Способ клонального микроразмножения полыни лимонной

 

Изобретение относится к биотехнологии , в частности к методам клонального микроразмножения растений, и может быть использовано для ускоренного получения генетически однородного посадочного материала полыни лимонной. Цель изобретения - увеличение выхода посадочного материала. Для этого микроразмножение полыни лимонной осуществляют путем вычленения почечной меристемы-, высадки ее на агаризованную среду Мурасиге-Скуга, содержащую дополнительно, мг/л: кинетин 0,4 - 0,6; гибберелловая кислота 1,9 - 2,1; аденин 40 - 42; активированный уголь 5000 - tOOOO. Полученные побеги переносят на свежую среду Мурасиге-Скуга, содержащую , мг/л: кинетин 0,03 - 0,05; ферруловая. кислота 0,01 - 0,03; индолилуксусная кислота 0,9 - 1,1; активированный уголь 5000 - 10000. После микрочеренкования черенки пересаживают на среду, содержащую 0,04 - 0,06 мг/л кинетина и 0,9 - 1,1 мг/л индолилуксусной кислоты. Способ позволяет увеличить выход посадочного материала полыни в 10 раз и повысить приживаемость до 89-90%. 1 табл. fe

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51)5 А 01 Н 4/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ Й ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ (Л

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4745392/13 (22) 27.06.89 (46) 15.02.92. Бюл. N. 6 (71) Институт физиологии растений им.

К,А.Тимирязева и Ботанический сад (институт)АН МССР (72) Е,К.Спринчану, P.Ã.Áóòåíêî и М.В.БодРУГ (53) 581.143;6(088.8) (56) Бодруг М.В. Рекомендации по возделыванию полыни лимонной в Молдавии, Кишинев, 1980, Gautheret R. Leddet С, Paupardin С.

Genetlque selection, multiplication, sur

eamelioration genepis (Abtemlsia

umbelliformus) par culture de meristemes

Curr Acad Agr - Fr, 1984. ч. 70, N. 10, р.

1237-1246. (54) СПОСОБ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ ПОЛЫНИ ЛИМОННОЙ (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к методам клонального микроразмножения растений, и может быть

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к методам клонального мик- роразмножения растений, и может быть использовано для ускоренного получения генетически однородного посадочного ма; териала полыни лимонной.

Известен способ размножения полыни лимонной обычным черенкованием растет ния и дальнейшего укоренения черенков.

Однако этот способ не обеспечивает достаточного количества здорового посадочного материала.

Известен также способ клонального, микрочеренкования полыни зонтичной.

Этот способ заключается в вычленении rioиспользовано для ускоренного получения генетически однородного посадочного материала полыни лимонной. Цель изобретения — увеличение выхода посадочного материала, Для этого микроразмножение полыни лимонной осуществляют путем вычленения почечной меристемы; высадки ее на агаризованную среду Мурасиге- Скуга, содержащую дополнительно, мг/л: кинетин

0,4 — 0,6; гибберелловая кислота 1,9 — 2.1; аденин 40 — 42; активированный уголь 5000—

10000. Полученные побеги переносят на свежую среду Мурасиге-Скуга, содержащую, мг/л: кинетин 0,03 — 0,05; ферруловая, кислота 0,01 — 0,03; индолилуксусная кислота 0,9 — 1,1; активированный уголь 5000—

10000. После микрочеренкования черенки пересаживают на -среду, содержащую 0,04—

0,06 мг/л кинетина и 0,9 — 1,1 мг/л индолилуксусной кислоты. Способ позволяет увеличить выход посадочного материала полыни в 10 раз.и повысить приживаемость до 89-90%. 1 табл. чечной меристемы, высаживании ее на агаризованную питательную среду МурасигеСкуга, культивировании до получения побегов, перенос их на свежую среду Мурасиге-Скуга и культивировании до получения растений-регенерантов, микрочеренковании и пересадке черенков на питательную среду для получения пазушных побегов, которые затем черенкуют и культивируют на питательной среде без стимуляторов для укоренения.

Недостатком этого способа является невысокий выход посадочного материала.

Цель изобретения — увеличение выхода посадочного материала.

1711735 4 ные меристемы, состоящие из конуса нараПоставленна ц д я ель остигается путем тания и двух листовых примордиев. Затем ние по- их высаживают на агаризованную питательик о азмножения полыни стания

/ NH4NO 6 среду 5 КйОз1900; CaCi2 2Н20140; MgS04 7Н20370; ва КНРО 170 Нз О 6 2 МпЯО 4НО 22,3

СС1 6Н 00,025; С ВО. 5Н 00,025;Е ЯО е я Обего,nepevoc xHacse>Kyeсреду

SO 7Н 027,8; Na2 7ДТА1Н2037,3; фоучения растен астений-регенерантов, микроче- Fe а 10 евая кислота 0,5; рибофлавин 0,2; биотин ренкование р и пе есадку черенков на лиевая е ля получения пазуш- 1 Q тотенаткальция 1,0;пиридоксин 1,0; ,; пан питательную ср ду д

1 0 никотиновая кислота 2,0; цианных побегов, к р гов кото ые затем черенкуют и тиамин т на питательной среде ез ко алами б 3 ба амин 00015; холинхлорид 1,0; кинеf культивируют на в я коренения, причем тин,; ги

0 4 бберелловая кислота 1,9; аденин темы осуще- 15 40 сахароза 9000 активированный древесный голь 5000 агар-агар 7000 Меристеют 25 С т осигелы ге-Скуга, содержащую, жности воздуха 707;„освещенности 5000

0,6; гиббер 9 елловая кислота 1,9 — 2,1; аде- влажности в а фотопериоде 16 ч до развития побегов ктиви ованный уголь — лк, н . Пол ченные побеги переносят на высотои

20 0 5-0 8 см, которые микрочеренкуга, содержа- ют, переносят питательную среду следуюмг/л; кинетин 0,03 — щего состава, мг л: а 3 1; 3

/л: NH йОз1650; КйОз 1900; в —, - . С 2Н О l40; MgSO< 7H20 370; КН2РОа — 1,1; активиро- 170 НзВОз. 6,2; MnSOq 4H20 22,3; CoCl2 е ловая кислота 0,01 — 0,3; индо- . Са l2 .

5000 — 10000 а осле 25 6Н О0025 СО5Оа 5Н2О0025 п Оа н я че енки пересаживают 0,01; йа2Моца 2Н20 0,25; KJ 0,83; FeS04. на питательну - — йа ЭДТА 2Н20 3.,3; тиамин-HC на питательную среду Мурасиге-Скуга, со- 7Н20 27,8; йа2 Д е жащ ю, мг/л; кинетин 0,04 — 0,06; индо- 0,1, пиридоксин-НС0,5; никотиновая кисло0,9 — 1 1. та 0,5; глицин 2,0; кинетин 0,03; ферруловая лил кс сная кислота О, (). И стерипи- 30 кислота 0 01 „долилуксус„ая кислота 0

09

Пример 1 (по прототипу). зованного побега полыни активированный уголь 5QQQ; сахароза ют сотой 8 — 10 см вычленяю 10000; агар-агар 6000. Побеги культивиру ме истемы, состоящие из кон Уса нараста до получения растений-регенерантов высония и двух, листовых приморд

Р иев которые той 10-12 см, которые микрочеренкуют и высаживают на агаризованну ю среду со 35 высаживают в среду следующего состава, стоящ ю, мг/л: йНайОз l650; КйОз 1900 мг/л; йНайОз 1650; КйОз 1900; СаС)2 2 2

СВС!2 2Н20 140; М9ЯОа 7Н2О 370; КНгРОа 140; М93Оа 7Н20 370; КН2РОа 170; НзцОз

$0 4Н О 22,3; 6 2 MnSO4 4H20 22,3; СОС!2 6Н2О 0,025;

CoCi 6Н20 0,025; CuSO4 5Н20 0,025; Си$0а 5Н20 0 025; ZnS04 2

ZnSO4 5Н20,; а2 о а

О 0,01; N МООа 2Н20 0,25; KJ 40 йа2МоОа 2Н20 0,25; KJ 0,83; FeS04 7Н20

01

0,83; FeS04 2

7Н О 27,8; йа2ЭДТА 2Н20 27 8; Na2 ЭДТА 2Н20 37,3; тиамин-НС новая кислота

37,3; сахароза . е и

20000. Меристемы купьтиви- пиридоксин-HC 0,5; никотиновая кис

25 С относительной влажности - 0,5, глицин 2,0; кинетин 0, д у

04 ин олил ксусвозд ха70 / освещенности5000лк, нафо- ная кислота 09; сахароза 10; р

0000 ara -агар топериоде в течение ч до ра

16 звитиЯ по 45 6QQQ, После образования пазушных побегов

KoTopble их культивируют на питательной среде Му бегов высотой, —, см, ко еняпереносят на свежую сРедУ nP eeAeHHof0 расиге-Скуга без стимуляторов и у р пи е, состава. Побеги культивиру loT eTex>Keycllo ют, Результаты представлены в таблиц, астений- егенеРантов Пример 3. Вычленение и высаживание виях до получения растении-рег ят аналогично

Высотой см, 10-12 которыемикрочеренкуют 50 почечной меристемы проводят сеа ля и пересаживают на такую кую жe свежУю nvTa примеру 2, Однако питательная р д д тельную среду. осле о ра культивирования побегов содержит мг/л: ных побегов их культивиру

Руют на такой же кинетин 0,6; гибберелловая кислота 2,; дсвежей питательнои сред ере Gee стимупято нин 42; активированный уголь 10000.

Полученные побеги переносят на свеР ов и укореняют. ичРезультаты представле ны в таблице. жую среду, которая отличается от аналог

Пример 2. Из стер ной среды примера 2 содержанием, мг/л:

0 03 инпобега полыни лимоннои eb сотой 8 — 10 см кинетин 0,05; ферруловая кислота 0 03; вычленяют апикальные и пазушные почеч- долилуксусная кислота 1,1; aKTMBNpoeaHHblN

1711735

Формула изобретения

Составитель Л;Чучкина

Редактор Ю.Середа Техред М.Моргентал Короектор Т,Палий

Заказ 477 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 уголь 100000. Побеги культивируют до получения растений-регенерантов, которые микрочеренкуют и высаживают B среду, аналогичную примеру 2, но содержащую кинетин 0,06 мг/л и индолилуксусную кислоту 1;1 мг/л.

Культивирование пазушных побегов, их укоренение проводят аналогично примеру 2.

Пример 4. Вычленение и высаживание почечных меристем проводят как в при-мере 2. Однако питательная среда для культивирования меристем содержит, мг/л: кинетин 0,5; гибберреловая кислота 2,0; аденин 41; активированный уголь 7000, Полученные побеги переносят на свежую среду, которая отличается от аналогичную среды по примеру 2 содержанием, мг/л: кинетин 0,04; ферруловая кислота

0,02; индолилуксусная кислота 1,0; активированный уголь 8000.

Побеги культивируют до получения растений-регенерантов, которые микрочеренкуют и высаживают в среду, аналогично примеру 2, но содержащую кинетин 0,05 и индолилуксусную кислоту 1,0 мг/л, Культивирование пазушных побегов и их укоренение проводят аналогично примеру 2;

Сравнение количества посадочного материала, полученного по способу клонального микроразмножения с использованием питательных сред Мурасиге-Скуга с гормональными добавками и без них, Результаты, приведенные в таблице, показывают, что по сравнению со способом-прототипом предлагаемый способ обеспечивает прирост посадочного материала в 7-8 раз больше.

Преимуществом предлагаемого способа является также и то, что им можно получать растения круглый год независимо от времени года, занимая при этом небольшие площади.

Предлагаемым способом получают

5 здоровый, генетически однородный посадочный материал.

10 Способ клонального микроразмножения полыни лимонной, включающий вычленение почечной меристемы, высаживание ее на агаризованную питательную среду Мурасиге — Скуга, культивирование до получе15 ния побегов, перенос их на свежую среду

Мурасиге-Скуга и культивирование до получения растений-регенерантов, микрочеренкование и пересадку черенков на питательную среду для получения пазуш20 ных побегов, которые затем черенкуют и культивируют на питательной среде без стимуляторов для укоренения, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью увеличения выхода посадочного материала, высаживание по25. чечной меристемы осуществляют на агаризованную среду Мурасиге-Скуга, содержащую дополнительно, мг/л; кинетин—

0,4 — 0,6; гибберелловая кислота — 1,9 — 2,1; аденин 40 — 42; активированный уголь 5000—

30 10000, полученные побеги переносят на свежую среду Мурасиге-Скуга, содержащую дополнительно, мг/л: кинетин 0,03 — 0,05; ферруловая кислота 0,01 — 0,03; индолилуксусная кислота 0,9 — 1,1 и активированный

35 уголь 5000 — 10000, а после микрочеренкования черенки пересаживают на питатель- ную среду Мурасиге-Скуга, содержащую дополнительно кинетин 0,04 — 0,06 мг/л и индолилуксусную кислоту 0,9 — 1,1 мг/л, 40