Способ определения нарушения проницаемости мембран эритроцитов

 

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим методам исследования, и может быть использовано для определения нарушения проницаемости мембран эритроцитов. Цель изобретения - упрощение способа. Цель достигается тем, что измеряется электропроводность плазмы и гемолизата эритроцитов и по соотношению их устанавливается индекс ионной проницаемости, при величине которого 0,1 и выше определяют нарушение проницаемости эритроцитов.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)з G 01 N 33/96

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4268042/14(22) 26.06.87 (46) 15.02;92 . Бюл. N. 6 (71) Киргизский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии (72) Ф.M.Ãðèãoðüåâà и А,А.Ильин (53) 612.015 (088.8) (56) Метод биохимических исследований.

/Под ред. М.Н.Прокоровой, 1977. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЯ ПРОНИЦАЕМОСТИ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ

Изобретение относится к медицине, а именно к методам исследования проницаемости эритроцитов, Цель изобретения — упрощение и повышение точности способа.

Цель достигается за счет исследования электропроводности плазмы и гемолизата эритроцитов и расчета соотношения измеренных показателей, по которому определяют наличие нарушений мембран эритроцитов.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь из локтевой вены встряхивают 8—

10 мин в пробирке с бусами. Затем ставят в термостат под углом 45 на 45 — 60 мин. Отбирают плазму с верхним слоем лейкоцитов и эритроцитов, повторно центрифугируют эритроциты 10 мин при 1500 об./мин. Отбирают плазму и объединяют ее с первой порцией. Пастеровской пипеткой со дна собирают 0,1 — 0,2 мл эритроцитов и переносят в чистую пробирку, три раза проводят. Ж 1712886 Al (57) Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим методам исследования, и может быть использовано для определения нарушения проницаемости мембран эритроцитов. Цель изобретения— упрощение способа. Цель достигается тем, что измеряется электропроводность плазмы и гемолизата эритроцитов и по соотношению их устанавливается индекс ионной проницаемости, при величине которого 0,1 и выше определяют нарушение проницаемости эритроцитов. процедуру замораживания — оттаивания.

Отбирают гемолизат и помещают в капилляр, в другой капилляр помещают плазму, вставляют в оба конца капилляра электроды, термостатируют (15-250С) и измеряют электропроводность. В качестве прибора для измерения электропроводности используют омометр с переменным током, а показатель проницаемости рассчитывают по формуле

Элект on оводность плазмы

Электропроводность гемолизата

Известный способ построен на оценке

АТФ-активности опосредованного критерия, по которому могут судить о проницае мости мембран эритроцитов только для катионов (Na, К, Са, Mg и Н ), Он включает 16 приемов (не считая приемы метода при определении белка по Лоури), довольнс громоздких, со сложными расчетами. Актив ность АТФ выражается в количестве продук та реакции, образуемого в единицу времен и отнесенного к единице массы белка.

1712886

55

Из приемов известного способа наиболее сложными являются получение "теней" эритроцитов путем добавления буфера с постепенно снижающейся концентрацией эритроцитов (при этом нужно добиваться вымывания гемоглобина из оболочки эритроцита без разрыва мембраны на части), определение раздельно Na++ К -АТФ; Mg — АТФ и Са2+ — АТФ (что требует больших затрат времени). О проницаемости мембран эритроцитов судят только по активному транспорту катионов(йа+, К, Са2, Mg ), не учитывая транспорт анионов (CI НСОз, Р04 и т.д.).

В мембране эритроцитов имеются анионные каналы, делающие мембрану эритроцита проницаемой для НСОз, СГ и т.д., причем перенос их через мембрану осуществляется пассивно, т,е. без гидролиза АТФ.

Предлагаемый способ прост в выполнении и доступен, Для оценки проницаемости мембран по предлагаемому способу используют амперметр и методику определения электропроводности. Метод доступен для освоения на уровне лаборанта.

Для сравнения достоверности обоих методов было обследовано 30 проб крови, из них 20 проб были с функциональной нагрузкой в виде гипо- и гипертонических сред для инкубации отмытых эритроцитов. Такое модельное исследование эритроцитов приводит к существенному перераспределе нию заряженных частиц в гемолизате, что может являться прямым следствием в вынужденном изменении как пассивного, так и активного транспорта ионов через мембраны.

В таблице приведены результаты анализа (30 проб) крови, проведенного двумя методами.

Из таблицы следует, что проницаемость мембран изменилась, если брать во внимание средние величины (М fll), как при определении АТФ-активности, так и по индексу ионной проницаемости (4р), причем закономерность в изменении проницаемости мембран эритроцитов обоими методами сохраняется, но если учесть, что кровь взята от одного донора, полученные размахи от

5 максимума до минимума по АТФ-активности с 1-й до 10-й пробы больше в 4:раза, с

10-й по 20-ю — в 3,7 раза. а с 21-й по 30-ю— в 8,5 раза, что свидетельствует о низкой воспроизводимости известного метода.

10 При определении индекса ионной проницаемости размах во всех трех вариантах колебался только от 1,0 до 1,2 раза, что свидетельствует о повышении точности предлагаемого метода в 4,8 раз по сравнению с

15 базовым. Кроме того, более ярко выражен процесс, нарушения проницаемости мембран эритроцитов по индексу между контролем (контакт эритроцитов с плазмой) и опытными пробами.

20 Необходимо обратить внимание на перекрестные значения величин АТФ-активности. Очень близкие величины . АТФ-активности были (например, в опытах

1 и 21, или 2, 11 и 22, или 4, 12, 24 и т.д.), хотя

25 условия опыта в них различные.

При определении проницаемости мембран эритроцитов по предлагаемому способу перекрестных величин, близких по значению, не имеется, что также подтверждает

30 точность предлагаемого метода, в несколько раз превышающую точность базового метода определения проницаемости мембран эритроцитов по АТФ-активности.

Ф о р м у л а. и з о б р е т е н и я

35 Способ определения нарушения проницаемости мембран эритроцитов путем исследования физико-химических свойств эритроцитов, отличающийся тем, что, с цель|о упрощения и повышения точности

40 способа, исследуют электропроводность плазмы крови и гемолизата эритроцитов, рассчитывают отношение полученных величин и при его значении выше 0,14 и ниже

0,10 определяют нарушение..

1712886

Е Е

2 о«

z аО . С +

„o

ca Ca

-ай са о

О

Ф с о

I2 с о о

S

I» о о

S

Z о

2 с о

C зЯ о х

Jl ф о о Д о

z с с с и

hC

4) о

I»

=Г о

S а о

S о

C а

Щ

Z са о

C о

СЭ

I»

М са

Z

I»

2 с о

Ф с

СЪ

О с

Е

CL .0 с о

Е

I2 с о.0 з с о о

ca о

z с с с

2 с.о о с

ID

E Ф

Е о о о

Е и

S о

С1

Е:

1сС

ЪС

Е gz Î

2 о« о + а ca «+

„o

МЪ ( о c1Z

E y

z aO

* о— ф . в «+ о са а2

Е Е

2 D

z Î

1 Oh++ ф щ +

ССЪ CIО щ са о c1Z

CD CO О О СЧ В В О О СЪ ввлллллвввФ!1

oooooooooo

oooooooooogg

С1 сч с ъ ч- в в л ао в о

СЧ N СЧ СЧ СЧ N СЧ СЧ СЧ С Ъ сч сч о о о о с ъ в со Ъ л л tco cocoao ф coco 1 оооооооооо Я о

Сч С Ъ ССЪ. В Л В В О

° ° ° е е» ° е»wN

DID ID CD COOO < ьо - -счсчсч ц O

° ° %%»ttа Е»ач»

OOOQOQQOQO3+

1 о

IA ,CD

О сч в ef о - - Ф в в Съ О

co cD cD t с ъ в в т cD aa Ц Ф!

СЧ CD t CO О О О В О С Ъ

О О О О c N СЧ g r

СЧ сч с ъ з о в л в в о

N СЧ СЧ СЧ N СЧ СЧ СЧ СЧ С Ъ

IA

CD

eooNcDtcDo Ъ счcDIDCIIС эяaot вt ф ф

О О - N СЧ СЧ СЧ СЧ g В л

«Сч С Ъ Ct О CD P CO 0) О

%- %- ч- %- %- %- %- %- СЧ

С9

СЧ .С. вс„л„ЬN В CD CO CO CJI DI СЬ O авэ лосълсъл y)fj оооооооо

CO