Способ получения растений-регенерантов ячменя, устойчивых к гельминтоспориозу
Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано в селекционной практике при создании сортов злаковых культур, устойчивых к гельминтоспориоэу. Целью зобретения является повышение устойчивости растений-регенерантов к патогену. Способ состоит в том, что получают регенеранты из каллуса, выращиваемого на питательной среде Мурасиге-Скуга в присутствии селективного агента-токсина гриба H.Sativum. 3 табл.
союз советских социАлистичвских
РЕСПУБЛИК (я)э А 01 Н 4/00, 1/04
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4767215/13 (22) 12.12.89 (46) 30.12.91. Бюл. М 48 (71) Научно-исследовательский институт сельского хозяйства Северо-Востока им. Рудницкого Н.В. (72) Е.А.Родин, А.А.Ивановский, H.Ä.Ëÿëüкина и О.Н.Шуплецова (53) 578.085.23 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
М 1323046, кл, А 01 Н 1/04, 1984.
Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано в селекционной практике при создании устойчивых к фитопатогенам грибов — возбудителей болезней сортов элаковых культур, в частности ячменя.
Целью изобретения является повышеwe устойчивости растений-регенерантов к патогену.
Способ предусматривает выращивание каллусной ткани на среде Мурасиге и Скуга, содержащей селективный агент, с последующим получением регенерантов, при этом в качестве сепективного агента используют токсин гриба Heimlntosporlum satlvum.
Способ осуществляется следующим образом.
В качестве эксплантатов, которые высаживают на каллусогенную среду Мурасиге и
Скуга в пробирки с различными концентра%
„„5U,„, 1701 196 А1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕ-
ГЕНЕРАНТОВ ЯЧМЕНЯ, УСТОЙЧИВЫХ К
ГЕЛЬМИНТОСПОРИОЗУ (57) Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано в селекционной практике при создании сортов элаковых культур, устойчивых к гельминтоспориоэу. Цельюуэобретения является повышение устойчивости растений-регенерантов к патогену. Способ состоит в том, что получают регенеранты из каллуса, выращиваемого на питательной среде Мурасиге-Скуга в присутствии селектинного агента-токсина гриба Н.Sativurn. 3 табл. циями простерилизованного при помощи бактериального фильтра токсинов гриба
Н.sativum, используют незрелые зародыши ярового ячменя сортов Добрый и Дина. Перед высадкой эксплантаты стерилизовали в
5$ раствора хлорамина 15 мин. Эксплантаты вносят в среду М 1 с токсином гриба
Н sativum следующего состава:
Маточный раствор ЬЬ 1, г;
NH4NOg 8,25
КМОЗ 9,5
MgSO4 7Н20 1,85
МпЯ04 .5Н20 0,12
Zn4SG4 4Н20 0,043
CuS04 5Н20 0,000125
Доводят до 500 мл дистиллированной водой, откуда берут 100 мл.
Маточный раствор М 2, r:
КН2ОРО4
НзВОз
1701196
KJ 0,00415
N32MoO4 . 2HzO 0,00125 (растворяют отдельно в 10 мл подогретой НгО и берут 1 мл/л)
СоО2 6НгО 0,000125 (растворяют от- 5 дельно в 100 мл, откуда берут 1 мл/л).
Доводят до 500 мл дистиллированной водой и берут 100 мл.
Витамины, r:
Глицин 0,07 10
Витамин В> 0,005
Витамин Вв 0,005
Витамин РР 0,005
Растворяют в 100 мл дистиллированной
Н О, откуда берут 10 мл. 15
2,4 Дихлорфеноксиуксусная кислота 0,002 r
Хелат железа 10 thi3
Сахароза 25r
Агар 7г
CaCI2 0,332 r 20
Все компоненты смешивают и доводят до объема 1 л дистиллированной водой.
Образовавшийся каллус пересаживают на среду 1Ф 2 такого же состава, íî без токсина. Затем культивирование выживше- 25
ro каллуса ведут на органоченной среде М
3 следующего состава:
Раствор hL 1 100 мл
Раствор hb 2 100 мл
Хелат железа 10 мл 30
Витамины 10 мл
Гидролизат дрожжевой,1,0 г
СаС! г 0,332 г
ИУК (индолилуксусная кислота) 0,0005 г 35
Кинетин 0,01 r
Гиберелловая кислота 0,05 r
Сахароза 15г
Агар 7г и доводят до 1 л.дистиллированной Н О. 40
Эксплантаты культивируют на средах
М 1 и 2 при освещенности 5 — 6 тыс. лк, при
Т - 26 C и 16-часовом фотопериоде, а на . среде М 3 при Т - 15+ 17 С, освещенности
10-15тыс; лк, при фотопериоде 16 ч в тече- 45 ние 25-30 дней на каждой среде.
Полученные регенеранты в фазе 2-3 листьев высаживают в горшки со стерильным песком, затем в почвосмесь: дерновая зем- 50 ля — песок — торф 1;1;1 и устанавливают в вегетационную камеру (Т = 2-4 С) на 56-60 дней, После яровизации и депонирования растений-регенерантов семена от них испытывают на устойчивость к гельминтоспориозу.
Пример 1. Выборку доз для введения токсина в 1 каллусогенную селективную среду определяют эмпирически. Для этого первоначально устанавливают процент ингибирования корней однодневных проростКоВ семян ячменя токсином гриба (табл, 1).
Исходя из концентрации, которая ингибирует не менее 30 ф, роста центрального корня, подбирают дозы для введения в се-: лективную каллусогенную среду, Дозы подбирают эмперически примерно в 20 — 25 раз меньше найденной на проростках. Регенерационная способность каллусов ячменя приведена в табл. 2.
Пример 2, Полученные из выживших на селективной среде с токсином гриба каллусов регенеранты после выращивания на инфекционном фоне дают урожайность по сравнению с контролем в 1,6 раза выше.
Использование предлагаемого способа получения растений-регенерантов ячменя, устойчивых к токсину гриба Н.sativum, обеспечивает по сравнению с известным способом следующие преимущества: применение в качестве селективного фактора токсина гриба более экономично, он не содержит сопутствующих примесей, воздействие которых на каллус проявляется при использОвании культурального фильтрата; введение в питательную среду Мурасиra и Скуга определенных доз токсина гриба позволяет вести отбор регенерантов из минимального количества выживших каллусов.
Формула изобретения
Способ получения растений-регенеранТо8 ячменя, устойчивых к гельминтоспориозу, включающий выращивание каллусной ткани на среде Мурасиге-Скуга в присутствии селективного агента с последующим получением регенерантов, о т л и ч а ю щ ий с я тем, что, с целью повышения устойчивости растений-регенерантов к патогену, в качестве селективного агента используют токсин гриба Helmlntosporium sativum. 1701196
Таблица 1
Таблица 2
Регенерационная способность сортообразцов ячменя на селективной среде с токсином
Таблица 3
Показатели продуктивности при выращивании на инфекционном фоне семян, полученных от устойчивых к фитотоксинам гриба Н. satlvum растений-регенерантов
Составитель В.Демкин
Техред M.Mîðãåíòàë Корректор Л.Патай
Редактор Л.Павлова
Заказ 4485 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Воздействия фитотоксинов гриба Н.satlvum на длину корней однодневных проростков ячменя
