к лабораторной технике, а именно к устройствам для выделения белков из биологических тканей. Цель изобретения - ускорение процесса выделения и обеспечения возможности одновре

СОЮЗ СОВЕТСКИХ .СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5!)5 С 12 М 3/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

A //!

2 /Л

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4762411/13 (22) 27,11.89 (46) 23,11.91. Бюл. N 43 (71) Троицкий ветеринарный институт (72) А. И. Сердюк и В. А. Молоканов (53) 631.563,3 (088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

М 919740, кл. С 12 М 3/00, 1980, „„. Ж „„1693038 А1 (54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ТКАНЕЙ (57) Изобретение относится к лабораторной технике, а именно к устройствам для выделения белков из биологических тканей. Цель изобретения — ускорение процесса выделения и обеспечения возможности одновре1693038

40 зом

45 менной обработки нескольких проб. Устройство содержит корпус 1, стаканы 2 с пробирками 3. установленные в пластинах 5 и 6, мешалки 7 в виде стержней 8, укрепленные посредством гибкой втулки 10 на приводных валах, подключенных через ролики 13 и обИзобретение относится к области лабораторной техники, к устройствам для выделения белков из биологических тканей и их фракций для последующего анализа состава, свойств и количества фракций белков в тканях.

Целью изобретения является ускорение процесса выделения белков и обеспечение возможности одновременйой обработки нескольких проб.

На фиг. 1 изображено устройство, общий вид, сбоку, на фиг. 2 — разрез А-А на фиг. 1; на фиг. 3 — разрез Б-Б на фиг. 1; на фиг. 4 — узел! на фиг. 1; на фиг. 5 — вид В на фиг. 1.

Устройство для выделения белков из биологических тканей содержит корпус 1, расположенное в корпусе 1 средство для размещения биологической ткани, состоящее из расположенных равномерно по окружности стаканов 2 с пробирками 3, внутренняя поверхность 4 которых выполнена рифленой, и двух горизонтальных пластин,5 и 6 для крепления стаканов 2, установленных с воэможностью возвратнопоступательного перемещения в вертикальной плоскости, Устройство содержит узел перемешивания, включающий мешалки 7 в виде вертикально расположенных стержней 8, каждый из которых размещен над стаканом 2 и укреплен на приводном валу 9 посредством гибкой втулки 10 для эксцентрического вращения стержней 8. Мешалки

7 подключены к приводу 11 через общий приводной шкив 12 и ролики 13 для обеспечения их одновременного вращения. Пластина 5 снабжена винтовыми зажимами 4, пластины 5 и 6 установлены на вертикальных направляющих 15, Устройство работает следующим обраОслабив винтовые зажимы 14 опускают пластины 5 и 6 со стаканами 2 в нижнее положение, Подготовленный для исследования биологический материал помещается в пробирки 3 цилиндрической формы, внутренняя поверхность 4 которых выполнена рифленой для полноты перемешивания.

Пробирки 3 размещают в стаканах 2, плащий шкив 12 к приводу, После размещения образцов ткани в буферных растворах в пробирках 3 приводят в эксцентрическое вращение стержни 8, за счет чего происходит перемешивание и экстрагирование фракций белков ткани. 5 ил, стины 5 и 6 поднимают в верхнее рабочее положение и закрепляют винтовыми зажимами 14. В рабочем положении мешалки 7 должны быть погружены в исследуемый материал, находящийся в пробирках 3. Подготовленное к работе устройство помещают в холодильник и подключают к электросети.

Через привод 11 шкив 12 получает вращательное движение. Каждый ведомый ролик

13 соприкасается со шкивами 12 и за счет возникающих при этом сил трения получает от него вращение. При этом получают вращательное движение мешалки 7, которые благодаря гибким эластичным втулкам 10 вращаются эксцентрично по отношению к пробиркам 3 с исследуемым материалом.

Принцип выделения и разделения белков биологической ткани основан на различной их растворимости в солевых растворах различной концентрации. Саркоплазматические белки извлекаются из ткани растворами с низкой ионной силой, а миофибрильные белки — растворами с высокой ионной силой. Нерастворимый остаток ткани относится к белкам стромы.

В образцах ткани определяют азотистые экстрактивные вещества и белки: саркоплазматические, миофибриллярные, соединительно-тканные. Фракционирование проводят с учетом сокращения времени экстрасирования при использовании предлагаемого устройства.

Все операции проводят на льду, Ножницами предварительно измельчают мышцы на стекле, тщательно удаляя жировые прослойки и соединительную ткань, Затем на аналитических весах берут навеску и растирают с кварцевым песком.

Полученный гомогенат дважды экстрагируют по 2 ч и один раз в течение 1 ч, добавляя каждый раз по 10 мл фосфатного буфера. После каждой экстракции центрифугируют по 10 мин при 2500 об/мин. Таким образом получают около 30 мл раствора, содержащего саркоплазматические белки и остаточный азот. Скорость экстракции 50 об/мин.

Экстракт делят на две равные части, В одной половине определяют общий азот

1693038 саркоплазматических белков и азотистых экстрактивных веществ вместе, во второй половине осаждают саркоплазматические белки равным объемом 20 -ной трихлоруксусной кислоты в течение 12 ч. Осадок отфильтровывают через плотный фильтр и в полученном растворе определяют небелковый азот, Для извлечения миофибриллярных белков остаток мышечной ткани первый раз экстрагируют с 10 мл раствора Вебера (0,6

M КС!,0,01 М NazCOa, 0,04 М йаНСОз, рН

9,1) в течение 20 ч, центрифугируют и сливают надосадочную жидкость.

Вторую экстракцию производят с 10 мл

0,6 M KCI с прибавлением 2 мг АТФ (0,2 мл

1;,-ного АТФ) в течение 2 ч, затем центрифугируют, сливают надосадочную жидкость. Заключительную экстракцию с 10 мл раствора Вебера ведут в течение 1 ч, В объединенном тройном экстракте надосадочной жидкости определяют азот миофибриллярных белков, а в осадке — азот белков стромы.

Содержание белковых фракций и азотных экстрактивных веществ определяют по количеству азота.

Устройство позволяет создать однотипные условия при одновременном массовом проведении исследований при определении белков и белковых фракций в биологическом материале, проводить постоянное и тщательное перемешивание фаршеобразной массы в определенном буферном растворе. Применение устройства обеспечивает качественное фракционное разделение различных групп белков с последующим определением количества, состава и свойств белковых фракций, при этом результаты дальнейших исследований позволяют проводить сопоставительный анализ различных проб биологического материала за счет одно5 типности условий. Устройство также обеспечивает сокращение времени выделения и разделения белковых фракций при одновременном массовом проведении исследований.

Формула изобретения

Устройство для выделения белков из биологических тканей, содержащее корпус, расположенное в корпусе средство для раз15 мещения биологической ткани, и узел перемешивания и гомогениэации ткани, включающий привод, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью ускорения процесса выделения белков и обеспечения возможности

20 одновременной обработки нескольких проб, средство для размещения биологической ткани состоит из расположенных равномерно по окружности стаканов с пробирками, внутренняя поверхность которых

25 выполнена рифленой, и двух горизонтальных пластин для крепления стаканов в вертикальном положении, установленных с возможностью возвратно-поступательного перемещения в вертикальной плоскости, 30 при этом узел перемешивания содержит мешалки в виде вертикально расположенных стержней, каждый из которых размещен над стаканом и укреплен на приводном валу посредством. гибкой втулки для его эксцен35. трического вращения, причем мешалки подключены к приводу через общий приводной шкив для обеспечения их одновременного вращения, 1693038

1693038

Составитель H,añèïîâ

Редактор О.Юрковецкая Техред М.Моргентал Корректор Q.Êóíäðèê

Заказ 4051 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101